Реагенты для ПЦР-анализа в режиме реального времени к анализаторам Cobas TaqMan48/ Cobas TaqMan — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
=== файл: Инструкция_руководство__o41320_I.pdf ===
--- стр. 5 ---
Материалы, предоставляемые ROCHE . л
Для детекции РНК ВИЧ-1 (групп М и О), ВИЧ-2, ВГС и ДНК ВГ в образцах плазмы нобходимы и .{
предоставляются три набора: 1) Тест cobas TaqScreen МРХ, 2) Набор контролен cobas TaqScreen МРХ, и 3) . {
Промывочный реагент cobas TaqScreen. Сведения по безопасности данных материалов могут быть получены . t
по запросу в местном представительстве Roche. , ]
Тест cobas TaqScreen МРХ
(P/N: 04584244 190)
МРХ CS1
(Кассета с магнитными стеклянными частицами)
МРХ CS2
(Кассета с лизирующим реагентом)
МРХ CS3
(Мульти-реагентная кассета МРХ)
МРХ CS4
(Кассета тест-специфичных реагентов МРХ)
Набор контролен cobas TaqScreen МРХ
(P/N: 04626290 190)
HIV-1 М (+) с
(HIV-1 М позитивный контроль)
HIV-1 О (+) с
(HIV-1 О позитивный контроль)
HIV-2 (+) С
(HIV-2 позитивный контроль)
HCV (+) с
(HCV позитивны контроль)
HBV (+) с
(HBV позитивный контроль)
TS (-) с
[cobas TaqScreen негативный контроль (человеческая плазма)]
Промывочный реагент cobas TaqScreen
(P/N: 04404220 190)
TS WR
(промывочный реагент cobas TaqScreen)
МРХ
МРХ CTL
TS WR
96 Tests
IH
6 Sets
5.1 L
Другие необходимые материалы, приобретаемые отдельно
(могут быть приобретены в ROCHE)
Постановка данного теста должна проводиться в системе cobas s 201. Система cobas s 201 должна |
устанавливаться и использоваться как единая закрытая система. Отдельные компоненты cobas s 201 не могут
использоваться как отдельное оборудование или заменяться на другие компоненты. Входящие в состав
системы cobas s 201 компоненты перечислены ниже.
Приборы и программное обеспечение системы cobas s 201
• Дозатор HAMILTON Microlab STAR IVD, рабочая станция и программное обеспечение
• Прибор COBAS AmpliPrep
• Анализатор COBAS TaqMan
• Станция и программа AMPLILINK
• Сервер Roche PDM Data Manager, станция и программное обеспечение
Штативы и расходные материалы
• Штативы для образцов COBAS AmpliPrep (SK24) (P/N: 28122172001)
• Штативы SPU COBAS AmpliPrep (P/N: 28122806001)
• Штативы для реагентов COBAS AmpliPrep (P/N: 28122199001)
• Элементы для обработки образцов (SPU): (P/N: 03755525001)
• Входящие пробирки для образцов (S-пробирки) со штрих-кодовыми клипсами (P/N: 03137040001)
• Штативы К-наконечников (P/N: 03287343001)
4
--- стр. 6 ---
Упаковка К-пробирок 12x96 (P/N: 03137082001)
К-платформа COBAS TaqMan (P/N: 28150397001)
Наконечники CO-RE (1000 pL), filter (P/N: 04639642001)
Архивные плашки со штрих-кодовой маркировкой (P/N: 04639634001)
Крышки для архивных плашек (P/N: 04789288001)
Подставка на 24 тест-пробирки (P/N: 04639502001)
Подставка на 32 тест-пробирки (P/N: 04639529001)
Подставка для наконечника (P/N: 04639545001)
Подставка для архивной плашки (P/N: 04639553001)
Подставка для штатива SK24 (P/N: 04639600001)
Дезинфицирующий спрей Microcide SQ™ или HAMILTON (P/N: 04864425001)
Одноразовые перчатки, без талька
Реагенты
Гест cobas TaqScreen МРХ Test
(P/N: 04584244 190)
МРХ CS1
MGP
(Магнитные стеклянные частицы)
Магнитные стеклянные частицы
93% Изопропанол
Xi \ЖЖ] 93% (w/w) изопропанол
МРХ
□
Осторожно
F
ё
93% (w/w) изопропанол
Пожароопасно
МРХ CS2
LYS
(Лизирующий реагент)
Дигидрат цитрата натрия
42.5% гуанидин тиоцианат
< 14% полидоканол
0.9% дитиотрейтол
Хп | А 42.5% (w/w) гуанидин тиоцианат
Осторожно
МРХ CS3
Pase
(Раствор протеиназы)
TRIS буфер
< 0.05% ЭДТА
Хлорид кальция
Ацетат кальция
< 7.8% протеиназы
Глицерин
Xn HibjF! 7.8% (w/w) Протеиназа
Осторожно
96 тестов
2 х 48 тестов
2 х 7.0 мл
2 х 48 тестов
2 х 78 мл
2 х 48 тестов
2 х 3.8 мл
5
--- стр. 7 ---
2x7.0 млЕВ
(Буфер для элюции)
TRIS буфер
0.2% Метилпарабен
МРХ CS4 2 х 48 тестов
МРХ MMX-R1
(МРХ реагент 1 мастермикса) 2 х 3.0 мл
TRIS буфер
Ацетат калия
Ацетат марганца
Г лицерол
Бетаин
0.08% азид натрия
МРХ MMX-R2
(МРХ реагент 2 мастермикса) 2 х 2.5 мл
Трициновый буфер
Хлорид калия
Г идроксид калия
<21% диметил сульфоксид
Г лицерин
ЭДТА
Твин 20
Игепал СА630
< 0.09% dATP, dGTP, dCTP, dUTP, dTTP
< 0.01% прямые и обратные праймеры для ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-2, ВГС, ВГВ
< 0.01% меченые флуоресцентными красителями зонды для ВИЧ-1, ВИЧ-2, ВГС, ВГВ
< 0.01% меченые флуоресцентными красителями зонды для внутреннего контроля (ВК)
< 0.01% олигонуклеотидный аптамер
< 0.07% ДНК-полимераза Z05 (бактериальная)
< 0.4% фермент AmpErase [урацил-Ы-гликозилаза] (бактериальный)
0.08% азид натрия
МРХ 1C
(Внутренний контроль МРХ) 2 х 15 мл
TRIS буфер
< 0.002% Поли гА РНК (синтетическая)
ЭДТА
0.05% азид натрия
< 0.001% Неинфекционная, синтетическая РНК внутреннего контроля
в защитной оболочке бактериофага MS2
MPXCTLНабор контролей cobas TaqScreen МРХ
(P/N: 04626290 190)
HIV-1 М (+) с
(HIV-1 М позитивный контроль)
< 0.001% неинфекционная, синтетическая РНК ВИЧ-1 группы М
в защитной оболочке бактериофага MS2.
Негативная человеческая плазма, нереактивная в лицензированных средствах
по антителам к ВГС, антителам к ВИЧ-1/2 и HBsAg;
РНК ВИЧ-1, РНК ВИЧ-2, РНК ВГС и ДНК ВГВ не выявляются в ПЦР
0.1% РгоСНп 300
Xi ГЖЖ1 (3:1) сочетание 5-хлор-2-метил-2Н-изотиазол-3-один
и 2-метил-2Н-изотиазол-3-один
Осторожно
6 наборов
6 X 1.6 мл
6
--- стр. 9 ---
TS (-) с
(Негативный контроль cobas TaqScreen)
Негативная человеческая плазма, нереактивная в лицензированных средствах
по антителам к ВГС, антителам к ВИЧ-1/2 и HBsAg;
РНК ВИЧ-1, РНК ВИЧ-2, РНК ВГС и ДНК ВГВ не выявляются в ПЦР
0.1% РгоСНп 300
Xi (3:1) сочетание 5-хлор-2-метил-2Н-изотиазол-3-один
и 2-метил-2Н-изотиазол-3-один
Осторожно
R43: может вызывать раздражение при попадании на кожу
Промывочный реагент cobas TaqScreen
(P/N: 04404220 190)
TS WR
(Промывочный реагент cobas TaqScreen)
Дигидрат цитрата натрия
0.1% метилпарабен
TS WR
6 х 1.6 мл
5.1л
Требования по хранению и работе с набором
A. Комнатная температура составляет 15 - 30°С.
Б. Не замораживайте реагенты или контроли.
B. Храните МРХ CS1, МРХ CS2, МРХ CS3 и МРХ CS4 при 2 - 8°С. Эти реагенты стабильны до истечения
указанного срока годности.
Г. После начала использования реагенты стабильны в течентие 30 дней при 2 - 8°С или до истечения срока
годности, если оно наступает раньше.
Д. Реагентов достаточно до 6 постановок в приборе, что составляет до 30 часов работы прибора COBAS
AmpliPrep. В переыве между работой реагенты должны храниться при 2 - 8°С.
Е. Реагенты стабильны в течение 24 часов непрерывной работы прибора COBAS AmpliPrep.
Ж. Храните HIV-1 М (+) С, HIV-1 О (+) С, HIV-2 (+) С, HCV (+) С, HBV (+) С и TS (-) С при 2 - 8°С.
Контроли стабильны до истечения указанного срока годности. После открытия пробирки неиспользованную
порцию необходимо выбросить.
3. Храните TS WR при 15 - 30°С. Неоткрытый TS WR стабилен до истечения указанного срока годности.
После открытия данный реагент стабилен в течение 30 дней при температуре 15 - 30°С или до истечения срока
годности, если оно наступает раньше.
Требования безопасности
Для диагностики IN VITRO.
А. Образцы могут быть инфекционными. Соблюдайте Общие Требования Безопасности при постановке
теста27,28. Данную постановку могут выполнять только сотрудники, имеющие опыт работы с тестом cobas
TaqScreen МРХ и прошедшие обучение работе с инфекционным материалом. Тщательно очищайте и
дезинфицируйте все лабораторные рабочие поверхности свежеприготовленным 0.5% раствором гипохлорита
натрия в дисиллированной или деионизованной воде, после этого протирайте поверхности 70% этанолом.
Б. Осторожно: HIV-1 М (+) С, HIV-1 О (+) С, HIV-2 (+) С, HCV (+) С, HBV (+) С и TS (-) С содержат
человеческую плазму, полученную из крови человека. Исходный материал тестировался и нереактивен
по антителам к ВИЧ-1/2, антителам к HCV, и HBsAg. Исходный материал также тестировался в cobas
TaqScreen МРХ. При тестировании негативной человеческой плазмы в ПЦР не выявлены РНК ВИЧ -1
(групп М и О), РНК ВИЧ-2, РНК ВГС и ДНК ВГВ. Ни один из существующих методов не дают полной
гарантии отсутствия инфекционных агентов в продуктах крови человека. Все материалы, полученные
из крови человека должны рассматриваться как потенциально инфекционные, при работе с которыми
необходимо соблюдать Общие Требования Безопасности. При разлитии материала немедленно
дезинфицируйте поверхность свежим 0.5% раствором гипохлорита натрия или следуйте установленным
предписаниям.
8
--- стр. 10 ---
Соблюдайте стандартные лабораторные меры безопасности. Не пипетируйте ртом. В рабочих зонах
Зоратории запрещено есть, пить, курить. При работе с образцами и реагентами набора пользуйтесь
норазовыми перчатками, лабораторными халатами и защитой для глаз. После работы с образцами и
агентами набора тщательно мойте руки.
МРХ MMX-R1, МРХ MMX-R2 и МРХ 1C содержат в качестве консерванта азид натрия. Не пользуйтесь
таллическими емкостями для переноса этих реактивов. При сливе растворов, содержащих азид, в
нализацию, их необходимо смывать большим количеством воды, во избежание накопления азида в
:таллических трубах и опасности взрыва.
Показано, что гепарин ингибирует ПЦР. Не используйте гепаринизированную плазму в данной
*становке.
Рекомендуется использование в работе стерильных одноразовых пипеток и свободных от нуклеаз
псонечников. Перекрестная контаминация вследствие неосторожной работы с образцами может привести к
)жнопозитивным результатам теста.
Для оптимального выполнения теста пользуйтесь только прилагаемыми к набору или рекомендованными
юходными материалами.
Соблюдайте правила работы в лаборатории при обработке образцов и контролей для предотвращения
грекрестной контаминации.
Перед началом работы визуально осмотрите каждую кассету реагентов, пробирки контролей и
роиывочный реагент, убедитесь в отсутствии протекания. При следах протекания не используйте этот
атериал в постановке.
;. Утилизируйте все материалы, контактировавшие с образцами и реагентами в соответствии с
осударственными, федеральными и местными правилами.
I. Не используйте набор cobas TaqScreen МРХ Test, набор контролей cobas TaqScreen МРХ или промывочный
)еагент cobas TaqScreen после истечения срока годности. Не заменяйте, не смешивайте и не сочетайте
зеагенты из разных наборов или разных серий. Не загружайте реагенты разных серий в прибор COBAS
\mpliPrep.
VI. Сведения по безопасности материалов могут быть получены по запросу в местном представительстве
£oche.
i. Избегайте попадания реагентов на кожу, в глаза или на слизистую. При попадании немедленно смойте
юльшим количеством воды, в противном случае может произойти ожог. При разлитии реагентов смойте
х водой, прежде чем вытирать. Не допускайте контакта LYS, содержащего гуанидин тиоцианат, с
аствором гипохлорат а натрия. При их смешивании может выделяться токсичный газ.
. Внимательно следуйте инструкции для правильного выполнения постановки. Любое отхождение от
ютрукции может приводить к нарушению выполнения теста.
. Избегайте использования гемолизированных образцов.
Контаминация образцов плазмы красными клетками крови (> 2.5%) может ингибировать тест cobas
С . Не используйте ни
.-кодами маркировки.
Подготовка реагентов
А. Перед началом работы оставьте набор контролей cobas TaqScreen МРХ при комнатной температуре на 31)
минут. Поместите реагенты cobas TaqScreen МРХ Test за 30 минут до начала работы в прибор COBAS
AmpliPrep.
Сбор образцов, хранение и пулирование
Внимание: Все образцы необходимо рассматривать как потенциально опасные.
А. Для постановки в тесте cobas TaqScreen МРХ используются образцы плазмы, собранные с ЭДТА, CPD,
CPDA1, CP2D, ACDA и 4% цитратом натрия.
Следуйте инструкциям производителя пробирок для образцов.
Б. Кровь собранная с ЭДТА может храниться при 2 — 30°С до 72 часов со времени сбора, после этого может
храниться еще два дня при 2 - 8°С. Для хранения более пяти дней отделите плазму от красных клеток крови
центрифугированием при 800 — 1,600 х g в течение 20 минут. После отделения плазмы она может храниться
> при 2 - 8°С еще семь дней. Также плазма может храниться при < -20°С длительное время.
9
--- стр. 11 ---
зо -
ио
оЗ0
1о<ис
S(UН
20 -
10 -
2 - 30° С
Цельная
кровь
Антикоагулянт ЭДТА
2-8° С
Плазма
0 1
— i-------1---------1--------г-
6 7 8 9
Дни после сбора
—i-----1---------------1 -----1---------1
10 11 12 13 14 15
В. Кровь собранная с CPD, CPDA1 или CP2D может храниться до 72 часов при 2 - 30°С до отделения плазмы.
После центрифугирования образцов с CPD, CPDA1 или CP2D при 800 - 1,600 х g в течение 20 минут, плазма
может храниться еще семь дней при 2 - 8°С. Отделенная от красных клеток крови плазма может храниться при
< -20°С длительное время.
2-ЗОРС
Оо
сЗ0
1DШС
S< оН
30
20
10
0
Антикоагулянт CPD, CPDA1 или CPD2D
2 - 83 С
0 1
— I—
5
Плазма
-1------1--------1--------г-
6 7 8 9
Дни после сбора
10 11 12 13 14 15
Г. Аферезная плазма с ACDA или 4% цитратом натрия в качестве антикоагулянта может храниться до 72 часов
после забора крови при 2 - 30°С, или более длительное время при < -20°С.
Д. Приведенные ниже рекомендации по объему плазмы основаны на раскапывании из 13 х 100 мм стеклянных
или пластиковых донорских пробирок в дозаторе HAMILTON STAR.
Данные объемы приведены для плазмы, расположенной над отделенными красными клетками крови,
предназначенной для постановки в тесте cobas TaqScreen МРХ.________________
Тип пула Минимальный объем
плазмы
Первичный пул из 6* 3 мл
Первичный пул из 1* 3 мл
Повторный пул из
пробирки
1,5 мл
Разбираемый пул из
пробирки
2 мл
Повторно реактивный 3 мл
10
--- стр. 12 ---
* Включает создание архивной плашки
I. Не замораживайте цельную кровь.
К. Показано, что гепарин ингибирует ПЦР. Использование гепаринизированных образцов не
>екомендуется.
I. Закрытые архивные плашки могут храниться при 2 - 8 °С до семи дней после отделения плазмы от красных
слеток крови.
\. Три цикла замораживания/оттаивания не оказывают влияния на результат теста.
С Перед началом работы доведите пулированные или индивидуальные образцы до комнатной температуры.
(I. Пользователь должен проверить прочие условия сбора и хранения образцов. Если образцы подлежат
гранспортировке, они должны быть упакованы и промаркированы в соответствии с федеральными и
международными правилами транспортировки образцов и этиологических агентов.29
М. Ложнопозитивные результаты могут быть получены из-за перекрестной контаминации образцов во
время сбора и обработки образцов.
H. Пулирование и раскапывание образцов
I. В системе cobas s 201 System для раскапывания и пулирования используется дозатор HAMILTON Microlab
STAR IVD. HAMILTON STAR считывает штрих-коды и проводит пулирование равных объемов образцов.
2. Если в тесте cobas TaqScreen МРХ выявлены реактивные пулы, HAMILTON STAR раскапывает
индивидуальные образцы из архивных плашек или исходных пробирок с образцами для нового тестирования.
Примечания к постановке
A. Оборудование
1. Подготовьте систему cobas s 201 к работе в соответствии с инструкциями в Руководстве пользователя.
2. Выполните необходимые сервисные действия для приборов.
Б. Реагенты
1. Реагенты теста cobas TaqScreen МРХ необходимо поместить за 30 минут до начала работы в прибор COBAS
AmpliPrep. Набор контролей cobas TaqScreen МРХ и промывочный реагент cobas TaqScreen необходимо
довести до комнатной температуры перед началом работы. См. условия хранения реагентов в разделе
Требования по хранению и работе с набором.
2. Каждый набор теста cobas TaqScreen МРХ содержит реагенты, рассчитанные на проведение 96 тестов.
3. Все контроли предназначены для однократного использования.
4. Система не допускает использования регентов из разных серий, а также превысивших число постановок или
время пребывания загруженными в приборе, реагентов с истекшим сроком годности, и кассет из разных
наборов.
B. Обработка образцов
1. Избегайте контаминирования перчаток при работе с образцами и контролями.
2. Не допускайте контаминации образцов и контроля TS (-) позитивными контролями.
Г. Разделяющее тестирование
1. До проведения разделяющего тестирования убедитесь, что образец выявлен в пуле с прошедшей
постановкой, а также что прошла постановка теста cobas TaqScreen МРХ для индивидуального образца. Этот
реактивный индивидуальный образец может быть протестирован в тестах COBAS AmpliScreen HBV Test,
COBAS AmpliScreen HCV Test, v2.0 и COBAS AmpliScreen HIV-1 Test, vl.5. Могут потребоваться
дополнительные тесты для выявления ВИЧ-1 группы О и ВИЧ-2. Roche не предоставляет разделяющих тестов
для выявления ВИЧ-1 группы О и ВИЧ-2.
2. См. описание постановок разделяющих тестов во вкладышах к наборам COBAS AmpliScreen HBV Test,
COBAS AmpliScreen HCV Test, v2.0 и COBAS AmpliScreen HIV-1 Test, vl.5.
Инструкции по постановке теста
Постановка в системе cobas s 201 включает в себя четыре этапа: раскапывание образцов и контролей в
дозаторе HAMILTON STAR, обработка образцов в приборе COBAS AmpliPrep с использованием теста cobas
TaqScreen Multiplex (МРХ), Амплификация/Детекция в анализаторе COBAS TaqMan и анализ результатов.
Каждый набор теста cobas TaqScreen МРХ содержит восемь кассет: две кассеты МРХ CS1 с магнитными
частицами, две кассеты МРХ CS2 с лизирующим реагентом, две кассеты МРХ CS3 с протеазой и буфером для
элюции, и две кассеты МРХ CS4 с ВК, реагентом 1 ММХ и реагентом 2 ММХ. Этот набор предназначен для
11
--- стр. 13 ---
использования вместе с набором контролей cobas TaqScreen МРХ и промывочным реагентом cobas TaqScreen
МРХ.
Не открывайте кассеты. Не смешивайте реагенты из разных серий или разных флаконов одной серии. Не
смешивайте реагенты (в том числе кассеты) из разных наборов. Не загружайте реагенты разных серий в прибор
COBAS AmpliPrep. Не вынимайте пробирки контролей из адаптеров.
Проводите все необходимые сервисные действия согласно Руководству пользователя.
См. Подробные инструкции по эксплуатации в Руководстве пользователя cobas s 201.
A. Раскапывание контролей и образцов в дозаторе HAMILTON STAR
Внимание: Избегайте контаминирования перчаток при работе с контролями и образцами.
Внимание: Не перемешивайте контроли на вортексе.
1. Включите дозатор HAMILTON Microlab STAR IVD, запустите руководство по пулированию (Pooling
Wizard) Roche PDM следую инструкциям на экране.
2. Соблюдайте осторожность, чтобы не повредить штрих-коды на образцах и контролях.
3. Загрузите образцы, расходные материалы и контроли в дозатор HAMILTON Microlab STAR IVD. После
завершения загрузки прибор перенесет образцы и контроли в S-пробирки.
4. После завершения раскапывания, просмотрите сигнальные значки, распечатайте отчет(-ы) о пулировании
Осмотрите пули и лунки архивных плашек. Негодными являются пулы и/или лунки, контаминированные
красными клетками крови или содержащие недостаточный объем.
5. Закройте S-пробирки и перенесите штатив(-ы) SK24 в прибор COBAS AmpliPrep для выделения
нуклеиновых кислот.
6. Закройте и поместите на хранение архивные плашки (если плашки были созданы при раскапывании).
7. Закройте и храните донорские пробирки. См. Описание условий хранения в разделе “Сбор, хранение и
пулирование образцов”.
8. Удалите и выбросьте пробирки контролей. (Пробирки с контролями предназначены для однократного
использования.)
Б. Подготовка и загрузка реагентов теста cobas TaqScreen МРХ
Внимание: Соблюдайте осторожность, чтобы не повредить маркировку кассет. Сканер штрих-кода
прибора COBAS AmpliPrep автоматически считывает штрих-коды кассет при загрузке штативов
реагентов в прибор.
1. Поместите реагенты в прибор COBAS AmpliPrep за 30 минут до начала обработки первого образца. Более
никакой подготовки не требуется.
2. Перед запуском убедитесь, что загружено количество кассет, достаточное для обработки всех образцов во
время непрерывной работы прибора COBAS AmpliPrep. В каждой кассете содержатся реагенты на 48 тестов.
См. Сведения о загрузке реагентов во время непрерывной работы прибора в Руководстве пользователя
Системы cobas s 201.
3. Поместите кассету МРХ CS1 в штатив реагентов, убедитесь, что штрих-код кассеты находится на одном
уровне со штрих-кодом штатива, расположенным справа на штативе. Кассеты МРХ CS1 должны быть
загружены все вместе на один штатив, отдельно от остальных кассет.
4. Загрузите штатив реагентов, содержащий МРХ CS1, в позицию для штатива А, задвиньте его до первого
упора в прибор COBAS AmpliPrep, дождитесь, пока соответствующий штативу реагентов индикатор не
загорится зеленым светом, и затем задвиньте штатив до конца. Не загружайте реагенты разных серий в прибор.
5. Поместите в штатив(-ы) реагентов по одному набору кассет МРХ CS2, МРХ CS3 и МРХ CS4 для каждой
кассеты МРХ CS1, убедитесь, что штрих-код кассет находится на одном уровне со штрих-кодом штатива,
расположенным справа на штативе.
6. Загрузите штатив(-ы) реагентов в позиции штативов В, С, D или Е, дождитесь, пока соответствующий
штативу реагентов индикатор не загорится зеленым светом, и затем задвиньте штатив до конца.
7. Индикаторы на панели состояния прибора COBAS AmpliPrep загорятся зеленым светом после того, как все
компоненты набора будут загружены и узнаны системой.
B. Выделение нуклеиновых кислот из внесенных образцов и контролей
Внимание: Следующие этапы выполняются на чистой поверхности стола.
1. Удалите целлофановую упаковку с элементов обработки образцов (SPU), оставьте синюю пленку не
нарушенной.
2. Вставьте элементы обработки образцов (SPU) справа в штатив SPU символом ROCHE к передней части
штатива.
12
--- стр. 14 ---
!. Снимите синюю пленку и убедитесь, что все SPU сидят в штативе. Не полностью вставленный SPU может
повредить прибор. Не давите на S-наконечник SPU.
(. Задвиньте штативы SPU в позиции I, J или К прибора COBAS AmpliPrep полностью, система должна
распознать штативы. В прибор одновременно могут помещаться до 72 SPU. Загружайте число SPU,
необходимое для постановки.
5 . Снимите целлофановую упаковку с заводских штативов К-пробирок и К-наконечников. Убедитесь, что
наконечники и пробирки расположены в штативах правильно.
S . Вставьте штативы К-пробирок и К-наконечников в позиции, указанные в Руководстве пользователя.
I Создайте назначения в программе AMPLILINK.
8. Загрузите штативы SK24 с внесенными в HAMILTON Microlab STAR образцами и контролями в позиции F,
jG или Н прибора COBAS AmpliPrep. Задвиньте штативы, пока они не заблокируются. Проверьте состояние
[системы в окне Sample, убедитесь, что все образцы в штативе распознаны системой.
9. Проверьте в программе AMPLILINK, что необходимые для данной обработки образцов реагенты и
расходные материалы загружены.
10. Нажмите Start в рабочей станции программы AMPLILINK , чтобы запустить обработку образцов в приборе
COBAS AmpliPrep.
11. Все неиспользованные К-наконечники и К-пробирки останутся заблокированными в приборе COBAS
AmpliPrep для последующих постановок.
I. Амплификация и детекция
1. Перенесите штатив SK24 с обработанными образцами в анализатор COBAS TaqMan не позднее чем через 1
час после завершения обработки образцов. Анализатор COBAS TaqMan автоматически начнет амплификацию
и детекцию. Результаты для штативов. Перенесенных в анализатор позднее 1 часа после окончания обработки
образцов, будут признаны недействительными.
2. После завершения амплификации и детекции в анализаторе COBAS TaqMan, тестированные образцы
автоматически удаляются в контейнер для отходов.
3. Примите результаты в рабочей станции AMPLILINK.
4. Результаты будут автоматически перенесены в программу PDM.
Д. Просмотр и выдача результатов
1. Запустите рабочую станцию программы Roche PDM.
2. Откройте непросмотренные серии во вкладке “Review Batches”.
3. Проверьте наличие сигнальных значков, выделив для этого серию и нажав “Next.”
4. Просмотрите результаты, полученные для контролей во вкладке “Controls Review”. См. критерии
прохождения теста для контролей в разделе Контроль постановки.
5. Просмотрите результаты для пулов для выделенной серии во вкладке “Alarms Review”. Донорские образцы в
пулах, для которых постановка не прошла. Должны быть переставлены повторно.
6. Просмотрите и распечатайте результаты для доноров в выделенной серии во вкладке “Donor Review”.
Контроль качества постановки
1. Один негативный контроль [TS (-) С] и по одному из всех пяти позитивных контролей [HIV-1 М (+) С,
HIV-1 О (+) С, HIV-2 (+) С, HCV (+) С и HBV (+) С] должны быть проставлены в каждой постановке.
2. Статус постановки: Статус постановки обозначается как “Complete, Valid” если сработали все контроли
постановки. Если контроли в серии не сработали, вся постановка признается не действительной
а. Негативный контроль
Для того чтобы негативный контроль [TS (-) С] был признан сработавшим, результат должен быть
нереактивным, а внутренний контроль должен сработать. Если внутренний контроль не сработал, результат
для негативного контроля считается недействительным, и вся постановка признается недействительной. Если
негативный контроль не сработал, постановка признается не действительной и должна быть переставлена
заново.
б. Позитивные контроли
Для того чтобы 5 позитивных контролей (HIV-1 М (+) С, HIV-1 О (+) С, HIV-2 (+) С, HCV (+) С и HBV (+)
С) были признаны сработавшими, результат для них должен быть реактивным, а соответствующий внутренний
контроль должен сработать. Если внутренний контроль не сработал, результат для позитивного контроля
считается недействительным, и вся постановка признается недействительной. Если позитивный контроль не
сработал, постановка признается не действительной и должна быть переставлена заново.
13
--- стр. 15 ---
критерии принятия результатов для контролен
Результат для
мишени
Результат для
ВК
Результат для
образца
Негативный
контроль
Valid (-) Valid (Ct value) Valid
Позитивный
контроль
Valid (Ct value) Valid (Ct value) Valid
Есл
обр
обр
ма{
ДИ£
Вн
до/
по>
5. Внутренние контролы донорских образцов
I. Для донорского образца нереактивный (-) результат теста признается действительным, если сработал
;оответствующий внутренний контроль; в противном случае нереактивный образец признается
^действительным, постановку теста для данного образца необходимо повторить полностью.
5. Для донорского образца реактивный (Ct value) результат теста признается действительным, не зависимо от
того, сработал или не сработал со ответствующий внутренний контроль.
4.'
Иг
оп
вь
С<
B fc
Ei
Результаты
1. Результаты для образцов признаются действительными, если прошла вся постановка. См. критерии принятия
зезультатов в разделе Контроль качества постановки. Для каждого образца определяются два параметра,
один для вирусной мишени, другой - для внутреннего контроля.
2. Окончательные результаты теста cobas TaqScreen МРХ для донорских образцов представляются программой
PDM следующим образом:
т«
О '
П
д
(
1
Статус Расшифровка
Complete Non-Reactive Донор не реактивен по тестировавшемуся агенту (-ам).
Complete Reactive Донор реактивен по тестировавашемуся агенту(-ам).
Complete Unresolved Истекло время ожидания определения статуса донора,
реактивного или не реактивного.
Дополнительные тесты для данного донора не могут быть
проведены в системе.
3. Доноры, для которых необходимы дополнительные тесты: донорские образцы, пул которых имеет
недействительный статус, маркируются как “Repeat Needed” (необходимо повторное тестирование), донорские
образцы, входящие в реактивный пул, маркируются как “Resolution Needed” (необходима расшифровка пула).
Повторное тестирование
Образцы из пула с недействительным статусом должны быть переставлены повторно при перестановке всего
пула или в индивидуальном порядке.
Тестирование пула - расшифровка пула '
Если образцы тестировались в пуле, который признан реактивным в системе cobas s 201, они маркируются как
“Resolution needed” (необходима расшифровка пула) и дозатор HAMILTON STAR раскапывает для
расшифровывающего тестирования индивидуальные донорские образцы из архивных плашек или исходных
донорских пробирок. Для выявления индивидуального реактивного образца используется тест cobas TaqScreen
МРХ, такой же, какой использовался для постановки пула. Выявленные реактивные образцы могут далее
тестироваться в диагностикумах COBAS Ampli Screen для определения вирусного агента.
Если реактивны один или несколько индивидуальных образцов из пула, они маркируются как “Complete,
Reactive”, а остальные негативные образцы, входившие в данный позитивный пул, маркируются как “Complete,
Non-reactive”. Если все индивидуальные образцы из данного пула негативны при тестировании, они все
маркируются как “Complete, Non-reactive”.
Внимание: Согласно общей программе контроля качества, пользователь может провести
дополнительное тестирование для выявления причины первоначальной реактивности пула.
Тестирование индивидуальных образцов - повторное тестирование
Если донор при первичном тестировании в системе в качестве индивидуального образца реактивен, оператор
может:
• провести повторное тестирование данного индивидуального образца в двух повторах, или
• выдать результат для донора как реактивный
14
--- стр. 16 ---
ели оператор выбирает повторное тестирование, дозатор HAMILTON STAR используется для внесения
эразца из исходной донорской пробирки для повторного тестирования. Если оба повтора нереактивны,
эразец маркируется как “Complete, Non-reactive”. Если один или оба повтора теста для образца реактивны, он
аркируется как “Complete, Reactive”. Выявленные реактивные образцы могут далее тестироваться в
иагностикумах СОВ AS Ampli Screen для определения вирусного агента.
нимание: Согласно общей программе контроля качества, пользователь может провести
ополнительное тестирование для выявления причины первоначальной реактивности образца, если оба
овторных тестирования были не реактивными.
. Тестирование для определения вирусного агента
1ндивидуальные образцы, реактивные в тесте cobas TaqScreen МРХ, могут далее тестироваться для
пределения вируса (-ов), ставшего причиной реактивности в тесте: ВИЧ-1, ВГВ или ВГС. Процедуры по
ыявлению ВИЧ-1 группы М, ВГВ и ВГС описаны во вкладышах к наборам COBAS AmpliScreen HBV Test,
/OBAS AmpliScreen HCV Test, v2.0 и COBAS AmpliScreen HIV-1 Test, vl.5. Roche не выпускает тестов для
1ыявления ВИЧ-1 группы О и ВИЧ-2.
:сли индивидуальный донорский образец, реактивный в тесте cobas TaqScreen МРХ, не реактивен в трех
•естах COBAS AmpliЗсгееппользователь может провести дополнительные ТНК или серологические тесты, или
угозвать данного донора для дальнейшего тестирования.
Лользователи должны следовать собственной политике/практике при наблюдении доноров и допуске их к
донорству.
Ограничения постановки
1. Данный тест предназначен для использования только с набором контролей cobas TaqScreen МРХ,
промывочным реагентом cobas TaqScreen МРХ и системой cobas s 201.
2. Гепарин способен ингибировать ПЦР. Не используйте в данной постановке гепаринизированную
плазму.
3. Надежность полученных результатов зависит от адекватного забора образцов и их транспортировки.
4. Выявление РНК ВИЧ-1 группы М, РНК ВИЧ-1 группы О, РНК ВИЧ-2, РНК ВГС и ДНК ВГВ определяется
количеством вирусных частиц, содержащихся в образце, и зависит от методов сбора образцов, факторов
пациента (например, возраста, наличия симптомов), и/или стадии инфекции и размера пула.
5. Для использования с тестом cobas TaqScreen МРХ, для автоматического создания пулов плазмы проходил
испытания только дозатор HAMILTON Microlab STAR. Соблюдайте инструкции и требования безопасности,
содержащиеся в Руководстве пользователя cobas s 201 и Инструкции пользователя дозатора HAMILTON
Microlab STAR.
Рабочие характеристики теста
Воспроизводимость
Воспроизводимость теста cobas TaqScreen МРХ в системе cobas s 201 определяли при тестировании 12-
элементных рандомизированных, закрытых панелей, содержащих два негативных образца плазмы, и по два
образца плазмы позитивных по ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-2, ВГС и ВГВ в концентрациях
примерно 0.54Х и ЗХ предела чувствительности (ПЧ) теста cobas TaqScreen МРХ Test для каждого вируса.
Тестирование проводили в 3 лабораториях, по 1 оператору в каждой, с 3 сериями наборов теста cobas
TaqScreen МРХ и 1 системой cobas s 201. В каждой лаборатории тестировали 4 панели и 4 набора контролей
ежедневно в течение 5 дней с каждой из 3 серий наборов, всего проводилось 180 тестов для каждого образца
панели (всего 2,160 тестов).
Воспроизводимость оценивали, рассчитывая процент реактивных результатов тестирования для каждой точки
панели. Данные анализировали для каждой серии наборов теста и лаборатории/оператора.
Проведенные исследования показали стабильную работу теста cobas TaqScreen МРХ независимо от серии
набора и лаборатории/оператора.
15
--- стр. 17 ---
Таблица 1: Тест cobas TaqScreen МРХ Test — воспроизводимость результатов
Vims Concentration Kit Lot Reactive Results
by Reagent Lot
Test
Site/Operator
Reactive Results
by Testing
Site/Operator
Negative 0
A 0.0% (0/120) 1 0.0% (0/120)
В 0.0% (0/120) 2 0.0% (0/120)
c 0.0% (0/120) 3 0.0% (0/120)
HIV-l Group M 0.54 X LOD*
A 75.0% (45/60) 1 75.0% (45/60)
В 80.0% (48/60) 2 71.746 (43/60)
C 75040 (45/60) 3 833% (50/60)
HIV-l Group 0 0.54 X LOD*
A 96,7% (58/60) 1 100.0% (60/60)
В 983% (59/60) 2 95.046 (57/60)
C 983% (59/60) 3 98.3% (59/60)
HIV-2 0.54 X LOD*
A 83.3% (50/60) 1 73.3% (44/60)
В 81.7% (49/60) 2 80.0% (48/60)
C 73.34V (44/60) 3 85.0% (51/60)
HCV 0.54 X LOD*
A 81.4% (48/59) 1 71.7% (43/60)
В 78.3% (47/60) 2 71.2% (42/59)
C 61.7% (37/60) 3 783% (47/60)
HBV 0.54 X LOD*
A 983% (58/59) 1 987% (58/60)
В 983% (59/60) 2 98.3% (58/59)
C 95.0% (57/60) 3 967% (58/60)
HIV-1 Group M 3 X LOD*
A 100.0% (60/60) 1 98.3% (59/60)
В 98.3% (59/60) 2 100.046 (60/60)
C 100.0% (60/60) 3 100.046 (60/60)
HIV-1 Group 0 3 X LOD*
A 100.0% (60/60) 1 100.046 (60/60)
В 100.0% (60/60) 2 100.044 (60/60)
C 100.0% (60/60) 3 100.046 (60/60)
HIV-2 3 X LOD*
A 100.0% (59/59) 1 100.044 (60/60)
В 100.0% (60/60) 2 100.046 (60/60)
C 100.0% (60/60) 3 100.046 (59/59)
HCV 3 X LOD*
A 100.0% (60/60) 1 100.046 (60/60)
В 100.0% (60/60) 2 100.046 (60/60)
C 100.046(60/60) 3 100.046 (60/60)
HBV 3 X LOD*
A 100.0% (60/60) 1 100.046 (60/60)
В 100.0% (60/60) 2 100.046 (60/60)
C 100.0% (60/60) 3 100.046(60/60)
* Предел чувствительности
Аналитическая чувствительность — Международные стандарты ВОЗ/Стандарты Roche
Пределы чувствительности теста cobas TaqScreen МРХ для ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-2, ВГС и
ВГВ определяли с помощью следующих стандартов: международный стандарт ВОЗ для ВГВ (код NIBSC
97/746), второй международный стандарт ВОЗ для ВГС (код NIBSC 96/798), и стандарты Roche для ВИЧ-1
группы М, ВИЧ-1 группы О и ВИЧ-2. Стандарт Roche для ВИЧ-1 группы М представляет собой коммерчески
доступный, культуральный вирусный сток (HIV-1 LAV 8Е5, PN 227,Boston Biomedica, Inc.) калиброванный
относительно международного стандарта ВОЗ по РНК ВИЧ-1 (NIBSC code 97/656) в тесте COBAS TaqMan
HIV-1 Test For Use With The High Pure System. Для ВИЧ-1 группы О и ВИЧ-2 в настоящее время отсутствуют
международные стандарты. Стандарты Roche для ВИЧ-1 группы О и ВИЧ-2 представляют собой коммерчески
доступные культуральные вирусные стоки, PN 2420 (Boston Biomedica, Inc.) и Cat. No. 10-127-000 (Advanced
Biotechnologies, Inc.). Концентрации вирусных стоков ВИЧ-1 группы О и ВИЧ-2 приводятся производителями
и основаны на подсчете вирусных частиц под микроскопом. Для каждого стандарта готовили три независимых
серии разведений нормальной, вирус-негативной плазмой человека. Каждую серию разведений тестировали с
использованием трех разных серий теста cobas TaqScreen МРХ в 22 повторах для каждой серии теста, всего
198 постановок для каждой концентрации. Для оценки 95% предела выявления (95% LOD) и 95%
16
--- стр. 24 ---
D. Исключен из общих расчетов из-за большого интервала между первым образцом, реактивным в тесте cobas
TaqScreen МРХ и предыдущим образцом (панель 5: 36 дней, панель 17: 146 дней, панель 19: 23 дня).
E. Реактивные результаты для теста cobas TaqScreen МРХ в неразведенных образцов в дни 4, 16 и 26 не
включены в расчет “Дней до выявления”, поскольку результаты для дней 7, 19, 23, 76 и 101 были
нереактивными. Реактивные результаты для теста cobas TaqScreen МРХ в день 4 для образца, разведенного
1:6, не включены в расчет “Дней до выявления”, поскольку результаты для последующих 8 образцов (дни 7 -
106) были нереактивными. Данная панель также была исключена из общих расчетов из-за длительного периода
неопределенной реактивности.
Аналитическая специфичность - микроорганизмы с потенциальной перекрестной реактивностью,
влияющие на проведение теста
Аналитическую специфичность теста cobas TaqScreen МРХ определяли в постановке панели 17
микроорганизмов, включающей 12 вирусных изолятов, 4 бактериальных штамма и 1 изолят дрожжей.
Микроорганизмы вносили в нормальную, вирус-негативную человеческую плазму и тестировали с или без
ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-2, ВГС или ВГВ, добавленными в концентрации ЗХ предела
чувствительности теста cobas TaqScreen МРХ для каждого вируса.
Были получены нереактивные результаты в тесте cobas TaqScreen МРХ для всех образцов, содержащих
микроорганизмы, в которые не были добавлены ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-2, ВГС или ВГВ.
Тестировавшиеся микроорганизмы не обладают перекрестной реактивностью в тесте cobas TaqScreen МРХ.
Были получены реактивные результаты для всех образцов, содержащих микроорганизмы в которые были
добавлены ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-2, ВГС или ВГВ. Тестировавшиеся микроорганизмы не
ингибируют постановку теста the cobas TaqScreen МРХ.
Таблица 14: Тестировавшиеся микроорганизмы_________________________________
Аналитическая специфичность — тестировавшиеся микроорганизмы
Аденовирус 2 Вирус герпеса человека 6 Staphylococcus
aureus
Цитомегаловирус Т-лимфотропный вирус
человека; тип I
Candida albicans
Вирус Эпштейн-Барра Т-лимфотропный вирус
человека; тип II
Propion ibacteri um
acnes
Вирус ветрянки Вирус гепатита А Staphylococcus
epidermis
Вирус простого герпеса, тип 1 Вирус гриппа Staphylococcus
haemolyticus
Вирус простого герпеса, тип 2 Вирус гепатита G (GBV-C)
Аналитическая специфичность - прочие заболевания
Образцы плазмы, полученные от 15-20 пациентов со следующими заболеваниями (цитомегаловирусная
инфекция, инфекция вируса гепатита А, инфекция вируса Эпштейн-Барра и аутоиммунные заболевания)
тестировали с или без ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-2, ВГС или ВГВ, добавленными в
концентрации ЗХ предела чувствительности теста cobas TaqScreen МРХ для каждого вируса. Результаты были
нереактивными в тесте cobas TaqScreen МРХ для всех образцов от больных, тестировавшихся без добавления
ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-2, ВГС или ВГВ, результаты были реактивными во всех образцах,
полученных от больных, в которые были добавлены ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-2, ВГС или ВГВ.
Данные заболевания не влияют на чувствительность и специфичность теста cobas TaqScreen МРХ.
Потенциально влияющие на проведение теста вещества
Эндогенные вещества, влияющие на проведение теста
Образцы плазмы с повышенными уровнями триглицеридов (до 3186 мг/дл), гемоглобина (до 472 мг/дл),
свободного биллирубина (до 63 мг/дл), альбумина (до 9.6 г/дл) или человеческой ДНК (до 0.4 мг/дл)
тестировали с или без ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-2, ВГС или ВГВ, добавленными в
концентрации ЗХ предела чувствительности теста cobas TaqScreen МРХ для каждого вируса. Данные
эндогенные вещества не оказывали влияния на чувствительность и специфичность теста cobas TaqScreen МРХ.
Образцы плазмы, в которые были добавлено повышенное количество красных клеток крови (до 10% v/v)
24
--- стр. 25 ---
тестировали с или без ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-2, ВГС или ВГВ, добавленными в
концентрации ЗХ предела чувствительности теста cobas TaqScreen МРХ для каждого вируса. Плазма, в
которую вносили до 2.5% (v/v) красных клеток крови, не влияла на чувствительность и специфичность теста
cobas TaqScreen МРХ. Плазма, в которую вносили до 5.0% (v/v) красных клеток крови, приводила к снижению
чувствительности выявления ВГС в тесте cobas TaqScreen МРХ. Плазма, в которую вносили до 10.0% (v/v)
красных клеток крови, влияла на чувствительность выявления ВГВ, ВГС, ВИЧ-1 группы О и ВИЧ-2 в тесте
cobas TaqScreen МРХ.
Экзогенные вещества, влияющие на проведение теста
Образцы нормальной человеческой плазмы, содержащие повышенные концентрации ацетаминофена (1324
мкмоль/л), ацетилсалициловой кислоты (3.62 мкмоль/л), аторвастатина (600 экв/л), флюоксетина (11.2
мкмоль/л), лоратадина (0.78 мкмоль/л), надолола (3.88 мкмоль/л), напроксена (2170 мкмоль/л), пароксетина
(3.04 мкмоль/л), и сертралина (1.96 мкмоль/л) тестировали с или без ВИЧ-1 группы М, ВИЧ-1 группы О, ВИЧ-
2, ВГС или ВГВ, добавленными в концентрации ЗХ предела чувствительности теста cobas TaqScreen МРХ для
каждого вируса. Данные экзогенные вещества не оказывали влияния на чувствительность и специфичность
теста cobas TaqScreen МРХ.
Клинические характеристики
Реактивность в цельной крови доноров
Клиническую специфичность теста cobas TaqScreen МРХ оценивали при тестировании случайно выбранных
образцов цельной донорской крови параллельно в трех лабораториях.
Тестирования проводили для индивидуальных образцов и пулов, приготовленных из равных аликвот
индивидуальных образцов донорской крови. Всего в cobas TaqScreen МРХ тестировали 72,281 донорских
образцов, клиническая специфичность при этом составляла 99.98% (72,266/72,281; 95% CI = 99.97 - 99.99). При
постановке образцов в пулах, реактивные пулы расшифровывали при последующем тестировании
индивидуальных образцов, составляющих эти пулы. При определении клинической специфичности, один
донор был выявлен как “дополнительный позитивный случай”, донор был определен как позитивный по ДНК
ВГВ при отсутствии положительного результата в применявшихся в лаборатории тестах. Обобщенные
результаты тестирования в пулах для cobas TaqScreen МРХ приведены ниже в таблице 15.
Таблица 15: Реактивность пулов, полученных от добровольных доноров крови
Категория Пулы Процент
Тестировавшиеся пулы 10,090 100%
Нереактивные пулы 10,054 99.64%
Первично реактивные пулы 36 0.36%
Первично реактивные пулы, содержащие
позитивных доноров
23 0.23%
Позитивные пулы, дополнительный
позитивный случай
1 0.01%
Первично реактивные пулы, не содержащие
позитивных доноров (ложно-позитивные)
12 0.12%
25