Наборы реагентов и расходные материалы к прибору MagNaPure для выделения и очистки нуклеиновых кислот и подготовки реакционных смесей — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
=== файл: Инструкция_руководство__39912_I.pdf ===
--- стр. 6 ---
6. Вспомогательная информация.....................
6.1 Обозначения
6.1.1 .Текстовые обозначения
6.1.2. Символы
6.1.3. Аббревиатуры
6.2 Изменения относительно предыдущей версии
6.3 Информация для заказа
6.4 Ограничения, налагаемые лицензией
6.5 Торговые марки
24
24
24
24
24
25
25
26
26
--- стр. 7 ---
1.11аи1ачсинс данною продукта
Количество тесюв 192 выделения (6 х 32) из:
Содержание набора
• 200 мкл цельной крови млекопитающих
• 1 X 10* клеток крови или культуральных клеток
© набор рассчитан на обработку 192 образцов в сериях по 32. Ixvm
обрабатывать одновременно менее 32 образцов, часть реагентов будет
расходована напрасно и оставшегося объема будет недосгаючно для
обработки количества образцов, указанного выше.
© Лизмрующнй/связываюший буфер содержит синим красшель,
прелназиаченный для детекции сгустков при антомагизиронапмом
выделении ДНК в iipH6opeMagNA F4ire LC.
Пробирка
/Крышка
Маркировка Содержание / Назначение
1
черная
Wash Buffer I
(Промывочный
буфер I)
• 2 флакона по 1(Ю мл
• для удаления ингибиторов НЦР
2
синяя
Wash Buffer II
(Промывочный
буфер II)
• 2 флакона по 60 мл
• для удаления солей, белков и т.д..
3
зеленая
Lysis Buffer
(лизирующий буфер)
• I флакон. ИХ) мл
• для лизиса клеток и связывания
ДНК
4
розовая
Proteinase К
(11ротеиназа К)
• 6 стеклянных флаконов с
лиофилизованным материалом
• для расщепления белков
5
бежевая
Magnetic Glass
Particles
(MGPs) Suspension
(Магнитные
стеклянные частицы,
МСЧ, суспензия)
• 6 стеклянных флаконов с
суспензией МСЧ
• для связывания ДНК
6
желтая
Elution Buffer
('Злюционный буфер)
• 1 флакон. 100 мл
• для '.тлюции очишеннон ДНК
•для в(К'становления iiporemiuiM К
• для разведения растворенной ДИК
(дополнительно)
У словия хранения и сзабилыюсть
• Компоненты набора стабильны при температуре +2
истечения срока годности, указанного па упаковке.
^ набор транспортируется при комнатной тсмператлрс
^ Никогда ие храните МСЧ в пробирках для peareiiioB.
+ГС ло
--- стр. 8 ---
Необходимые
дополнительные
оборудование
реагенты
Для выделения ДНК с набором MagNA Pure LC DNA Isolation Kit I в
приборе MagNA Pure LC необходимы следующие дополнительные
реагенты и оборудование:
• стандартное лабораторное оборудование
• дозаторы и свободные от нуклсаз наконечники с аэрозольным барьером
для внесения образцов и ДНКазы в пробирки для образцов
• центрифуга и соогвогствующис свободные от иуклеаз реакционные
пробирки
• ворзхгкс
• термоблок (65®С/95®С, для реакционных пробирок; 1.5-2 мл)
• постав.чяется Roche Applied Science
Область применения Для лабораторны.х исследований. Выделение высокоочищенной
геномной ДНК из цельной крови млекопизающих или клеток крови
(лейкоцитов. МНОЮ или клеточных культур в приборе MagNA Pure LC,
Очищенная ДНК может быть использована для тестирования в ПЦР в
приборе LightCycler® или стандартных термоциклерах.
Длительность
постановки
Настройка прибора MagNA Pure LC занимает примерно 15 минут. Общая
длительность автоматизированного выделения ДНК составляет:
• 45 - 90 мин. при обработке 1 - 32 образцов по протоколам выделення
‘DNA I Blood_(2ells High Performance’ или ‘DNA I
High_Performancc_extemaLlysis’
• 30-60 мин. при обработке 1-32 образцов по протоколу выделения DNA I
Blood_Cclls Fast
После настройки и запуска прибора MagNA Pure LC дополнительные
манипуляции оператора не требуются. Дополнительные манипуляции
зрсбуются только для предварительных этапов выделения.
--- стр. 20 ---
т
VMOUBWPMf F -W C i'O fra
20 мкл 1.5 1.9±0.1 25.6
50 мкл 3.2 24.8
1(Ю мкл 4.6 24.7
200 мкл 7.2 23.6
Куль1^^ 1сл1Ш'(К562)'
1 X 10' 1 .9 ± 0 .1 34.5
1 хЮ'' “П7-------------- 30.1
1.8 25.8
2,.“) X 10' 3.5 24.3
5 X 10-' 6.0 23.4
~Гх 10^ 10.6 23.1
Культура клеток:ffleLa)
1 X 10' —П---------------------- 1.9±0.1 35.8
1 X 10" 1 1 30.2
1 X 10-*' 2.1 ^25^8
2.5 X 10’ 5.7 24.3
5х 1СР 6.0 24.4
1 X Ю" 11.1 23.8
" Величина точки пересечения (СР) отражает вылслсннос количество ДИК и
рассчитывается по результатам анализа в ПЦР в реальном времени (здесь
Фактор V Лейден) в карусельной сист'еме LighlCycIcr® (прибор LighlCycIci®
1.5). Количественный анализ проводится на основании иегюльзования
стандартов ДНК.
OD260 не удалось определить из-за слишком низкой концентрации ДНК п
образце.
.A im iK 'o a iy .iH iiT
Воспроизводимость
(внутри
постановки)
шзцы крови, содержащие ра {ные ан гикоа 1ллянты (')Д ГД. ци ipau
выделяли но протоко.тх “DNA 1 Blood_Cclls_High_Pcrformance”.
Ингибирование последующею анализа в ПЦР в реальном времени в приборе
LighlCydcP® 1.5 отмечено не было.
32 образца цельной крови объемом 20 мкл или 10** клеток К562 выделяли по
протоколам DNA I. Стандартные отклонения вы.чода и чистоты ДНК
составляли < 10%. варьирование величин точки пересечения при анализе в
системе LightCycler<S) 2.0 (прибор Ligh{Cycler®I.5) составляло < .
--- стр. 21 ---
Воспроизводимое! ь
(между
постановками)
6 образцов цельной крови объемом 20 мкл выделяли по прогокол) “DN/\ i
Blood_Cells_High_Performance" или протоколу “DNA I Blood_Cclls_Fa,4r в
5 независимых постановках. Стандартные отклонения выхода и чисю 1ы
ДНК составляли < 10%. варьирование величин точки пересечения при
анализе н системе LighiCycler® 2.0 (tipnOop LightCycler(K)1.5) coeiaB.iH.io <
.V;(.
lloc.ie.iyKHUifii
aiia.iiii
ДНК in образцов разною пша (цельная кровь, kjcikh крови,
кулыуральныс клетки) тестировали в ПЦР в реальном времени в
карусельной системе LightCycIer® (прибор LightCyclcr® 1.5), в НЦР в
стандартных гермоциклерах, в рестрикционном анализе и Саузерн-блоте.
ДНК была пригодна для всех типов экспериментов и ее характеристики
были иленгичными или превосходили отмечаемые для ДИК. выделенной
сгандартными методами.
О Ьолсс подробные сведения о результатах )кспериме 1пов и облааях
прпмемеиия можно получить на сайте hltp:// www.magnapurc.com и.зн в
местом представительстве Roche.
--- стр. 22 ---
4. Анализ ошибок
С липание
частнц/проблем м
с магнитны м
разделением
частиц
Избыток материала в
образце
Уменьшите количество материала в образце д о значений,
рекомендованных в разделе "С^разцы*’
М агнитные стеклянные
частицы были
намагничены перед
началом работы.
Избегайте контакта МСЧ с магнитом.
1
Д с1'ра;1ацня Д Н К tie оптимальное
хранение образцов
Используйте свежие или заморож енны е образцы. Ичбспипе
использования образцов, хранившихся при комнатноГ) |
температуре длительное время.
Н изкий вы ход
Д И К
0
В образце недостаточное
количество клеток
• Клетки; Посчитайте клетки перед началом работы.
Оптимальные результаты получают при работе с образцами,
содержащ ими I х Ю'’ клеток.
• Кровь: Убедитесь, что кровь не свернулась.
Используйте образцы свежей или замороженной крови, и
которую добавлены аитикоагуляиты. Гщатсльно iicpeMeiiiaii re
образцы на вортексе перед началом работы
Испранильное хранение
образцов
Используйте свеж ие или заморож енны е образцы. Избегайте
использования образцов, хранивши.хся при комнатной
температуре длительное время.
Д Н К
недостаточно
чистая
Избыток материала в
образце
Уменьшите количество материала в образце д о значений, |
рекомендованных в разделе “О бразцы ” j
Н изкое качество
послелую 1ией
1Щ Р
i
Слишком м ного ДН К в
ПЦР.
• Проверьте концентрацию Д(1К в выделенных образцах н
измените количество элюата. вносимого в 11ЦР. или разведите
элюат например. I; 10). Оптимальное количество ДИК:
10-100 нг/ПЦР.
• Использу йте меньш ее количество материала для выделения.
Оптимальные результаты получают при выделении из 20 мкл ;
цельной крови или Ю' клеток. !
Н едостаточно ДН К в
ПЦР
• Измените количество элюата. вносимого в ПЦР, или
проводите выделение из больш его количества материала.
Оптимальное количество ДНК; 1 - 100 т /П Ц Р . максимум
око.’Ю ! MKI,
• Проводите вылслснис из бол ьш ею количества матсриа.ш.
thiiK aa степень очистки
ДН К
Используйте меньш ее количество материала для выделения.
Оптимальные результаты получают при выделении из 20 мкл '
цельной крови или 10*' клеток.
Реагенты и протокол
ПЦ Р не оптимизированы
Проверьте реагенты и протокол ПЦР с помощью :
положительного контроля Д Н К (например, геномной ДН К !
человека*)
Время денатч'рации
слишком мало.
Оптимизируйте ПЦР. например, включите в протокол ПЦР
этап начальной денатурации 30 сек.- Змии.
Высокая концентрация
генарииа в образце крови
Применяйте г>ротокол “D N A I Blo(xi_CeIls_Fast" вместо
протокола “D N A I B Iood_C ells High Performance", или ,
используйте образцы крови с Э Д Т А или цитратом
Э лю ат слегка
красного цвета
1 М инимальная абразия
магнитных частиц
Центрифугируйте элю ат при низких значениях g (около 1.000
об./м ин.) для удаления взвеси.
© Красный цвет элюата нс оказывает ндняння на i
последую щ ую ПЦР в систем е LighlCycler®.
--- стр. 33 ---
1. Назначение данного продукта...................................................................................................................3
Количество тестов 3
Содержание набора 3
Условия хранения и стабильность 4
Необходимые дополнительные оборудование и реагенты 4
Область применения 4
Длительность постановки 4
2. Работа с данным продуктом...................................................................................................................... S
2.1 Предварительные действия 5
Меры предосторожности 5
Протокол выделения 5
Образцы 7
2.2. Приготовление рабочих растворов 8
Контроли 9
2.3 Предварительные этапы 10
^Цельная кровь 10
^Лейкоциты 10
МНПК 11
Клеточные культуры 11
2.4 Протокол выделения ДНК 12
Общие замечания 12
Протокол 12
Хранение выделенной ДНК 13
Последующий анализ 13
3. Результаты............................................................................................ 14
3.1 Стабильность ДНК 14
3.2 Выход и степень очистки 14
3.3. Удаление антикоагулянтов 15
3.4. Перекрестная контаминация 15
3.5. Воспроизводимость 15
4. Анализ ошибок........................................ 17
5. Дополнительная информация о продукте............................................................................................18
•
5.1 Назначение данного продукта 18
Принцип теста 18
5.2. Контроль качества 19
6. Вспомогательная информация ................................................................... 20
6.1 Обозначения 20
Т екстовые обозначен ия 20
Символы 20
Аббревиатуры 20
6.2 Изменения относительно предыдущей версии 20
6.3 Информация для заказа 21
6.4 Ограничения, налагаемые лицензией 23
6.5 Торговые марки 23
--- стр. 34 ---
1. Назначение данного продукта
Количество тестов
Содержание набора
Количество выделений зависит от выбранного протокола:
• 96 выделений из 1 мл крови
• 192 выделения из 300 - 500 мкл крови
• 288 выделений из 20 - 200 мкл крови
• 192 выделения из клеток крови или клеточных культур
® набор рассчитан на обработку 192 образцов в сериях по 32. Если
обрабатывать одновременно менее 32 образцов, часть реагентов будет
расходована напрасно и оставшегося объема будет недостаточно для
обработки количества образцов, указанного выше.
® Лизирующий/связывающий буфер содержит синий краситель,
предназначенный для детекции сгустков при автоматизированном
выделении ДНК в npndopeMagNA Риге LC.
Пробирка
/Крышка
Маркировка Содержание / Назначение
1
черная
Wash Buffer I
(Промывочный
буфер 1)
* 3 флакона по 1(Ю мл
• для удаления ингибиторов ПЦР
2
синяя
Wash Buffer II
(Промывочный
буфер П)
* 3 флакона по 60 мл
• для удаления солей, белков и т.д..
3
красная
Wash Buffer III
(Промывочный
буфер И1)
« 2 флакона по 100 мл
• для удаления остаточных солей
4
зеленая
Lysis Buffer
(лизирующий буфер)
• 1 флакон, 100 мл
• для лизиса клеток и связывания
ДНК
5
бежевая
Magnetic Glass
Panicles
(MGPs) Suspension
(Магнитные
стеклянные частицы,
меч, суспензия)
* 6 стеклянных флаконов с
суспензией МСЧ
* для связывания ДНК
6
желтая
Elution Buffer
(ЭлюционныЙ буфер)
• 1 флакон, 100 мл
• для элюции очищенной ДНК
7
прозрачная
Proteinase К
Incubation Buffer 11
(инкубационный
буфер для
протеиназы К)
* 1 флакон, 100 мл
*для восстановления протеиназы К
8
розовая
Proteinase К
(Протеиназа К)
* 6 стеклянных флаконов с
лиофилизованным материалом
* для расщепления белков
--- стр. 35 ---
Условия хранения и стабильность
• Компоненты набора стабильны при температуре +2 - +8®С до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
® Набор транспортируется при комнатной температуре.
Д Никогда не храните МСЧ в пробирках для реагентов.
Необходимые
дополнительные
оборудование
реагенты
Область применения
нтельность
постановки
Для выделения ДНК с набором MagNA Риге LC DNA Isolation Kit I в
приборе MagNA Pure LC необходимы следующие дополнительные
реагенты и оборудование:
• стандартное лабораторное оборудование
• дозаторы и свободные от нуклеаэ наконечники с аэрозольным барьером
для внесения образцов в картридж MagNA Pure LC.
• центрифуга и соответствующие свободные от нуклеаз реакционные
пробирки
• вортекс
• могут потребоваться для некоторых протоколов:
- PBS* (для предварительного выделения клеток крови)
- Лизирующий буфер для эритроцитов* (для предварительного выделения
лейкоцитов)
- Вакутейнер СРТ (BD Diagnostics; для предварительного выделения
МНПК)
- гемоцитометр {например, производства Neubauer с камерами для
подсчета)
• поставляется Roche Applied Science
Для лабораторных исследований. Выделение высокоочишенной
геномной ДНК из цельной крови млекопитающих, клеток крови
(лейкоцитов, МНПК) или клеточных культур в приборе MagNA Риге LC.
Очищенная ДНК может быть использована для тестирования в П1ДР в
приборе LighlCyder® или стандартных термоциклерах.
Настройка прибора MagNA Pure LC занимает примерно 15 минут. Общая
длительность автоматизированного выделения ДНК составляет:
• 180 мин. при обработке 32 образцов цельной крови объемом 1 мл каждый
• 140 мин. при обработке 32 образцов цельной крови объемом до 500 мкл
или образцов клеток крови/клсточных культур.
После настройки и запуска прибора MagNA Pure LC дополнительные
манипуляции оператора не требуются. Дополнительные манипуляции
требуются только для предварительных этапов выделения.
--- стр. 57 ---
Содержание
1. Назначение данного продукта .............................................................................................................
Количество тестов
Содержание набора
Условия хранения и стабильность
Необходимые дополнительные оборудование и реагенты
Область применения
Длительность постановки
2. Работа с данным продуктом................................................................................................................. .
2.1 Предварительные действия
Меры предосторожности
Протокол выделения
Образцы
Приготовление рабочих растворов
Ктпроли
^2.2 Предварительные этапы для свежих замороженных образцов ткани...............................................
Общие замечания
Разрушение ткани в приборе MagNA Lyser
Разрушение ткани в ротор-статорном гомогенизаторе
Разрушение ткани с помощью ступки/пестика/шприца
Дополнительно: Этап разрушения РНК
Дополнительно; Обработка протеиназой К
2.3 Предварительные этапы для фиксированных в формалине парафиновых блоков ткани
предметном стекле микроскопа................................................................................................................
Стандартная процедура депарафинизации
Альтернативная процедура депарафинизации
Лизис вне прибора
3. Результаты........................................................... ......................................................................................
Стабильность ДНК
Выход
Чистота
Линейность
^Воспроизводимость (внутри постановки)
Последующий анализ
4. Анализ ошибок..........................................................................................................................................
5. Дополнительная информация о продукте ..........................................................................................
5.1 Назначение данного продукта
5.2 Принцип теста
5.3 Литература
Контроль качества
6. Вспомогательная информация..............................................................................................................
6.1 Обозначения
Текстовые обозначения
Символы
Аббревиатуры
6.2 Изменения относительно предыдущей версии
6.3 Информация для заказа
6.4 Ограничения, налагаемые лицензией
6.5 Торговые марки
3
3
3
4
4
4
5
5
6
6
7
8
9
i
9
10
10
11 4
1
11 с
на
. 11
11
12
12
13
13
13 Г
14
15
16 »
\. 17
.19 3
19
19
21
21
,22
22
22
22
22
23 ;■
23 Г
25
25
www.roche'applled-science.com
--- стр. 58 ---
Количество
тестов
Содержание
набора
• 192 выделения (6 х 32) из образцов массой до 10 мг
свежей/замороженной ткани или из образцов размером до 5 - 10 мкм
фиксированной в формалине ткани в парафиновых блоках.
® Набор рассчитан на обработку 192 образцов в сериях по 32. Если
обрабатывать одновременно менее 32 образцов, часть реагентов будет
расходована напрасно и оставшегося объема будет недостаточно для
обработки количества образцов, указанного выше.
® Лизирующий/связывающиЙ буфер содержит синий краситель,
предназначенный для детекции сгустков.
Пробирка
/Крышка
Маркировка Содержание / Назначение
I
черная
Wash Buffer I
(Промывочный буфер I)
* 2 флакона по 1(Ю мл
* для удаления ингибиторов ПЦР.
2
синяя
Wash Buffer II
(Промывочный буфер II)
■ 2 флакона по 60 мл
• для удаления солей, белков и т.д..
3
красная
Wash Buffer III
(Промывочный буфер III)
* 1 флакон, 100 мл
* для удаления оставшихся солей,
белков и т.д.
4
зеленая
Lysis/Binding Buffer
(лизирующий/связывающий
буфер)
* 1 флакон, 100 мл
• для лизиса клеток и связывания
ДНК
5
бежевая
Magnetic Glass Particles
(MGPs) Suspension
(Магнитные стеклянные
частицы, МСЧ, суспензия)
* 6 стеклянных флаконов с
суспензией МСЧ
* для связывания ДНК
6
желтая
Elution Buffer
(Элюционный буфер)
• 1 флакон, 100 мл
• для элюции очищенной ДНК
• для восстановления
лротеиназы К
• для разведения элюата
Т
прозрачная
Tissue Lysis Buffer
(Буфер для лизиса тканей)
* 1 флакон, 100 мл
* для эффпективного лизиса
тканей
Р
розовая
Proteinase К
(Протеиназа К)
• 6 стеклянных флаконов с
лиофнлизованным материалом
• для расщепления белков
Условия хранения и стабильность
• Компоненты набора стабильны при температуре +15 - +25®С до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
® Набор транспортируется при комнатной температуре (+15 - +25®С).
^ Никогда не храните МСЧ в пробирках для реагентов.
www.roche-applied'Sclence.com з
--- стр. 59 ---
Q
--- стр. 64 ---
Коптроли
Всегда используйте в постановках соответствующие контроли, особенно
если для выделенных образцов планируется проведение качественного
анализа образцов ДНК {например, в ПЦР в реальном времени в приборе
LightCycler®). Для контроля всего процесса от выделения образцов до
количественного анализа, используйте следующие контроли:
• Положительный контроль, материал, положительный по анализируемой
мишени.
• Отрицательный контроль, материал, отрицательный по анализируемой
мишени.
• Внутренний контроль (ВК), вносимая в каждый выделяемый образец в
известном количестве контрольная матрица.
® Внутренний контроль (ВК) до начала выделения и проходит затем все
этапы выделения и амплификации, что и мишень, в той же реакционной
пробирке. Применение ВК особенно важно при проведении
энзиматических реакций, таких как ПЦР, поскольку эффективность
процесса ПЦР может снижаться при наличии в очищенном образце
ингибиторов. Кроме того, внутренний контроль служит для мониторинга
возможных потерь материала во время выделения.
® Для количественных тестов в приборе LighiCycler®, в качестве
внутреннего контроля используют синтетические молекулы РНК с сайтами
посадки праймеров, идентичными мишени, но имеющие свой уникальный
участок посадки зондов для дифференциации ампликонов мишени и ВК.
Разделение сигналов от мишени и ВК проводится за счет применения
разных красителей в тестах формата НуЬРгоЬе. Подробные сведения о
применении ВК в системе UghtCycler® можно найти в брошюре
LightCycler® 12/2000 «Абсолютный количественный анализ при
использовании внешних стандартов и внутреннего контроля» (‘‘Absolute
(Quantification with External Standards and an Internal Control”) на сайте
http://www.lightcycler.com.
--- стр. 65 ---
2.2 Предварительные этапы для свежих/эамороженны! образцов тканн
Общие замечания • Полное разрушение и гомогенизация материала образца является
ключевым моментом для выделения геномной ДНК из тканей. Неполное
разрушение ткани приводит к значительному снижению выхода ДНК. С
другой стороны, избыточное разрушение ткани и гомогенизация приводит к
разрыву цепей высокомолекулярной геномной ДНК. Поэтому не допускайте
превышения рекомендованных интервалов времени.
• В некоторых методах пробоподготовки одновременно происходит лизис и
гомогенизация образцов, тогда как в других методах разрушения ткани
требуется дополнительный этап гомогенизации.
^ Всегда готовьте свежие лизаты образцов и обрабатывайте их немедленно.
Храните лизаты при -20®С или ниже, если планируете проводить выделение
ДНК позже.
Разрушение тканей
'в приборе MagNA
Lyser
Ниже в таблице приведено описание этапа разрушения и гомогенизации
свежих замороженных или фиксированных в RNAlater тканей в приборе
MagNA Lyser *.
О Внесите 80 мкл буфера для лизиса тканей (флакон Т) в пробирку с
частицами MagNA Lyser Green Beads*. Затем поместите образец ткани
массой МО мкг в пробирку.
® Рекомендуется по крайней мере в начале использовать удвоенной
количество ткани и буфера для гомогенизации, поскольку часть лизата
(связавшуюся между гомогенизирующими частицами) отобрать не удастся.
• Настройте прибор MagNA Lyser как описано в Руководстве пользователя
прибора.
• Запустите цикл гомогенизации, задав скорость и время в соответствии с
материалом образца.
^ Всегда настраивайте параметры гомогенизации (скорость, время) перед
проведением выделения ДНК. Недостаточное разрушение ткани может
привести к недостаточному выходу ДНК, тогда как избыточное разрушение
приведет к деградации ДНК. В качестве ориентиров используйте значения,
‘ 1 ич ■ ‘
Печень/почки 6500 обУмин. 15-20 сек.
Селезенка/опухолевые ткани/ 6500 об./мин. > 25 сек.’
хвост/ухо/кожа
фиксированные в RNAlater
ткани
® # Длительные циклы разрушения могут приводить к деградации ДНК
вследствие нагревания. Избегайте длительных циклов разрушения,
превышающих 25 сек. Лучше проведите несколько циклов разрушения не
более 25 сек. каждый. Между циклами разрушения ткани охлаждайте
образцы на льду.
® Инкубируйте образцы 30 мин. (при КТ).
О Центрифугируйте 2 мин. при 13,000 х g (при КТ).
www.roche-applled-sclence.com
--- стр. 66 ---
Разрушение
тканей в ротор-
(паторном
гомогенизаторе
О Перенесите 80 мкл супернатанта лизата в Картридж для образцов.
® Поместите Картридж для образцов на платформу для реагентов/образцов
и запустите протокол выделения ДНК как описано в разделе 2.4.
Ниже в таблице приведено описание этапа разрушения и гомогенизации
свежих/замороженных или фиксированных • RNAlater тканей в ротор-
статорном гомогенизаторе {например, UltraTurrax или Omni ТН220).
Разрушение
тканей с
помощью ступки,
пестика и шприца
О Лизируйте и гомогенизируйте ткань в 80 мкл буфера для лизиса тканей
(флакон Т) в ротор-статорном гомогенизаторе, следуя инструкции к прибору.
В зависимости от типа образцов, ротор-статорный гомогенизатор разрушает
и гомогенизирует ткани в течение 5-30 сек. в присутствии лизирующего
буфера.
® В зависимости от типа ткани, может потребоваться несколько циклов
гомогенизации.
А Не допускайте образования пены, удерживая наконечник гомогенизатора
погруженным всегда с одной стороны пробирки.
® Инкубируйте образцы 30 мин. (при КТ).
© Центрифугируйте 2 мин. при 13,000 х g (при КТ).
О Перенесите 80 мкл супернатанта лизата в Картридж для образцов.
© Поместите Картридж для образцов на платформу для реагентов/образцов
и запустите протокол выделения ДНК как описано в разделе 2.4.
Ниже в таблице приведено описание этапа разрушения и гомогенизации
свежих/замороженных или фиксированных в RNA/a/er тканей с помощью
ступки, пестика и шприца.
О • Тщательно измельчите пестиком в ступке замороженный в жидком азоте
образец ткани массой 1-10 мкг. Перенесите полученный порошок в
подходящую для центрифугирования пробирку, охлажденную в жидком
азоте.
• Дайте испариться остаткам жидкого азота, но не допускайте оттаивания
образца.
• Внесите 80 мкл буфера для лизиса тканей и гомогенизируйте образец,
пропустив его несколько раз через иглу шприца (0 0.8 мм).
© Инкубируйте образцы 30 мин. (при КТ).
© Центрифугируйте 2 мин. при 13,000 х g (при КТ).
© Перенесите 80 мкл супернатанта лизата в Картридж для образцов.
© Поместите Картридж для образцов на платформу для реагентов/образцов
и запустите протокол выделения ДНК как описано в разделе 2.4.
--- стр. 84 ---
Содержание
1. Назначение данного продукта..................................
Количество тестов
Содержание набора
Условия хранения и стабильность
Необходимые дополнительные оборудование н реагенты
Область применения
Длительность постанов1си
2. Работа сданным продуктом....................................
2.1 Предварительные действия
Меры предосторожности
Протокол выделения
Образцы
Приготовление рабочих растворов
Контроли
|2.2 Предварительные этапы
"общие замечания
Цельная кровь
Лейкоциты
МНПК
Первичные клетки
Клеточные культуры
2.3 Протокол выделения РНК
Общие замечания
Протокол
Хранение выделенной РНК
Последующий анализ
3. Результаты ..............................................................
Стабильность РНК
Выход
Чистота
Воспроизводимость
gl. Анализ ошибок.........................................................
Дополнительная информация о продукте ................
Назначение данного продукта
Принцип теста
Литература
Контроль качества
6. Вспомогательная информация.................................
6.1 Обозначения
Текстовые обозначения
Символы
Аббревиатуры
6.2 Изменения относительно предыдущей версии
6.3 Информация для заказа
6.4 Ограничения, налагаемые лицензией
6.5 Торговые марки
...3
3
3
4
4
4
4
....5
5
5
6
7
7
9
9
9
9
10
10
11
1 1
12
12
12
13
14
. 15
15
15
15
16
. 17
.19
19
19
20
20
,21
2 1
21
2 1
2 1
2 1
22
23
23
--- стр. 85 ---
Количество тестов
Содержание
набора
192 выделения (б х 32) из образцов цельной крови млекопитающих
объемом до 200 мкл и до 1 х 10* клеток крови или культуральных
клеток.
® Набор рассчитан на обработку 192 образцов в сериях по 32. Если
обрабатывать одновременно менее 32 образцов, часть реагентов будет
расходована напрасно и оставшегося объема будет недостаточно для
обработки количества образцов, указанного выше.
® Лизирующий/связывающий буфер содержит синий краситель,
предназначенный для детекции сгустков во время автоматизированного
выделения РНК в приборе MagNA Pure LC.
Пробирка
/Крышка
Маркировка Содержание / Назначение
1
черная
Wash Buffer I
(Промывочный буфер I)
* 4 флакона по 100 мл
• для удаления ингибиторов ГТЦР.
2
синяя
Wash Buffer 11
(Промывочный буфер 11)
* 4 флакона по 100 мл
* для удаления солей, белков и т.д..
3
зеленая
Lysis/Binding Buffer
(лизирующий/связывающий
буфер)
* 2 флакон, 100 мл
* для связывания РНК на поверхности
м е ч
4
бежевая
Magnetic Glass
Particles
(магнитные стеклянные
частицы)
* 6 стеклянных флаконов по 2.5 мл с
суспензией
* для связывания РНК
5а
белая
DNase
(ДНКаза)
* 6 стеклянных флаконов с
лнофилизованным материалом
* для расщепления ДНК
5Ь
белая
DNase Incubation
Buffer
(Буфер для инкубации с
ДНКазой)
* 1 флакон. КХ) мл
• для восстановления ДНКазы
6
красная
Isopropanol
(изопропанол)
• 1 флакон, 50 мл
* для связывания РНК
7а
розовая
Proteinase К
(Протеиназа К)
* 6 стеклянных флаконов с
лнофилизованным материалом
* для расщепления белков
7Ь
прозрачная
Proteinase К Incubation
Buffer
(Инкубационный буфер для
протеиназы К)
* 1 флакон, 100 мл
* для восстановления протеиназы К
8
желтая
Elution Buffer
(Буфер для элюции)
* I флакон. 100 мл
* для элюции РНК
* для разведения элюата
(дополнительно)
--- стр. 86 ---
Условия хранения и стабильность
• Компоненты набора стабильны при температуре +15 - +25®С до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
®
Необходимые
дополнительные
оборудование
реагенты
Область применения
Длительность
постановки
Набор транспортируется при комнатной температуре.
• стандартное лабораторное оборудование
• дозаторы и свободные от нуклеоз наконечники с аэрозольным барьером
для внесения образцов в картридж для образцов
• центрифуга и соответствующие свободные от нуклеаз реакционные
пробирки
•DTT*
• роллерный инкубатор для перемешивания образцов (во время лизиса
эритроцитов), раствора ДНКазы и МСЧ (магнитных стеклянных частиц)
• вортекс
• Буфер для лизиса эритроцитов* (для выделения лейкоцитов)
• PBS* (для выделения клеток крови, первичных клеток и культуральных
клеток)
• Пробирки Vacutainer СРТ (BD Diagnostics; для выделения МНПК)
• гемоцитометр (например, Neubauer с камерами для подсчета)
® * поставляется Roche Applied Science; см. раздел «Информация для
заказа».
Для лабораторных исследований. Для выделения тотальной РНК из
цельной крови млекопитающих, клеток крови и клеточных культур в
приборе MagNA Pure LC. Очищенная РНК может быть использована для
тестирования в ОТ-ПЦР в приборе LightCycler® и стандартных
термоциклерах, Нозерн-блоте или других стандартных методах анализа
экспрессии генов. Выделенная РНК свободна от ингибиторов ПЦР.
Настройка прибора MagNA Pure LC занимает примерно 15 минут. Общая
длительность автоматизированного выделения РНК при обработке 32
образцов составляет около 90 мин. по протоколам ‘RNA HP Blood’ или
‘RNA HP Blood_exiemal_lysis’ или 150 мин. по протоколу ‘RNA HP Cells’.
После насзройки и запуска прибора MagNA Pure LC дополнительные
манипуляции оператора не требуются. Дополнительные манипуляции
требуются только для предварительного лизиса вне прибора.
--- стр. 96 ---
2.3J
Последующий
анализ
Прибор MagNA Ригс LC может помочь в подготовке реакции ОТ-ПЦР, внося
выделенную РНК и мастермиксы для ОТ-ПЦР, ОТ или ПЦР в капилляры
LigbtCycler® или стандартный пробирки и плашки для ПЦР (Рекомендуемые
плашки приведены в Инструкции пользователя прибора MagNA Риге LC).
Для последующего анализа вы можете поместить капилляры LightCycler® в
вынимаемый охлаждающий блок MagNA Риге LX^ в центрифужных
адаптерах LC или в карусели для образцов LC. Этапы последующего анализа
можно запрограммировать заранее, до начала выделения, или после его
завершения. Подробные сведения о последующем после выделения анализе
приведены в Инструкции пользователя прибора MagNA Pure IX.
--- стр. 97 ---
Стабильность РНК РНК выделяли из 200 мкл цельной крови или 1 х 10^ культуральных клеток
(К562) по соответствующему протоколу выделения RNA HP. Поскольку в
крови содержится в 10-20 раз меньше РНК по сравнению с
культуральными клетками, стабильность РНК в агарозном геле
анализировали при окрашивании SYBR Green II (для выделенной из крови
РНК) или бромистым этидием (для выделенной из культуральных клеток
РНК). На основании интактных полос рРНК в геле, во всех образцах РНК
наблюдали прекрасную стабильность (Рисунки 1а, Ь).
Рисунок 1: Электрофорез в агарозном геле для РНК, выделенной из цельной крови
(1а) и клеток К562 (1Ь).
Рис. 1а. РНК из цельной крови Рис. 1Ь. РНК из клеток К562
Выход РНК выделяли из разных типов клеточных культур или крови человека от
разных доноров. Выход определяли по оптической плотности OD260 и в
электрофорезе в агарозном геле (типичнее результаты приведены Таблице
1). •
Чистота • РНК выделяли из разных объемов и разных типов крови и клеточных
культур. В стандартных экспериментах соотношение оптической плотности
OD260/280 для составляло 2.0 ± 0.1, что указывает на высокую степень
чистоты РНК (см. Таблицу 1).
• РНК выделяли из образцов крови, содержащих различные антикоагулянты
(ЭДТА, цитрат, гепарин). Ингибирование ОТ-ПЦР при последующем
анализе в LightCycler® не наблюдали, что указывало на полное отсутствие
ингибиторов ПЦР в выделенной РНК.
• Во всех экспериментах в ПЦР для всех образцов применяли контроль
“минус-ОТ”. После 40 циклов ПЦР, в данных контролях в ОТ-ПЦР
LightCycler<g) отсутствовал положительный сигнал, что указывало на полное
отсутствие контаминирующей геномной ДНК.
А В зависимости от чувствительности ОТ-ПЦР и параметров реакции,
иногда на поздних циклах ПЦР может появляться слабый положительный
сигнал в контролях «минус-ОТ». Обычно он слишком слаб и не влияет на
анализ ОТ-ПЦР. Однако мы рекомендуем подбирать праймеры к областям
соединения экзон/экзон РНК, такие праймеры не позволяют
амплифицировать геномную ДНК.
--- стр. 98 ---
Таблица 1: Выход и чистота РНК, выделенной нэ образцов разных типов. Все
данные представляют собой средние значения, полученные при 4 - S повторах.
Приведены результаты разных экспериментовз. Обратите внимание, что в крови
обычно содержится в 10-20 раз меньше РНК по сравнению с 1^льтуральными
клетками, и содержание РНК варьирует среди доноров и разных типов клеточных
культур. Кроме того, результат выделения зависит от хранения образца и
интенсивности роста клеток при культивировании.
Цходадк?!
(мкг)'
щ ш ы г ^
РНК
(бШ60/28б) •
Кровь/донор 1 (200 мкл) 1.15 2.09
Кровь/донор 2 (200 мкл) 1.10 2.09
Кровь/донор 3 (200 мкл) 1.21 2.08
Кровь/донор 4 (200 мкл) 1.32 2.07
Кровь/донор S (200 мкл) 1.38 2.08
Кровь/донор 6 (200 мкл) 1.40 2.09
Клетки 562 (10“) 17.5 2.0
Клетки HeLa(10'*) 15.5 2.0
Воспроизводимость • Воспроизводимость внутри постановки: РНК выделяли из 16 образцов
крови объемом 200 мкл или 16 образцов 10* клеток К562. Стандартное
отклонение выхода и чистоты РНК составляло около 10%, варьирование
значение ТП LightCycler® составляло около 3%.
* Воспроизводимость между постановками: В 4 независимых постановках
РНК выделяли из 8 образцов 10* культуральных клеток. Стандартное
отклонение выхода и чистоты РНК составляло около 10%, варьирование
значение ТП LightCycler® составляло около 3%.
--- стр. 108 ---
Содержание
1. Назначение данного продукта..................................................................................................................3
Количество тестов 3
Содержание набора 3
Условия хранения и стабильность 4
Необходимые дополнительные оборудование и реагенты 4
Область применения 5
Длительность постановки 5
2. Работа с данным продуктом.....................................................................................................................6
2.1 Предварительные действия 6
Меры предосторожности 5
Протокол выделения 7
Образцы 7
Приготовление рабочих растворов 8
2.2 Предварительные этапы для свежих замороженных образцов ткани..................................................10
|рОбщие замечания 10
Разрушение ткани в приборе MagNA Lyser 10
Разрушение ткани в ротор-статорном гомогенизаторе 11
Разрушение ткани с помощью ступки/пестика/шприца 11
2.3 Предварительные этапы для фиксированных в формалине парафиновых блоков ткани..................12
Общие замечания 12
Депарафинизация в реакционных пробирках 12
Депарафинизация на предметном стекле микроскопа 13
2.4 Протокол выделения РНК........................................................ 13
Общие замечания 13
Протокол 14
Хранение выделенной РНК 1 5
Последующий анализ 15
3. Результаты ................................ 16
Стабильность РНК 16
Выход 16
Чистота 16
1^4. Анализ ошибок ..................18
S* ^1ополИнтельнаа нн^^ормациа о продукте 19
Назначение данного продукта 19
Принцип теста 19
Литература 21
Контроль качества 21
6. Вспомогательная информация......................................................................................... 22
6.1 Обозначения 22
Текстовые обозначения 22
Символы 20
Аббревиатуры 22
Изменения относительно предыдущей версии 22
6.2 Информация для заказа 23
6.3 Ограничения, налагаемые лицензией 25
6.4 Торговые марки 25
--- стр. 109 ---
Количество
тестов
Содержание
набора
• 192 выделения (6 х 32) из образцов массой до 10 мг свежей
замороженной или незамороженной стабилизированной ткани человека
или животных.
• 96 выделений (3 х 32) из образцов размером до 20 мкм фиксированной
в формалине ткани человека или животных в парафиновых блоках.
А набор рассчитан на обработку 192 образцов в сериях по 32. Если
обрабатывать одновременно менее 32 образцов, часть реагентов будет
расходована напрасно и оставшегося объема будет недостаточно для
обработки количества образцов, указанного выше.
® Вы можете сочетать выделение из образцов свежих замороженных и
фиксированных в формалине тканей, то есть проводить
• 128 (4 X 32) выделения тотальной РНК из образцов свежей
замороженной ткани и 32 (1 х 32) из блоков фиксированной в
формалине ткани, или
• 64 (2 X 32) выделения тотальной РНК из
замороженной ткани и 64 (2 х 32) из блоков
формалине ткани
® Связывающий буфер содержит синий краситель, предназначенный
для детекции сгустков.
образцов свежен
фиксированной в
Пробирка
/Крышка
Маркировка Содержание / Назначение
1
черная
Wash Buffer I
(Промывочный буфер 1)
• 2 флакона по 100 мл
• для удаления ингибиторов ПЦР.
2
синяя
Wash Buffer И
(Промывочный буфер
II)
• 3 флакона по 100 мл
• для удаления солей, белков и т.д..
3
красная
Binding Buffer
(связывающий буфер)
• 1 флакон, 100 мл
* для связывания РНК на поверхности
м е ч
4а
белая
DNase I, RNasc-frec
(ДНКаза!, свободная от
РНКаз)
• 6 стеклянных флаконов с
лиофилизованным материалом
* для расщепления ДНК
4Ь
белая
DNase Incubation
Buffer
(Буфер для инкубации с
ДНКазой)
• 1 флакон, 70 мл
• для восстановления ДНКазы I (флакон
4а)
5
бежевая
Magnetic Glass
Particles
(магнитные стеклянные
частицы)
* 6 стеклянных флаконов по 2.5 мл с
суспензией
* для связывания РНК
6а
розовая
Proteinase К
(Протеиназа К)
■ 6 стеклянных флаконов с
лиофилизованным материалом
* для расщепления белков
6Ь
прозрачная
Proteinase К Incubation
Buffer
(Инкубационный буфер
для протеиназы К)
• 1 флакон, 50 мл
* для восстановления протеиназы К
--- стр. 110 ---
Необходимые
дополнительные
вЬборудование
реагенты
Условна хранения и стабильность
• Компоненты набора стабильны при температуре +2 - +8®С до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
® Набор транспортируется при комнатной температуре.
• стандартное лабораторное оборудование
• дозаторы и свободные от нуклеаз наконечники с аэрозольным барьером
для внесения образцов и ДНКазы в пробирки для образцов
• центрифуга и соответствующие свободные от нуклеаз реакционные
пробирки
• вортекс
• термоблок или водяная баня
• приспособления для гомогенизации, например:
- Прибор MagNA Lyser • с частицами MagNA Lyser Green Beads*
- ротор-статорный гомогенизатор {например, UltraTurrax или Omni ТН 220)
> ступка/пестик/игла (0 0.6 мм)
• Hemo-De или ксилол
• этанол, абсолютный
•SDS*, 10%
• поставляется Roche Applied Science
Пробирка
/Крышка
Маркировка Содержание / Назначение
7 Elution Buffer • I флакон, 100 мл
желтая рлюционный буфер) * для элюции очищенных нуклеиновых
кислот
* для разведения растворенной ДНК
(дополнительно)
* для восстановления фермента для
гомогенизации парафина
8 Tissue Lysis Buffer * 2 флакона по 70 мл
зеленая (Лизирующий буфер для
тканей)
• для лизирования TKaitefl и связывания
РНК на поверхности МСЧ. 5
9а Paraffin • стеклянный 1 флакон с 1
розовая Homogenization
Enzyme
(фермент для
гомогенизации
парафина)
лнофнлизованным материалом
• для расщепления белков в
парафиновых блоках
9Ь Paraffin * 1 флакон, 20 мл
белая Homogenization • для гомогенизации парафиновых
Buffer
(буфер для
гомогенизации
блоков t
»
в
1:
t
1парафина) t
--- стр. 111 ---
Область применения Для лабораторных исследований. Для выделения высокоочищенкой
тотальной РНК из образцов свежей замороженной или фиксированной в
формалине в парафиновых блоках тканей человека и животных в приборе
MagNA Риге LC. Также могут использоваться образцы незамороженной
стабилизированной с помощью специальных реагетт)в ткани {например,
RNAlater). Выделенная из образцов свежей ткани РНК может
использоваться для ОТ-ПЦР в приборе LightCycler® или стандартных
термоциклерах, Нозерн>блоте и других методах анализа экспрессии генов.
Качество РНК, выделенной из парафиновых блоков фиксированной в
формалине ткани позволяет проводить относительный количественный
анализ РНК в ОТ-ПЦР, в том числе в приборе LightCycler®. Выделенная
РНК свободна от ингибиторов ПЦР. Также выделенная РНК является
идеальным материалом для постановок на микрочипе.
71лительность
постановки
Настройка прибора MagNA Риге LC занимает примерно 15 минут. Общая
длительность автоматизированного выделения РНК из 32 образцов свежей
замороженной ткани составляет около 84 минут (по протоколу *RNA
Tissue Fresh-frozen’) или 122 минуты при выделении РНК из 32 образцов
ткани, фиксированных в формалине (по протоколу ‘RNA Tissue Paraffin’);
После настройки и запуска прибора MagNA Pure LC дополнительные
манипуляции оператора не требуются. Дополнительные манипуляции
требуются только для предварительных этапов выделения.
--- стр. 115 ---
Протеиназа К
Раствор фермента для
гомогенизации
парафина
Контроли
Восстановите всю протеиназу К (флакон 6а).
внеся в каж/(ый флакон по 3 мл буфера для
элюции (флакон 6). Закройте флакон и
тщательно перемешайте до полного
растворения лиофилизата. Только после
полного растворения добавьте во флакон еще 2
мл буфера для элюции для получения
конечного объема.
Д После восстановления раствор протеиназы
К может быть мутным. Это связано с
присутствием стабилизирующих добавок в
реагенте. Это не оказывает влияния на работу
фермента.
® Один флакон протеиназы К рассчитан на
выделение 32 образцов.
Восстановите лиофилизованный фермент для
гомогенизации парафина (флакон 9а), добавив
4.5 мл буфера для элюции (флакон 7).
Тщательно перемешайте до полного
растворения лиофилизата.
После восстановления
раствор протеи>{азы К
стабилен в течение I месяца
при +2 - +8®С или в течение
12 месяцев при -15 - -25®С.
• Сделайте аликвоты и
храните при -IST - -25“С
(до 1 года).
• Восстановленный реагнт
храните в аликвотах,
промаркированных
наклейками, прилагаемыми к
набору.__________________
Всегда используйте в постановках соответствующие контроли, особенно если для
выделенных образцов планируется проведение качественного анализа образцов
мРНК (напрхмер. в ПЦР в реальном времени в приборе LightCycler®). Для
контроля всего процесса от выделения образцов до количественного анализа,
используйте следующие контроли:
• Положительный контроль, материал, положительный по анализируемой мишени.
• Отрицательный контроль, материал, отрицательный по анализируемой мишени.
• Внутренний контроль (ВК), вносимая в каждый выделяемый образец в известном
количестве контрольная матрица.
® Внутренний контроль (ВК) до начала выделения и проходит затем все этапы
выделения и амплификации, что и мишень, в той же реакционной пробирке.
Применение ВК особенно важно при проведении энзиматических реакций, таких
как ОТ-ПЦР, поскольку эффективность процесса ОТ-П1ДР может снижаться при
наличии в очищенном образце ингибиторов. Кроме того, внутренний контроль
служит для мониторинга возможных потерь материала во время выделения.
® Для количественных тестов в приборе LightCycler®, в качестве внутреннего
контроля используют синтетические молекулы РНК с сайтами посадки праймеров,
идентичными мишени, но имеющие свой уникальный участок посадки зондов для
дифференциации ампликонов мишени н ВК. Разделение сигналов от мишени и ВК
проводится за счет применения разных красителей в тестах формата НуЬРгоЬе.
Подробные сведения о применении ВК в системе LightCycier® можно найти в
брошюре LightCycIer® 12/2000 «Абсолютный количественный анализ при
использовании внешних стандартов и внутреннего контроля» (“Absolute
Quantification with External Standards and an Internal Control”) на сайте
http://www.lightcycler.com.
--- стр. 116 ---
Общие замечания « Полное разрушение и гомогенизация материала образца является
ключевым моментом для выделения внутриклеточной РНК из тканей.
Неполное разрушение ткани приводит к значительному снижению выхода
РНК.
• При гомогенизации лизата ткани происходит расщепление
высокомолекулярной геномной ДНК и других высокомолекулярных
компонентов клетки, что способствует снижению вязкости лизата. Неполная
гомогенизация лизата приводит к значительному снижению выхода РНК и
может вызывать засорение реакционных наконечников.
• В некоторых методах пробоподготовки одновременно происходит лизис и
гомогенизация образцов, тогда как в других методах разрушения ткани
требуется дополнительный этап гомогенизации.
^ Всегда готовьте свежие лизаты образцов и обрабатывайте их немедленно.
Храните лизаты при -70^С или ниже, если планируете проводить выделение
РНК позже.
Разрушение тканей
в приборе MagNA
Lyser
Ниже в таблице приведено описание этапа разрушения и гомогенизации
свежих замороженных или фиксированных в RNAlater тканей в приборе
MagNA Lyser *.
О Внесите 80 мкл буфера для лизиса тканей в пробирку с частицами MagNA
Lyser Green Beads*. Затем поместите образец ткани в пробирку.
• Настройте прибор MagNA Lyser как описано в Руководстве пользователя
прибора.
• Запустите цикл гомогенизации, задав скорость и время в соответствии с
материалом образца.
Д Всегда настраивайте параметры гомогенизации (скорость, время) перед
проведением выделения РНК. Недостаточное разрушение ткани может
привести к недостаточному выходу РНК, тогда как избыточное разрушение
приведет к деградации РНК. В качестве ориентиров используйте значения,
приведенные в качестве примера в таблице ниже:
Печень/почки 6500 об./мин.
Селезенка/опухолевые ткани 6500 об./мин. 2 X 50 сек."
Хвост/ухо/кожа 6500 об./мин. 2 - 3 X 50 сек."
50 сек.
^ # Длительные циклы разрушения могут приводить к деградации РНК
вследствие нагревания. Избегайте длительных циклов разрушения,
превышающих 50 сек. Лучше проведите несколько циклов разрушения не
более 50 сек. каждый. Между циклами разрушения ткани охлаждайте
образцы на льду.
0 Инкубируйте образцы 30 мин. (при КТ).
© Це 1ггрифугируйте 2 мин. при 13,000 х g (при КТ).
О Перенесите 350 мкл супернатанта лизата в Картридж для образцов.
© Поместите Картридж для образцов на платформу для реагентов/образцов
и запустите протокол “RNA Tissue Fresh_frozen” как описано в разделе 2.4.
--- стр. 117 ---
Разрушение
тканей в ротор* *
статорном
гомогенизаторе
Ниже в таблице приведено описание этапа разрушения и гомогенизации
свежих замороженных или фиксированных ■ "^Alater тканей в ротор-
статорном гомогенизаторе {например. UltraTurrax или Omni ТН220).
Разрушение
тканей с
помошью ступки,
пестика и шприца
О Лизируйте и гомогенизируйте ткань в 350 мкл буфера для лизиса тканей в
ротор-статорном гомогенизаторе, следуя инструкции к прибору. В
зависимости от типа образцов, ротор-статорный гомогенизатор разрушает и
гомогенизирует ткани в течение 5-90 сек. в присутствии лизирующего
буфера.
А Не допускайте образования пены, удерживая наконечник гомогенизатора
погруженным всегда с одной стороны пробирки.
® Инкубируйте образцы 30 мин. (при КТ).
€) Центрифугируйте 2 мин. при 13,000 х g (при КТ).
О Перенесите 350 мкл супернатанта лизата в Картридж для образцов.
® Поместите Картридж для образцов на платформу для реагентов/образцов
и запустите протокол “RNA Tissue Fresh_frozcn” как описано в разделе 2.4.
Ниже в таблице приведено описание этапа разрушения и гомогенизации
свежих замороженных или фиксированных » J^AJater тканей с помощью
ступки, пестика и шприца.
О • Тщательно измельчите пестиком в ступке замороженный в жидком азоте
образец ткани. Перенесите полученный порошок в подходящую для
центрифугирования пробирку, охлажденную в жидком азоте.
• Дайте испариться остаткам жидкого азота, но нс допускайте оттаивания
образца.
• Внесите 350 мкл буфера для лизиса тканей и гомогенизируйте образец,
пропустив его несколько раз через иглу шприца (0 0.6 мм).
® Инкубируйте образцы 30 мин. (при КТ).
О Центрифугируйте 2 мин. при 13,000 х g (при КТ).
О Перенесите 350 мкл супернатанта лизата в Картридж для образцов.
в Поместите Картридж для образцов на платформу для реагентов/образцов
и запустите протокол “RNA Tissue Fresh-frozen” как описано в разделе 2.4.
*-
--- стр. 121 ---
Запуск постановки
Хранение
выделенной РНК
Последующий
анализ
• На экране Start Information Screen подтвердите правильность расположения
расходных материалов и реагентов, кликнув мышью в соответствующих
окнах.
• Нажмите кнопку ‘ОК’, чтобы начать автоматизированную процедуру
выделения РНК. Прибор автоматически внесет все реагенты и проведет
выделение.
Д Для сохранения максимальной стабильности выделенной РНК,
немедленно начните подготовку ОТ-ПЦР. Не храните выделенную РНК в
Картридже для хранения в охлаждающем блоке 1.
Для длительного хранения (в течение нескольких недель), закройте
Картридж для хранения пленкой* и храните РНК при -70®С. Лучше хранить
РНК в аликвотах, чтобы избежать многократного оттаивания/замораживания
выделенных нуклеиновых кислот.
Прибор MagNA Pure LC может помочь в подготовке реакции ОТ-ПЦР, внося
выделенную мРНК и мастермиксы для ОТ-ПЦР, ОТ или ПЦР в капилляры
LightCycler® или стандартный пробирки и плашки для ПЦР (Рекомендуемые
плашки приведены в Инструкции пользователя прибора MagNA Pure IX).
Для последующего анализа вы можете поместить капилляры LightCycler® в
вынимаемый охлаждающий блок MagNA Pure LC в центрифужных
адаптерах LC или в карусели для образцов LC. Этапы последующего анализа
можно запрограммировать заранее, до начала выделения, или после его
завершения. Подробные сведения о последующем после выделения анализе
приведены в Инструкции пользователя прибора MagNA Pure LC.
--- стр. 122 ---
Стабильность РНК Тотальную РНК выделяли из образцов массой 10 мг свежей замороженной
или обработанной RNAlater печени мыши по протоколу “RNA Tissue
fTcsh_frozen”. Стабильность РНК проверяли в денатурирующем агарозном
геле с бромистым этидием. Интактные полосы РНК на геле указывали на
хорошую стабильность РНК во всех образцах.
Рисунок 1: Электрофорез в денатурирующем агарозном геле для РНК, выделенной
из свежих замороженных (дорожки 1-3) или обработанных RNA/a/er (дорожки 4-6)
образцов печени мыши.
28 $
■18$
Выход
Чистота
РНК выделяли из свежих замороженных или обработанных RNA/n/^r
образцов ткани, а также парафиновых блоков. Выход РНК определяли по
оптической плотности OD260 и методом электрофореза в агарозном геле
(значения стандартного выхода приведены в Таблице I).
• РНК выделяли из образцов разной величины разных типов. В стандартных
экспериментах соотношение оптической плотности OD260/280 для РНК
составляло 2.0 ± 0.2, что указывает на высокую степень чистоты выделенной
РНК (таблица 1).
• Во всех экспериментах для всех образцов проводили контрольную "минус-
ОТ* ПЦР для выявления циклофилина А. После 40 циклов ПЦР анализ в ОТ-
ПЦР LightCycler® показал отсутствие сигнала, что указывало на полное
отсутствие геномной ДНк в препаратах РНК (см. Рисунок. 2).
® В зависимости от чувствительности ОТ-ПЦР и параметров ОТ-ПЦР,
иногда на поздних циклах в минус-ОТ контрольной ПЦР может возникать
слабый сигнал. Обычно он слишком слаб, чтобы влиять на результаты
анализа в ОТ-ПЦР. Однако мы рекомендуем подбирать праймеры к
пограничным участкам между экзонами мРНК, которые не должны
амплифицировать геномную ДНК.
--- стр. 123 ---
!1Е|[|| образец (|^ВЙчество) Выход 1УН(МКГ)
Свежая замороженная ткань (10
мг)
5-50
Обработанная KNAlater ткань (10
мг)
5-50
Фиксированная в формалине
ткань в парафиновых блоках (5
мкм)
1-3
Чистота
2.0 ±0.2
о
Рисунок. 2: ПЦР-анализ LighlCycler® (формат HybProbe) тотальной РНК,
выделенной с набором MagNA Pure LC RNA Isolation Kit III (Tissue),
направленный на выявления цитофилина А, не выявил присутствия
остаточной геномной ДНК. В качестве контроля параллельно
амплифицировали 10 нг геномной ДНК.
--- стр. 134 ---
Содержание
1. Назначение данного продукта.....................................
Количество тестов
Содержание набора
Условия хранения и стабильность
Необходимые дополнительные оборудование и реагенты
Область применения
Длительность постановки
2. Работа с данным продуктом.........................................
2.1 Предваркгельные действия
Меры предосторожности
Протокол выделения
Образцы
2.2 Приготовление рабочих растворов
^Контроли
92.3. предварительные этапы
Общие замечания
Протокол лизиса вне прибора
2.4 Протокол выделения тотальных нуклеиновых кислот
Общие замечания
Протокол
Хранение выделенных нуклеиновых кислот
Последующий анализ
3. Результаты.................................. ..................................
Линейность результатов
Воспроизводимость
Предотвращение перекрестных контаминаций
Воспроизводимость
3
3
3
3
3
4
4
т
4. Анализ ошибок
5. Дополнительная информация о продукте....
5.1 Назначение данного продукта
Принцип теста
.2 Контроль качества
5.3 Литература
6. Вспомогательная информация......................
6.1 Обозначения
Текстовые обозначения
Символы
Аббревиатуры
6.2 Изменения относительно предыдущей версии
6.3 Информация для заказа
6.4 Ограничения, налагаемые лицензией
6.5 Торговые марки
....э
5
5
6
7
7
8
9
9
9
9
9
10
11
12
... 13
13
13
14
14
...15
.. 16
16
16
18
18
..19
19
19
19
19
20
20
22
22
--- стр. 135 ---
1. Назначение данного продукта
Количество
тестов
Содержание набора
192 выделения из образцов плазмы или сыворотки крови
млекопитающих объемом до 200 мкл. Или образцов цельной крови
млекопитающих объемом до 100 мкл.
® Набор рассчитан на обработку 192 образцов в сериях по 32. Если
обрабатывать одновременно менее 32 образцов, часть реагентов будет
расходована напрасно и оставшегося объема будет недостаточно для
обработки количества образцов, указанного выше.
® Лизирующий/связывающий буфер содержит синий краситель,
предназначенный для детекции сгустков при автоматизированном
выделении нуклеиновых кислот в приборе MagNA Риге LC.
Пробирка
/Крышка
Маркировка Содержание / Назначение
I
черная
Wash Buffer 1
(Промывочный буфер 1)
* 2 флакона по 100 мл
• для удаления ингибиторов ПЦР
2
синяя
Wash Buffer II
(Промывочный буфер II)
* 1 флакон. 100 мл
* для удаления солей, белков и т.д..
3
красная
Wash Buffer III
(Промывочный буфер III)
• 2 флакона по 100 мл
• для удаления солей, белков и т.д..
4
зеленая
Lysis/Binding Buffer
(лизирующий/связывающий
буфер)
* I флакон. 100 мл
• для лизиса клеток и связывания
тотальных нуклеиновых кислот
5
розовая
Proteinase К
(Протеиназа К)
• 6 стеклянных флаконов с
лиофилнзованным материалом
* для расщепления белков
6
бежевая
Magnetic Glass Particles
(MGPs) Suspension
(Магнитные стеклянные
частицы. МСЧ, суспензия)
• 6 стеклянных флаконов с суспензией
МСЧ, по I мл каждый
• для связывания нуклеиновых кислот
7
желтая
Elution Buffer
(Элюционный буфер)
• 1 флакон, 100 мл
• для элюцин очищенных нуклеиновых
кислот
• для восстановления протеиназы К
• для разведения выделенных нуклеиновых
кислот(дополнительно)
Условия хранения н стабильность
• Компонеты набора стабильны при температуре +15 - +25®С до
истечения срока годности, указанного на упаковке.
® Набор транспортируется при комнатной температуре
Необходимые
дополнительные
оборудование и
реагенты
• стандартное лабораторное оборудование
• дозаторы и свободные от нуклеаз наконечники с аэрозольным
барьером для внесения образцов и ДНКазы в пробирки для образцов
• центрифуга и соответствующие свободные от нуклеаз реакционные
пробирки
• вортекс для ресуспендирования МСЧ
--- стр. 136 ---
Область применения Для лабораторных исследований. Набор MagNA Pure LC Total Nucleic
Acid Isolation Kit специально разработан для выделения тотальных
нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) из образцов сыворотки крови, плазмы и
цельной крови млекопитающих в приборах MagNA Pure LC [MagNA Pure
LC l.O (Кат. №. 12 236 931 001) и MagNA Pure LC 2.0 (Кат. №. 05 197 686
(Ю1)]. Выделенные тотальные нуклеиновые кислоты могут быть
использованы для тестирования в ОТ-ГШр и ПЦР в приборе LightCycler®
или стандартных термоциклерах. Выделенные тотальные нуклеиновые
кислоты свободны от любых ингибиторов ПЦР.
Длительность
постановки
Настройка прибора MagNA Pure LC занимает примерно 15 минут. Общая
длительность автоматизированного выделения нуклеиновых кислот из 32
образцов составляет примерено 90 минут.
©После настройки и запуска прибора MagNA Pure LC дополнительные
манипуляции оператора не требуются. Дополнительные манипуляции
требуются только для предварительных этапов выделения.
--- стр. 158 ---
Содержание
1. Назначение данного продукта......................................
Количество тестов
Содержание набора
Условия хранения и стабильность
Необходимые дополнительные оборудование и реагенты
Область применения
Длительность постановки
2. Работа сданным продуктом........................................
2.1 Предварительные действия
Меры предосторожности
Протокол выделения
Образцы
Приготовление рабочих растворов
Контроли
.2 Протокол выделения ДНК
^Общие замечания
Протокол
Хранение выделенных нуклеиновых кислот
Последующий анализ
3. Результаты .....................................................................
Линейность результатов
Предотвращение перекрестных контаминаций
Воспроизводимость (внутри постановки)
Воспроизводимость (между постановками)
4. Анализ ошибок................................................................
5. Дополнительная информация о продукте..................
Назначение данного проду1сга
Принцип теста
Контроль качества
Литература
6. Вспомогательная информация.....................................
.1 Обозначения
Текстовые обозначения
Символы
Аббревиатуры
6.2 Изменения относительно предыдущей версии
6.3 Информация для заказа
6.4 Ограничения, налагаемые лицензией
6.5 Торговые марки
...3
3
3
3
4
4
4
...5
5
5
6
6
6
7
8
8
9
10
10
, 11
11
11
12
12
,13
14
14
14
15
15
16
16
16
16
16
16
17
19
19
www.roche-applled-science.com
--- стр. 159 ---
1. Назначение данного продукта
Количество
тестов
Содержание набора
192 выделения (6 х 32) из образцов плазмы или сыворотки крови
млекопитающий объемом до 1 мл
® набор рассчитан на обработку 192 образцов в сериях по 32. Если
обрабатывать одновременно менее 32 образцов, часть реагентов будет
расходована напрасно и оставшегося объема будет недостаточно для
обработки количества образцов, указанного выше.
® Лизирующий/связывающий буфер содержит синий краситель,
предназначенный для детекции сгустков при автоматизированном
выделении ДНК в npn6opeMagNA Ригс LC.
Пробирка
/Крышка
Маркировка Содержание / Назначение
1
черная
Wash Buffer I
(Промывочный буфер
I)
• 2 флакона по 100 мл
• для удаления ингибиторов ПЦР
2
синяя
Wash Buffer II
(Промывочный буфер
И)
• 1 флакон, 100 мл
• для удаления солей, белков и т.д..
3
красная
Wash Buffer Ш
(Промывочный буфер
Ш)
• 2 флакона по 100 мл
• для удаления солей, белков и т.д..
4
зеленая
Lysis Buffer
(лизирующий буфер)
•4 флакона по 100 мл
• для лизиса клеток и связывания ДНК
5
розовая
Proteinase К
(Протеиназа К)
• 6 стеклянных флаконов с лиофнлизованным
материалом
* для расшеплемия белков
6
бежевая
Magnetic Glass Particles
(MGPs) Suspension
(Магнитные
стеклянные частицы,
МСЧ. суспензия)
• 6 стеклянных флаконов с суспензией МСЧ,
по 1 мл каждый
• для связывания нуклеиновых кислот
7
желтая
Elution Buffer
(Элюционный буфер)
* 1 флакон, 100 мл
* для элюции очищенных нуклеиновых кислот
* для восстановления протеиназы К
* для разведения растворенной ДНК
(дополнительно)
Условия хранения и стабильность
• Компоненты набора стабильны при температуре +2 - +8®С до
истечения срока годности, указанного на упаковке.
® набор транспортируется при комнатной температуре
^ Никогда не храните МСЧ в пробирке для реагентов. •
Необходимые
дополнительные
оборудование и
реагенты
• стандартное лабораторное оборудование
• дозаторы и свободные от нуклеаз наконечники с аэрозольным
барьером для внесения образцов и ДНКазы в пробирки для образцов
• центрифуга и соответствующие свободные от нуклеаз реакционные
пробирки
• вортекс
--- стр. 160 ---
Область применение Для лабораторных исследований. Набор MagNA Риге LC Total Nucleic
Acid Isolation Kit > Large Volume специально разработан для выделения
тотальных нуклеиновых кислот из образцов сыворотки или плазмы крови
большого объема (до 1 мл) в приборе MagNA Риге LC. Выделенные
тотальные нуклеиновые кислоты могут быть использованы для
тестирования в ПЦР в приборе LightCycler® или стандартных
термоциклерах.
Длительность
постановки
#
Настройка прибора MagNA Pure LC занимает примерно 15 минут. Общая
длительность автоматизированного выделения ДНК составляет примерено
30-120 минут для выделения 1-32 образцов.
После настройки и запуска прибора MagNA Риге LC дополнительные
манипуляции оператора не требуются. Дополнительные манипуляции
требуются только для предварительных этапов выделения.
--- стр. 178 ---
Содержание
1. Назначение данного нродукзи.......................................
Количество тестов
Содержание набора
Условия хранения и стабильность
Необходимые дополнительные оборудование и реагенты
Область применения
Длительность постановки
2. Работа с данным продуктом.........................................
2.1 Предварительные действия
Меры предосторожности
Протокол выделения
Образцы
2.2 Приготовление рабочих растворов
Контроли
2.3 Предварительные этапы..................................................
Стандартная процедура
Особые типы образцов
2.4 Протокол выделения ДНК
Общие замечания
Протокол
Хранение выделенной ДНК
Последующий анализ
3. Результаты........................................................................
Общие замечания
Образцы БАС
Образцы мочи
Образцы стула
Бактериальные культуры
Грибы
Прочие образцы
4. Анализ ошибок ................................................................
|5. Дополнительная информации о продукте ..................
3.1 Назначение данного продукта
Принцип теста
5.2 Контроль качества
5.3 Литература
6. Вспомогательная ннформи 1И1я...................................
6.1 Обозначения
Текстовые обозначения
Символы
Аббревиатуры
6.2 Изменения относительно предыдущей версии
6.3 Информация для заказа
6.4 Ограничения, налагаемые лицензией
6.5 Торговые марки
...3
3
3
3
4
4
4
».5
5
5
5
6
7
8
9
9
10
11
11
1 1
13
13
. 14
14
14
15
15
16
16
16
. 17
. 19
19
19
20
21
22
22
22
22
22
23
23
25
25
--- стр. 179 ---
1. Назначение данного продукта
Количество
тестов
Содержание
набора
• 192 выделения из жидких образцов объемом до 100 мкл.
® Набор рассчитан на обработку 192 образцов в сериях по 32. Если
обрабатывать одновременно менее 32 образцов, часть реагентов будет
расходована напрасно и оставшегося объема будет недостаточно для
обработки количества образцов, указанного выше.
® Лизирующий/связываюншн буфер содержит синий краситель,
предназначенный для детекции сгустков.
Пробирка
/Крышка
Маркировка Содержание / Назначение
1
черная
Wash Buffer I
(Промывочный буфер I)
• 2 флакона по 1(Ю мл
• для улаления ингибиторов ПЦР.
2
синяя
Wash Buffer II
(Промывочный буфер II)
* 2 флакона по 60 мл
• для улаления солей, белков и т.д..
3
красная
Wash Buffer III
(Промывочный буфер III)
• 1 флакон. КЮмл
* лля улаления оставшихся солей,
белков и т.д.
4
зеленая
Lysis/Binding Buffer
(лизирующий/связыпающий
буфер)
• 1 флакон, 100 мл
* для лизиса клеток и связывания
ЛИК
5
бежевая
Magnetic Glass Particles
(MGPs) Suspension
(Магнитные стеклянные
частицы, МеЧ, суспензия)
• 6 стеклянных флаконов с
суспензией МСЧ
• для связывания ДНК
6
желтая
Elution Buffer
(Элюционный буфер)
• 1 флакон, 100 мл
• для элюции очищенной ДНК
• для восстановления
протеиназы К
• для разведения элюата
7
прозрачная
Bacteria Lysis Buffer
(Буфер для лизиса
бактериальных клеток)
* 2 флакона по 30 мл
• для эффективного лизиса
бактериальных клеток
8
розовая
Proieinase К
(Протеиназа К)
* 6 стеклянных флаконов с
.зиофилизованным материалом
• для расщепления белков
Условия хранения и стабильность
• Компоненты набора стабильны при температуре +15 - +25®С до истечения
срока годности, указанного на упаковке.
® Набор транспортируется при комнатной температуре.
--- стр. 180 ---
Необходимые
дополнительные
оборудование
реагенты
• стандартное лабораторное оборудование
• дозаторы и свобол»1ые от нуклеаз наконечники с аэрозольным барьером
для внесения образцов в картридж для образцов MagNA Pure LC.
• центрифуга и соотвегствующие свободные от нуклеаз реакционные
пробирки
• вортекс для ресуспендирования МСЧ
• ПГПТП П (65®С/95*С, для реакционных пробирок объемом 1.5-2 мл)
Область применения
Длительность
постановки
Для лабораторных исследований. Набор MagNA Риге LC DNA Isolalion
Kit III (Bacteria, Fungi) специально разработан для выделения
высокоочииаенной бактериальной и грибной ДНК из образцов разного типа
в приборах MagNA Ригс LC [MagNA Ригс LC 1.0 (Cat. No. 12 236 931 001) и
MagNA Pure LC 2.0 (Cat. No. 05 197 686 001)]. Выделенная из ДНК может
использоваться для ПЦ1* в приборе LighlCycler® или стандартных
термоциклерах.
Настройка прибора MagNA Pure LC занимает примерно 15 мин>т. Общая
длительность авюматмзированного выделения ДНК из 32 образцов
составляет примерно 95 мин.
® После nacrpoiiKii и запуска прибора MagNA Ригс LC дополнительные
манипуляции омерагора не требуются. Дополнительные манипуляции
требуюгея только :и\я предварительных этапов выделения.
--- стр. 202 ---
Конта 1стная
информация
н
техническая
поддержка
Если у вас есть вопросы или вы столкнулись с проблемами при работе с
продукцией Roche Applied
Science (RAS), пожалуйста, свяжитесь с нашей Службой технической
поддержки. Наши специалисты обеспечат быструю и эффективную помощь.
Мы также просим связаться с нами, если у вас есть предложения по
оптимизации работы с продукцией RAS или новым областям применения
нашей продукции. Неоднократно такая информация от клиентов оказывалась
полезной для RAS и мировой науки.
Задать вопросы, решить возникшие проблемы, предложить улучшения или
новые области применения продукции вы можете на нашем сайте
технической поддержки он-лайн:
www.roche-applied-science.com/support
Чтобы позвонить или написать нам, посетите домашнюю страницу Roche
Applied Science, www.roche-applied-science.com, и выберите страну. Появится
контактная информация для выбранной вами страны.
На домашней странице Roche Applied Science выберите Printed Materials,
чтобы найти:
• Подробные инструкции
• FAQS: Протоколы и ссылки для биологических исследований
• наш ежеквартальный бюллетень Biochemica Newsletter
• Данные по безопасности материалов
• Вкладыши к наборам и инструкции
Там же вы можете заказать печатные копии данных материалов.
<^Roche^
Roche Diagnostics GmbH
Roche A)(Hled Sdenoe
68298 Mannheim
Germany
--- стр. 203 ---
Для лабораторных исследований. Не для диагностики.
Только для исследований IN VITRO.
Пробирки для гомогенизации образцов
MagNA Lyser Green Beads
Для гомогенизации твердых образцов, 100 пробирок
Cat. No. 03 358 941 001 Версия февраль 2006
1. Описяние лродуктя
Частицы MagNA Lyser Green Beads представляют собой
керамические частицы диаметром ].4 мм в пробирках с
завинчивающейся крышкой объемом 2 мл. Частицы
специально разработаны для использования в приборе
MagNA Lyser для оптимальной гомогенизации различных
образцов (тканей млекопитающих, растений, клеток и т.д.).
Керамические частицы могут применяться с лизирующими
буферами наборов MagNA Pure LC Kits для вьшеления
нуклеиновых кислот. В основе метода разрушения клеток
^лежит быстрое, постоянное круговое движе 1ше ротора
прибора MagNA Lyser, в который загружены пробирки с
частицами MagNA Lyser Green Bead, в которые внесены
образцы ткани и лизирующие реагенты. Такое движение
ротора обеспечивает оптимальные условия для разрушения
тканей млекопитающих, растений, бактериальных клеток,
клеток дрожжей и прочих материалов. В таких условиях не
требуется применение лизирующих ферментов или
дополнительного измельчения.
Разрушение клеток происходит в приборе MagNA Lyser при
столкновении керамических частиц с материалом образца в
пробирке. Частота столкновения и сила воздействия
(определяющие эффективность процесса разрушения тканей)
являются функциями скорости, задаваемой при настройке
прибора, и массы частиц.
2. Работа с продуктом
Используйте объем образца и лизирующего буфера,
указанное во инструкциях к соответствующих наборах
MagNA Риге LC Isolation. Подробное описание системы
фиведено в Руководстве пользователя прибора MagNA
-yser.
Описание процедуры
1. Поместите ротор в охлаждающий блок MagNA Lyser.
Поместите необходимое количество пробирок MagNA Lyser
Green в ротор.
2. Внесите образцы и лизируюший буфер в пробирки с
частицами MagNA Lyser Green Beads.
- Убедиз^ц что 0*Кольцо правильно вставлено в
крышку пробирки.
- Не перекручивайте крышку при закрывании.
• Крышки должны сидеть ровно (см. рис. 1).
Правильно Неправильно
Рисунок 1.
3. Поместите ротор в прибор и зафиксируйте с
помощью держателя. Все три гайки должны быть
закручены.
4. Гомогенизируйте образцы в соответствии с
Руководством пользователя MagNA Lyser.
5. Центрифугируйте образец, чтобы осадить
клеточный дебрис. затем проведите выделение
нуклеиновых кислот из супернатанта.
Примечание: Объем не должен превышать
указанный на пробирке уровень (см. рис. 2). При
превышении данного уровня образец может
вылиться из пробирки.
Рисунок 2.
3. Информация для заказа
Продукт Кат. №
Прибор MagNA Lyser
(115 вольт)
03 358 968 001
Прибор MagNA Lyser
(230 вольт)
03 358 976 001
Последнюю информацию о продукции MagNA Pure
и MagNA Lyser можно найти на сайте
www.m agnapure.com или обратившись в местное
торговое представительство
MAGNA LYSER и MAGNA PURE являются
торговыми марками Roche.
Контакты и техническая поддержка
Задать вопросы, решить возникшие проблемы,
предложить улучшения или новые области
применения продукции вы можете на нашем сайте
технической поддержки он>лайн:
www.roche* *appIied-science.com/support
Чтобы позвонить или написать нам, посетите
домашнюю старницу Roche Applied Science,
www.roche-applied-science.com . и выберите страну.
Появится контактная информация для выбранной
вами страны. С помощью функции выбора продукта
вы можете найти инструкции и данные по
безопасности доля каждого продукта.
Cl^Roche^
R odie Diagnostics GmbH
Roche Applied Science
68298 Mannheim
Germany
--- стр. 204 ---
Пожалуйста обратитесь к главе 4 инструкции к набору для
выделения НК - MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation
Kit. Кат.№: 03 038 505 001
4. Информация для заказа
Roche Applied Scierwe предлагает большое разнообразие
реагентов и систем для научных исследований. Получить
полную информацию по продукции и инструкциям вы можете
на домашней странице: www.roche-aDolied-science.cofn . или
на наших специальных сайтах:
Семейство продукции MagNA Риге для автоматизированного
выделения НК, включая аксессуары, пластик, наборы и др.:
httD://www.maQnaDure.com
Системы ПЦР в реальном времени (системы UghtCycler
Carousel, идЬЮус1ег 480 и универсальная библиотека
зондов):
httD;//www.ltflhtcvclef.CQm
Ш
Наборы для выделения ДНК
r^NA Pure LC DNA
Mation Kit 1
1 набор,
192 реакции
03 003 990 001
MagNA Pure LC DNA
Isolation Ю 1 Large
1 набор,
96-288
03 310 515 001
Volume реакций
MagNA Pure LC DNA
Isolation Kit II (Tissue)
1 набор,
192 реакции
03 186 229 001
MagNA Pure LC DNA
Isolation Kit III
(Бактерии, грибы)
1 набор,
192 реакции
03 264 785 001
MagNA LC DNA isolation
Kit 1 - Lysis/Binding
Buffer Refill
70 мл
03 246 752 001
MagNA Pure LC DNA
Isolation Kit 1 - protocol
for External Lvsis
1 дискета
03 190 811 001
Наборы для общего выделения нуклеиновых кислот
MagNA Риге LC Total
Nucleic Acid Isolation Kit
1 набор.
192 реакции
03 038 505 001
MgNA Pure LC Total
Nucleic Acid Isolation Kit-
rae Volume
1 набор,
192 реакции
03 264 793 001
iqNA Pure LC Total 03 246 779 001
Nucleic Acid isolation Kit 70 мл
1 - Lvsis Buffer Refill
Наборы для вьщеления РНК
MagNA pure LC RNA
Isolation Kit - High
Performance
1 набор,
192 реакции
03 542 394 001
MagNA Pure LC RNA
Isolation Kit IN Hlssue)
1 набор,
192 реакции
03 330 591 001
MagNA Pure RNA
Isolation Kit Tissue Lysis
Buffer Refill
70 мл
03 604 721 001
MagNA Pure LC mRNA
Isolation Kit 1 (Blood,
blood cells)
1 набор,
192 реакции
03 004 015 001
MagNA Pure LC mRNA
Isolation Kit II (Tissue)
1 набор,
192 реакции
03 172 672 001
MagNA Pure LC mRNA
Isolation Kit 1 - Lysis
BuHer Refill
70 мл
03 246 744 001
MagNA Pure LC mRNA
HS Kit
1 набор.
192 реакции
03 267 393 001
Для получения информации о раходныж материалах и
других продуктах, относящихся к данному списку -
посетите наш сайт; www.magnapure.com
Контакты и поддержка
Задать вопросы, решить проблемы, высказать свои
предложения Вы можете, посетив наш сайт Технической
поддержки:
www.roche-applied-sclence.cpnVaugport
Чтобы позвонить или написать нам, посетите домашнюю
страницу Roche Applied Science, www.roche-applied-
science.con> , и выберите страну. Появится контактная
информация для выбранной Вами страны. С помощью
функции выбора продукта Вы можете найти инструкции и
данные по безопасности для каждого продукта.
<^Roche^ Diagnostics
Roche Diagnostics GmbH
Roche Applied Science
68298 Mannheim
Germany
--- стр. 205 ---
Для лабораюрной практики.
Только для нсследоваиий W VITRO.
Лизирующий/связывающий буферный раствор для выделения ДНК
MagNA Pure LC DNA Isolation Kit I - Lysis/Binding Buffer - Refill
Кат. jy* 03 246 752 001 Версия июль 2004
Хранить при +15 - + 25° С
Описание проду»ста
Солержанне
Лизируюший/связываюший буфер является прозрачным
и не должен использоваться, если в нем образовался
осадок.
Примечание: Перед началом работы нагрейте буфер до
+ 15 - + 25*С, пока осадок не растворится.
Лизируюший/связываюший буфер содержит синий
Флакон/цве
. т крышки
Маркировка Содержание и
функция
зеленый Lysis/Binding
Buffer -Refill
• Один флакон, 70 мл
• Для лизиса клеток и
связывания тотальных
нуклеиновых кислот
Область применения
Лизируюший/связываюший буфер MagNA Риге LC DNA
Isolation Kit I * Lysis/Binding Buffer - Refill предназначен
для:
• лизиса следующих образцов млекопитающих:
- крови,
• клеток крови и
- клеточных культур
• стабилизации ДНК в лизатах
• выделения ДНК в приборе MagNA Ригс LC
Действие
При внесении лизируюшего/связываюшего буфера в
образец происходит лизис клеток и инактивация
ферме^ггов нуклеаз.
Образцы
Шптнмальные результаты, особенно при последующем
ПЦР-анализе в LighlCycler, получают при
автоматизированном выделении ДНК в приборе MagNA
Риге LC из образцов, содержащих 10^ клеток или 20 мкл
крови.
Однако в системе MagNA Риге LC выделение возможно
в диапазоне от 100 клеток доЮ^ клеток (200 мкл крови).
Примечание: Специальные протоколы разработаны для
выделения из образцов сыворотки крови, плазмы и
крови человека. При анализе образцов от других видов
млекопитающих необходимо принимать во внимание
возможные различия в концентрациях клеток крови.
Поэтому необходимо довести коииемтрацню клеток
крови до оптимальной перед началом процедуры
выделения.
Хрянение/стабильность Лизируюший/связываюший
буфер MagNA Pure LC DNA Isolation Kit Lysis/Binding
стабилен при 15*25‘’C до истечения срока годности,
указанного на упаковке. Реагент транспортируется и
должен храниться при 15*25'^'С.
Процедура и необходимые материалы
07040Э130 72ЬХ>
Меры нредосторожности
• Рассматривайте все образцы от млекопитающих,
особенно человеческого происхождения. как
потенциально инфекционные.
• Лнзируюшнй/связывающий буфер солержит соль
гуанидина, которая может вызывать раздражение.
• Всегда работайте в защитных перчатках и соблюдайте
стаадартные правила безопасности работы в
лаборатории!
• Для предотвращения коктаминаиии ДНКазами
соблюдайте меры предосторожности, описанные в
литературе (I).
Дополнительное оборудиваимс н реагенты
• стандартное лабораторное оборудование
• дозаторы и наконечники для внесения реаге»ггов и
образцов
• центрифуга для подготовки культуральных клеток
• реакционные пробирки
• вертекс
•PBS
Подготовка образцов
Следуйте приведенным ниже инструкциям для
подготовки образцов разных типов к
автоматизированному выделению ДНК в приборе
Тип образца Действие
Цельная кровь Перенесите 20-200 мкл крови в
стерильную реакционную пробирку
Выделенные
клетки крови
Подготовьте лейкоциты или
мононуклеары периферической крови
(МНПК) по стандартной мстоликс.
Растворите клеточный осадок в 2(Ю
мкл PBS.
Культуральные
клетки
Осадите центрифугированием 10' - 10''
культуральных клеток и растворите
осадок в 200 мкл PBS в стерильной
реакционной пробирке.
Протокол лизиса
Этап Действие
1 Внесите 3(Ю мкл лизируюшего/связываюшего
буфера MagNA Ригс LC DNA Isolation Kit ILysis/
Binding Buffer - Refill в реакционную пробирку с
образцом.
2 Гомогенизируйте образец, премешивая на
вортексе три раза по 10 сек.
3 Лизат образца можно сразу же перенести в
прибор MagNA Ригс LC для выделения ДНК, или
хранить при -70°С или ниже.
<^Roche^
--- стр. 206 ---
Этап Действие
1 Оттайте лизированные образцы на льду
2 Перемешайте лизаты на вортексе три раза по 10
сек.
3 Перенесите лизаты образцов в картридж для
образцов MagNA Pure LC.
4 Включите прибор MagNA Pure LC и запустите
программное обеспечение, как описано в
инструкции к набору MagNA Pure LC DNA
Isolation Kit I.
5 Выберите протокол MPLC: DNA I Externaljysis.
Анализ ошибок
См. раздел 5.1 инструкции к набору MagNA Pure LC
DNA Isolation Kit I, Cal. No. 03 003 990 001.
Литература
1 Sambrook J., Frilsch E.F., & Maniatis T. (1989) Molecular
Xloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY.
Как связаться с Roche Applied Science
для заказа, решения технических вопросов, информации
о продукции посетите сайт
www.roche-appned-sdence.com
или свяжитесь с местным торговым представительством.
www.roche-appiied-science.com/pack-
insert/03246752001a.pdr
Пожалуйста, посетите наш новый сайт технической
поддержки
www.rochc-applied-science.com/support
<^Roche^
Roche Diagnostics GmbH
Roche Applied Science
Sandhofer Strasse 116
0-68305 Mannheim
Germany
Продукт Упаковка Кат. Х<
Наборы M agNA Pure LC для выделения ДНК
MagNA Pure LC DNA
Isolation Kit I
I набор на
192 реакции
03 003 990 001
Isolation Kit > Large
Volume
I набор на 96
- 288 реакций
03 3I05I5001
MagNA Pure LC DNA
Isolation Kit П
(Tissue)
1 набор на
192 реакции
03 186 229 001
MagNA Pure LC DNA
Isolation Kit III
(Bacteria, Fungi)
1 набор на
192 реакции
03 264 785 001
MagNA Pure LC DNA
Isolation Kit I - Lysis/
Binding Buffer ЯеПП
1 набор на
192 реакции
03 246 752 001
MagNA Pure LC DNA
Isolation Kit I >
Protocol for External
Lysis
1 набор на
192 реакции
03 190 811 001
Наборы M agNA Pure LC для выделения тотальных
нуклеиновых кислот
MagNA Pure LC Total
Nucleic Acid Isolation
Kit
I набор на
192 реакции
03 038 505 001
MagNA Pure LC Total
Nucleic Acid Isolation
Kit - Large Volume
1 набор на
192 реакции
03 264 793 001
MagNA Pure LC Total
Nucleic Acid Isolation
Kit 1 - Lysis/Binding
Buffer Refill
70 мл 03 246 779 00!
Наборы M agNA Pure LC для выделения РНК
MagNA Pure LC RNA
Isolation Kit - High
Performance
1 набор на
192 реакции
03 542 394 001
MagNA Pure LC RNA
Isolation Kit 1 1 1
(Tissue)
1 набор на
192 реакции
03 330591001
MagNA Pure RNA
Isolation Kit Tissue
Lysis Buffer - Refill
70 мл 03 604 721 001
MagNA Pure LC
inRNA Isolation Kit I
(Blood. Blood Cells)
I набор на
192 реакции
03 004 015 001
MagNA Pure LC
inRNA Isolation Kit II
(Tissue)
1 набор на
192 peaKiuiH
03 172 672 001
MagNA Pure LC
mRNA Isolation Kit I
- Lysis Buffer Refill
70 мл 03 246 744 001
MagNA Pure LC
mRNA HS Kit
1 набор на
192 реакции
03 267 393 001
Для информации о расходных материалах MagNA Pure и
другой продукции, посетите сайт:
http://www.magnapure.com
MagNA Pure является торговой маркой представителя
группы Roche Group. Приобретение данной продукции
не означает передачу лицензии или других прав на
проведение 1ПДР.
--- стр. 209 ---
Для применения е лабораторной пра1гтике
Только для диагностики I N V IT R O .
Roche
Лизирующий буферный раствор для выделения РНК из тканей
MagNA Pure LC RNA Isolation Tissue Lysis Buffer -
Refill
Кат. № : 03 604 721 001
Для использования совм естно с:
Кат. №: 03 172 627 001
Кат №: 03 330 591 001
MagNA Pure LC mRNA Isolation Kit II (Tissue)
MagNA Pure LC RNA Isolation Kit III (Tissue)
Версия Феврлпь 2005
Хранить при 2 • 8* *С
Назначение продукта
Содержимое
цаст..;^^^ Мар10ф0ви1 арушта^ ■
зеленый
MagNa Pure LC RNA
Isolation Tissue Lysis
Buffer - Refill
• 1 флакон, 70 мл
• для лиэирования тчани и
гомогенизации
Хранение и стабильность
Лизирующий буферный раствор стабилен при + 2 - ■•8*С до
истечения срока годности указанного на этикетке.
I Лизирующий буферный раствор транспортируется при комнат>юй
температуре
Назначение
Лизирующий буферный расатор MagNA Риге LC RNA Isolation
^fcue Lysis Buffer - Reftll предназначен для;
• лизирования и гомогенизации свежезамороженных
образцов тканей с использованием устройства для
гомогенизации ткани (инструмент MagNa Lyser или аналог).
• стабилизации целой РНК и мРНК с лизированными
образцами
• полной очистки РНК и мРНК при помощи
инструмента MagNA Риге LC I
Свежезамороженные образцы ткани лизируются и
гомогенизируются при помощи лизирующего буферного
раствора MagNA Pure LC RNA Isolation Tissue Lysis Buffer • Refill
c использованием подходящего гомогенизирующего устройства.
Tissue Lysis Buffer полностью разрушает клетки, что приводит к
высаобспкдению РНК. РНКазы эффективно ингибируются.
Необходимое дополнительное оборудование и
реагенты
• стандартное лабораторное оборудование
• пипетки и свободные от нуклеаз и не разбрызгивающие
наконечники для пипетирования образцов в Картридж с
образцами
‘ Центрифуга и подходящие, свободные от нуклеаз
реакционные пробирки
• Гомогенизирующее устройство:
* Инструмент MagNA Lyser с пробирками для
гомогенизации образцов MagNA Lyser Green Beads
• Гомогенизатор (UltraTurrax или Omni ТН 220)
> пестик/ступка/иголка (е 0.6 мм)
• Инструмент MagNA Риге LC
• Набор для выделения РНК из ткани MagNA Pure LC RNA
Isolation Kit III (Tissue)
• Набор для выделения мРНК из ткани MagNA Pure LC mRNA
Isolation Kit II (Tissue)
2. Работа c данным продуктом
Меры предосторожности
• Лизирующий буферный раствор содержит соль гуанидина и
дитиотреитол, являющиеся отравляющими веществами.
Избегайте контакта с кожей, глазами, слизистой. При
возникновении контакта промойте очаг контакта большим
количеством воды. При расплескивании реагента, промойте
водой перед тем как вытереть.
• Не допускайте смешивания лизирующего буфера с
раствором гипохлорида соды, отбеливающими растворами
или с сильными кислотами. Смешивание может
продуцировать высокотоксичный газ.
--- стр. 210 ---
Примечания
' Эффективное разрушение и гомогенизация образцов
необходимо для выделения из ткани межклеточной РНК.
Неполное разрушение ткани приведёт к значительно
сокращенному выходу РНК.
• Путем гомогенизации тканевого лизата, геномная ДНК с
высокой молекулярной массой и другие высокомолекулярные
клеточные компоненты разделяются для сокращения вязкозти
лизата. Неполная гомогенизация приведёт к значительному
сокращению выхода РНК и может вызвать засорение
реакционных наконечников.
* В то время как одни методы разрушения одновременно
гомогенизируют образец, другие требуют дополнительной
ступени гомогенизации.
I Всегда приготавливайте свежий тканевой лизат и
немедленно обрабатывайте. Если выделение РНК
откладывается, то хранить лизат следует при -70*С или ниже.
- Для получения полной информации о стадии выделения и
предвыделения РНК и иРНК, е твюке о специфических проблемах и
неислрееностях следует обратиться к инструкциям к наборам MegNa
Pure LC RNA Isoktkxi Kit ill (Бмие) • Набор для выделения тканевой
РНК. MegNa Риге LC mRNA Isolation Kit II (Tissue) • Набор для
^ шеления тканевой мРНК.
В таблицах протокола, приведённого тже, обратите внимание не
необходимый объём лизирующего буферного раствора при работе с
набором для выд^ения мРНК из -псани MegNa Риге LC mRNA Isolation
Kit II (Tissue), и при работе с набором для выделения РНК из ткани
MagNa Pure LC RNA isolation Kit III (Tissue).
Требования к образцам
Берётся от 1 до 10 мг свежезамороженного или
размороженного, стабилизированного образца ткани.
I Обращайтесь со всеми образцами, как с потенциально
инфекционно опасными.
Разрушение ткани при помощи инструмента MagNA Lyser
Таблица, приведённая ниже описывает разрушение и
гомогенизацию свежезамороженной или фиксированной ткани
при помощи инструмента MagNA Lyser.
0» Поместите от 1 до 10 мг в пробирку для гомогенизации
образцов, содержащую 300 мкл или 350 мкл
лизирующего буферного раствора (соответственно
протоколу инструкции).
• Настройте инструмент MagNA Lyser так, как это описано
в руководстве оператора.
* Запустите цикл разрушения, применив установки
скорости и времени соответственно специфичности вашего
образца.
I Всегда оптимизируйте параметры распада ткани (скорость,
время) прежде, чем осуществить процедуру очистки РНК.
Недостаточный распад может привести к скудному выходу
РНК, а чрезмерное разрушение РНК может вести к
деградации РНК. Для первоначального старта используйте
показатели для некоторых образцов представленные в
таблице:
Материал Скорость Время
Печень/Почкв 6500 rpm 50 сек
Селезёнка/олухолевая ткань/ 6500 rpm 2 X 50 сек»фиксированная ткань
Хвост/Ухо/Кожа 6500 rpm 2-3 X 50 сек»
I и Между циклами распада охладите образцы в течении
60-90 сек в охлаждающем блоке MagNA Lyser Rotor.
W . охладите образцы в течении б0>90 сек в охлаждающем
блоке MagNA Lyser Rotor Cooling Block.
* инкубируйте образцы в течении 30 минут при комнатной
температуре.
I Для избежания переноса вспененных во время
процедуры гомогенизации образцов в инструмент
MagNa Pure LC - в течении некоторого времени
охладите пробирки (например, в охлаждающем блоке
MagNa Lyser Rotor Cooling Block).
^ (Дектрифугиуйте 2 минуты при комнатной температуре при
18 000 X д.
О Действуйте соответственно одному из 2>х протоколов
инструкций по выделению тканевой РНК - MagNa Риге LC
RNA Isolation Kit III (Tissue) или тканевой мРНК - MegNA
Риге LC mRNA Isolation Kit II (Tissue).
Разрушение ткани при помощи роторного
гомогенизатора
Ниже описаны разрушение и гомогенизация
свежезамороженной или фиксированной ткани при помощи
роторного гомогенизатора (например, UltraTurrax or Omni ТН
220 ).
О проводите лизирование и гомогенизацию ткани в
роторном гомогенизаторе с 300 мкл или 350 мкл
лизирующего буферного раствора для ткани, следуя
инструкции прилагаемой к прибору и протоколу
инструкции. В зависимости от типа образца роторный
гомогенизатор полностью разрушает и гомогенизирует
ткань за 5 • 90 секунд в присутствии лизирующего
буферного раствора.
I Для избежания образования пены всегда держите наконечник
гомогенизатора погруженным к одной стороне пробирки
О Инкубируйте образцы в течении 30 минут при комнатной
температура.____________________________________________
^ [Дентрифугнруйте в течении 2>х минут пр 18 000 х д при
комнатной температуре.
^ Действуйте соответственно одному из 2-х протоколов
инструкций по выделению тканевой РНК - MagNa Риге LC
RNA Isolation Kit III (Tissue) или тканевой мРНК - MagNA
Pure LC mRNA Isolation Kit II (Tissue).
--- стр. 211 ---
Разрушение ткани при помощи ступки и пестика
Ниже описан распад и гомогенизация свежезамороженной или
фиксированной ткани, используя ступку и пестик.
О * Тщательно измельчите от 1 до 10 мг ткани при помощи
пестика и ступки в жидком азоте. Перенесите
замороженный порошок в предварительно охлажденную
ценрифужную пробирку для микроцентрифугироевния.
• Позвольте оставшемуся жидкому азоту испариться, но
не допускайте оттаивания образца ткани.
* Добавьте 300 или 350 мкл лизирующего буферного
раствора к образцу, затем гомогенизируйте путем
пропускания образца несколько раз через иглу шприца (0
0,6 мм).
________________________________________
Q Инкубируйте образцы в течении 30 минут при комнатной
температуре.
О Центрифугиуйте 2 минуты при комнатной температуре
при 18 000 » р.
Действуйте соответственно одному из 2>х протоколов
инструкций по выделению тканевой РНК • MagNa Риге LC
RNA Isolation Ю 1 III (Tissue) или тканевой мРНК • MagNA
Pure LC mRNA Isolation Kit II (Tissue).
3. Информация для заказа
Roche Applied Science предлагает большое количество
реагентов и систем для научных исследований. Для получения
полной информации по продукции посетите домашнюю
страницу, www.roche>applied>science.com, или наши
специальные сайты:
■ Семейство систем MagNA Риге для автоматизированного
выделения нуклеиновых кислот: http://www magnapure.com
• Семейство систем LlghtCycler для реал-тайм и онлайн П14Р:
http://www.llghtcyder-online.corTi
П
Инструмент MagNA Pure LC прибор с
аксессуарами 12 236 931 001
^Яструмент MagNA Lystr 1 прибор (220 V)
1 прибор (110 V)
ППЮС ротор и
охлаждакмций блок
03 358 976 001
03 356 968 001
Зеленые шарики MagNA Lyser 100 пробирок 03 358 941001
Набор для выделения тканевой • илЛлпаа-у
PHKM„NAPur.LCRNA
Isoletton Kit III msBUB)
03 330 591 001
Набор для выделения тканевой 1 набор (192
мРНК MegNA Риге LC mRNA выделения)
Isolation ККII (Tissue)
03172 627 001
Торговые марки
ЫоИЮуЫвг. МадМА Pure, и MagNA Lyter являются торговыми марсами группы
компаний Рош.
UltraTurrax является торговой асаркой IKAAnatyMniacbnlk GmbH. Germany.
Omni TH220 является торговой маркой SOd-LaborbeOarl Gn^H, Germany
ЯЧА/аГаг1яапяется торговой маркой АтЫоп Inc.. USA.
Контакты и техническая поддержка
Задать вопросы, решить возникшие проблемы, предложить улучшения
или новые области применения продукции Вы можете на нашем сайте
технической псшдержхи он-лайн:
WWW roche-applied-science.com/support____________________________
Чтобы позвонить или написать нам, посетите домашнюю страницу
Roche Applied Science, www.roche-applied-science com. и выберите
страну. Появится контактная информация для выбранной Вами
страны. С помощью фунп^ии выбора продукта вы можете найти
инструкции и данные по безопасности для каждого продукта;_______
ПрмАмымЧМ аа» гф(щ|к1м ivaaer’rM W • I 1РГО "РМ ям «О П М 1М Ч М
Roche Roche Applied Science
Germany
--- стр. 216 ---
4, РЕАГЕНТЫ
Набор предназначен для проведения до 96 выделений нуклеиновых кислот.
D зоонснмосги от объема образцов.
4.1 Число выделений
ЧйслУв1;|дёленийТ'М^Л*^ривл^об
3 X 32 выделения Маленький объем:
До 200 мкл плазмы, сыворотки, цельной крови и
других материалов человеческого происхождения,
до 5 X 10^ культуральных клеток и до 5 мг
свежезамороженной тка>ш.
Большой объем:
500 мкл или 1000 мкл плазмы, сыворотки. цсльноП
крови н других материалов человеческого
происхождения, до I х 10^ культуральных kjictok.
Экстра-большой объем:
2000 мл или 4000 мл плазмы.
L Для выделения образцов экстра-большого
объема необходимы дополн 1Гтельные
реагенты.
3 X 24 выделения
3 х24 выделения
4.2 Вхоляшие в состав набора материалы
В состав набора входят три кассеты с рсагекгачш (каждая содержит по 6
контейнеров с реагентами) и 12 пробирок MGP. Все компоненты набора
готовы к использованию.
3 кассеты c .
реагенамм
Содержимое/фуккиня Состав
Контейнер 1 • Промывочный буфер 1 70 мл
* Для удаления Гуанидин хлорид, этанол,
примесей Трис'НС!
Контейнер 2 »Протсиназа К 10
* Для расшепления
белков
протсиназа К, глицерин
Контейнер 3 * Лизирующий буфер 30 мл
* Для лизиса клеток/ Гуанидин тиоцианат.
патогенов и
связывания
нуклеиновых кислот
полндоканол. Трис>НС1
--- стр. 217 ---
Контейнер 4 • Промывочный буфер II34 мл
•Для удаления ’>танол. Na-аиетат
примесей
K oH T eftfiep 5 • Буфер для элюиим 15 мл
• Для ЭЛ10ШП1 Трнс-НС1
нуклеиновых кислот
Контейнер 6 • Промывочный буферШбО мл
* Для удаления Na-ацстат
примесей
12 MGP пробирки • Магнитные 1.9 мл
стеклянные Магнитные стеклянные
частицы частицы, изопропанал
• Для связывания
нук.леинивых кислот.
N I le вынимаПте отдельные контеПнеры с реагентами из кассет. Данные о
маркировке безопасности приведены в документе о безопасности
материалов (SDS).
Рис. 1: Кассета с реагентами, содержашая контейнеры с 1 по 6
--- стр. 218 ---
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРАВИЛА РАБОТЫ С
НАБОРОМ
5.1 Меры предосторожности
• Все материалы человеческого происхрждснияи и все связанные с > 1ими
отходы должны рассматриваться как инфекционные и требующие
соблюдения проце/оф надлежащей лаборатороП практики, описщщых в
правилах “Биобезопасность в микробиологических и биомедицинских
лабораториях” и в документе CLSI М29-А4'>
• Только персонал, об>'ченный работе с шфекционными NraiepHanabtH и
р^отс с Системой MagNA Pure 24, может выполнять процедуры,
описанные в данной Инстукшш.
• Поскольку чувствительность и концентрация потенциальных патогенов в
материале образца могут варьировать, пользовагсль должен
самостостельно оптимизировать 1тактивашио патогенов м соблюдать
необходимые меры в соответствии с местными правилами безопасности.
• Внимательно следуйте происдураьт и рекомендациям, приведенным в
данной Инструкции, для правш1ьного проведения выделения н>’клеиновь(х
кислот. Любое отклонение от инструкции может отрицательно сказаться
па результатах выделения.
• Используйте только реалнпы, входящие в состав набора, и буферы,
рекоменаованные в данной Инструкшш. Замена на другие реагенты может
привести к контаминации РНКазами.
> Для отимальных результатов выделения нуклеиновых кислот
иснользуйп; только входящие в состав набора или реко.мендованные
расходные материалы.
5.2 Правила работы с реагентами
• Несколько буферов в составе набора MagNA Pure 24 Total NA Isolation Kit
содержат опасные компоненты. He допускайте попадштия реагентов на
кожу, 8 глаза или на слизистые. Если произошло попадание, промойте
пораженный участок больши.%! количеством воды. В случае пролива
реагента разведггге прол1ггый реагеш' водой и только гготом вытирайте.
• Не допускайте кокгаа реагентов, содержащих гуанидин тиоцианат
(лизируПющий буферХ с раствором гипохлорита натрия (хлорный
отбеливатель) или ю4слота.ми. Такие смеси привалят к вылеленшо
DLtcoKOTOKCtiSHoro газо. Донная мера предосторожности особенно важна
при очистке адаптера сганции для выделс 1шя, емкости для жндккх
отходов, ко(ггейнсра для сброса наконечников и парковочного блок-алля
--- стр. 220 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРАВИЛА РАБОТЫ С НАБОРОМ
5.4 Утнлнзаиня отходов
• Док7 мент о безопасности материалов (SDS) доступен онлайн
\vwv,dialog.roche.com или по запросу в региональном офисе Roche.
• Утилизируете все материалы, имевшие контакт с образцами и реагентами,
в сосггветсгвии с государсгвеннмми, региональными и месгными
правилами.
• При угалгаации образцов и реагентов из набора работайте в перчатках,
л^ораторном халате и защитных очках.
• При утилизации реагентов из контейнеров следуйте следующей
процедуре;
1. Проколите фольгу в угл)* одного контейнера в кассете с реагентами
твердым платковым предметом, например, серологической
пипеткой.
2. Отогните фольгу и вылейте жидкость в контейнер для отходов.
3. noBTopirre этапы 1 и 2. пока не удалите содержимое из всех
ко1ггейнеров.
--- стр. 221 ---
6. ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ НАБОРА
6.1 Набор II реагенты
• Набор транспортируется при комнатноП температуре.
• Храните набор затишенным от возасПетвня прямых солнечных лучей и
магнитоа
Кассеты С рсягента 1ии
• При температуре +15 • +25°С неоткрытые кассеты с реагеита.ми стабильны
ло истечения срока годности, указанного на маркировке.
• Кассегы с реагентами можно хранить до 12 часов при +15 • +25“С в
приборе noc.ie прикалывания их зашитноП пленки.
• Одна кассета с реагектами может использоваться до б постановок в одном
приборе в течение 28 дней. Для хранения заклейте кассету' с реагентами
пленкой a.)!» заклеивания кассет с реагента.ми MagNA Риге. Храните
заклеенные касссты с реагентами при +2 - +8°С в вертикальном
положешш- Перед началом работьт даГгге кассетам нагреться при +15 •
+25®С в течение 60 мин>х
N Повторно использовать кассету с реагентами можно только в одном и
том же приборе. Программное обеспечение прибора отслсжз 1васт
использоваине расходных матернапов по их штр 1ьх-кодам, н распознает
частично использованные кассеты с реагентами для обеспечения
правильной работы в слслую 1цсй постановке.
N Если частично использованная к’ассста с реагентами была неправильно
заклеена теш хранилось дольше 28 лнеП, ттспорение реагентов может
отрииотслько сказаться на результатах выделения иуклеиновы.ч кислот.
N При хранении или перемещении ранее открытых кассет с реагентами нс
наклоняйте их. чтобы не пролить содержимое.
Пробирки MGP
• При температуре +15 • +25“С пробирки MGP стабильны до истечения
срок*а годности, указанного на маркировке. Пробирки MGP
предназначены только для олнокрятного использования.
• После тшелыюго персмешиваши иробт|рки MGP могут стоять
открытыми в приборе не более 1 часа до начала постановки.
6.2 Сбор 11 хранение образцов
Для чувствительной летекиии нуклеиновых кислот крайне важно правильно
хранить образцы. На стабильности образцов сказываются повышенные
температуры. Проводите оттаивание образцов при легком помешивании,
например, на ла<^раторио.м роллере.
N Проводте валидацию условий хранения (температура время) образцов
каждого типа по индивидушжным параметрам IVD.
--- стр. 222 ---
N Не хранкге образцы в заклеенных картриджах для выделения.
N Нс используйте плазму или кровь, содержаи^ю гепарин, так кок это
может негативно сказаться на результатах последуюишх тестов.
б.З Хранение выделенных нуклеиновых кислот и элюатов
Для получения оптих«альных результатов переходете сразу к последующим
процедурам по анализу НК.
N Не хран 1ггс элгоаты в приборе.
N Проводите валидацию условий хранения элюатов (температура, время)
по индивидуальным пара.метрам IVD.
N При хранении элюатов в стрипованных пробирках соблюда{^тс
осторожность при снятии стрипованных крышек, чтобы не допуелпь
перекрестной контаминации. По этой же причине, если н>жно повторно
закрыть стрипованные пробирки, используйте новый стрнп крышек.
N Если элюагы хранились замороженными, осторожно перемешайте их
пипегированием десять раз после оттаивания, прежде чем использвоть
для последующих задач, -гакюс как ПЦР/ОТ-ПЦР или измерение ОП.
Объем перемешивания должен составлять не .менее половины от объема
элюата. Если не выполнить перемешивание нуклеиновых кислот для их
равномерного/гомогенного распределения в растворе, результаты
последующих тестов могут быть невоспроизводимыми.
--- стр. 226 ---
Названиё^:'ь>
прото1ала]!’|3
hgDNA 1000 Геко.мнаяДНК 500 мкл цельной крови (5
X Ш^белых клеток крови)
ил1 11000 мкл цельной
крови (8x10^ белых
клетоккрови), до) х 10^
■^яьтурольиых клеток.
|0(Иьём^юцйи
100,200
L При
выделеннн из
культу ральш
хклетокс
высоким
содержанием
ДН1С
элюируйте в
200 мкл.
Протоколы для образцов экстра-большого объема
cfNAss 2000 Свободно
шфкулируюшнс
внеклеточные
НК. в основном
одиоцепочечная
ДНК.
2000 мкл плазмы'^ 50,100
cfNAss 4000 Свободно
циркулирующие
внеклеточные
НК, в основном
одиоцепочечная
ДНК.
4000 мкл плаз.мьг’* 50,100
cfNAds2000 Свободно
Ш1ркулнруюии1е
виск.теточиыс
НК, в основном
лиуцепочечиоя
ДНК.
2000 мкл naasMbt^) 100,150,200
cfNAds4000 Свободно
циркулирующие
внеклеточные
НК, в основном
одиоцепочечная
ДНК.
4000 мкл плаз.чм^* 100, 150,200
"Объем образии/лшата, вносимый вручную в картридж, должен точно
соответствовать объему образна, указанному в настроЛках постановки.
^'Концснтрашло нуклеиновых пгслот в элюате н, соответственно, чупств1пельностъ
последующих тестов, можно повыопъ за счет уменьшения объема элюиии. Однако
эффекшвность элюшш и общиП выход поле оччистки может снюнтъея по
сравнению с большим объемом элюции.
^^Протоколы Pathogen предназначены для выделения нуклеиновых кислот баюериЛ,
грибов и вирусов из челооечеоос образцов разных типов. Для этих протоколов
укозанныП объем может соответствовать oбъe^fy образца или объему лизата.
^ ’ Плазма из пробирок для сбора крови Roche CelUfirce DNA, IC2-EDTA или81геск Cell
Free DNA BCT.
Протокол Fast hgDNA 200 предназначен для выделения нуклеиновых кислот только
из 8 образцов.
--- стр. 227 ---
8.2 Типы обрашов и процедуры предварительиоЛ обработки
Чтобы пол\'чить оптимальные результаты в послелуюших тесгач, в
ОГ-ПЦР в реальном времени, например, в приборах LightCyclet*. не
используГттс образцы большего объема чем указано лля выбранного
протокола Несоблюдение этого правила может негативно отраз 1пъся на
процессе вшелеиия. и может привести к слипанию и потере MGP,
перекрестной контаминации образцов, и даже к повреждению прибора
1. Цельная кровь Для свежих iimt замороженных образцов нельноП крови не требуется
прсдваритслы 1ая обработка
N Если содержание белых клеток крови больше 8 х 10^ клеток/мл. cuanaia
развел»гге цельную кровь PBS, чтобы нс допустить слипание MGP
N Убедитесь, что в образцах цсльноП крови с антикоагулянтом нет
сгустков.
II. Плазма/
сыворотка
Ш. Образцы
разных.типов и
лизаты для
тестирования
патогенов.
Для свежнх или замороженных образцов шшзхгы или сыворотки не
требуется предварительная обработка за исключением протоколов cfNA .
N Если в образцах образовался осадок. цоггрифупфуПте их S - 10 минут
при 1900 X g', данный этап цекгрифугировапия рекомендуется для
протоколов cfMA. В качестве образца используГгге супернатант.
Лизис патогенов прооод^гтея в человеческих образцах разных типов.
Образцы следующих типов могут использоваться для выделения по
протоколам Pathogen 200 и Pathogen 1000:
Моча бронхоазьвеолярный лаваж (БАЛ), мокрота спиномозговая
жилкость(СМЖ), мазки, стул, цельная кровь с ЭДТЛ, плазма с ЭДТА или
цитратом, сыворотка, бактериальные культуры.
N Из-за большого раэнобразия возможньос образцов, единая стандартная
процедура отсутствует. Прсдвартгтельпая обработка полужидких
образцов (БАЛ, мокрота, стул н т.п.) для вьшеления нуклеиновых
кислот aawtctTT от типа образца, его вязкт>спь типа частиц и их
содержанкя.
N Любой тип образца для данной процедуры выделения и последующего
тесшрования нуклеиновьш кислот IVD до;гжен пройти волцааиию по
и11диоидуальным параметрам IVD.
N Не используйте исходные образцы объемом КЮО мкл для очень вязких
или содержащих много клеток образцов, таких как мокрота или стул.
L В зависимосп! от вязкости образца, типа и содержания частни, образцы
могут испопьзовэться без прелваритсльноИ обработки.
IS
у Version 01, EN
--- стр. 228 ---
Протокол лнзнса с буфером MagN>^ Риге Bacteria Lysis BuHerCBLB)
а Разжижение
L Разжижение рекомощустся для очень вязких образцов, такт как
мокрота, и является обязательным этапом при выделении
нуклеиновых кислот из образцов БАЛ.
• Приготовьте свежиП стоковый раствор ОТТ (дитиотре 1гтол)
(H anpiuiiep, 5 х кони. = 0.75%).
• Доведите конечную конце 1працню О’ГГ в образце до 0,15%,
добавив в него стоковый раствор ОТТ.
• Инкубируйте образец на шейкере при 850 об/мин в течение 30 мин
при +37®С, пока он ite станет легко пипстироваться.
Ь Внесение буфера для лизиса бактерий (BLB)
• Внесите нужный объем образца в чистую 1,5 мл пробирку.
Пред8)фительно смешайте нужные объемы BLD и протеиназы К.
Внеагге смесь в образец.
Протчжол Pathogen 200 Pathogen 1000
Объем образца 100 250 500
BLB 100 250 500
ПротсииазаК 20 50 100
Смесь BLB/PK 120 300 600
Тщательно перемешайте на вортексе.
Инкубируйгс на шейкере при 450 об/мин в течение 10 мин при +65‘'С.
Предварительная инкубация при+95'’С для сложных образцов
Чтобы инактивировать патогены и усилить лизис клеток для
некоторых видов бактерий в сложных образцах, таких как мокрота
или стул, инкубацию проводят при +95“С. Чтобы предотврстить
вытекание образцов, используйте пробирки с завинчивающимися
крышка.ми.
• Инкубируйте образцы при+95'*С в течение 10 мин.
L Для выделения РНК не выполняйте инкубацию при +95®С, так
как она может негативно сказаться на целостности РРЖ.
• Охладоте образцы на льду. Центрифугируйте образцы быстро,
чтобы осадоть весь объем на дне прт^ирки.
« Перенесите указанный объем лизата о картр|щж для выделения.
Протокол Pathogen 200 Pathogen 1000
Лизат, вносимый в
картридж [мкл]
200 500 1000
--- стр. 235 ---
Контроль кячестна
N Всегда используйте необходимые коктроли.
Для контроля за всем процессом, от пробополготовкп до анализа,
используйте следующие контроли:
• Положш-ельный контроль • образец, положительный по мишени теста.
• Огрииатслысый коипюлг. - образец, отрицательный по мишени теста
• Внутгенпий ко 1ггоотПт (ВК) • определсинос количество кокгролыюй
мишени, внесенной во все выделяемые образцы. ВК вносят перед этапом
вьшеления, он вьщеляется вместе с мпшеныо и затем, например,
амнлиф| 1Ш1руется вместе с мишенью в одной реакции ПЦР. Для
пр1тложеннЙ. связанных с риском пилучсиия ложноотрииатсльного
результата, применение внутреннего кошроля является обязательным.
Внутренние Прибор способен автоматически виоатть внутренний контроль (ВК) в
контроли каждый образец в процессе выделения. О^см &иутреш1сго ко1Ггроля
фиксирован и должен составлять 20 .мкл на образец. В одной постановке
могут использоваться не более двул разных ВК; в каждый образец можно
вносить только I ВК. Чтобы восолзоватся данной функцией, выбертгге
внутренний кокгроль в обшт настройках постановки. Ксобхолимое
количество ВК будет рассчитано программой и отобраз 1ТТСЯ в настройках
иостаиовкн на экране O v e irie w . Внесите указанный объем виугреинего
контроля в иприх-кодировонную пробирку объсмо.м 2 мл и загрузите
пробирки в соответствующие позиции штатива для реагентов.
L Из-за механических ограничений требуемый объем внутреннего
контроля выше, чем просто количество образцов, умиожентюе на 20
мкл.
N Для протоколов для сцДНК (иалример, для образцов объемом 2000 мкл
и 4000 мкл), внупрсшшй контроль вносят вручт^ю в приготовленный
лизат. Обратите внимание, что функция ВК у прибора доступна, ко ис
включена.
--- стр. 236 ---
9. ОГРАНИЧЕНИЯ И ИНТЕРФЕРЕНЦИЯ
1. Набор MagNA Риге 24 Toial NA Isolation Kit валидирован только для
рабош с сисгемоП MagNA Роге 24.
2 . Нааежныс ре^льтаты завиагг от надлежащей процедуры сбора,
транспортировки, хранения и обработки образцов.
3. Набор MagNA Pure 24 Total NA Isolation Kit валидирован только для
ТИЛОВ клшшческчос образцов, перечисленных в ланкой Иисгрукшш.
Выделение H>ToieimoBbix кислот из образцов других типов может
привести к пол)’чвнию неадекватных результатов.
4. Выбирайте протоколы выделения, соагветствуюшие используемым
образца.м. Любое отклонснеис от этого правила может привести к
получению неадекватных результатов.
5. С данным прогп'ктом может работать только персонал, обученный
выделению нуклеиновых кислот. Любая процедура [VD с
((спользованисм пробоподготовки и последующим тестированием
иуклеиновьк кислот 1VD долж»{а пройпг валндац(по по
инлив)1дуальным параметрам 1VD.
6. Для сведения к мнниму.му риска отрицательного влияния на
(gnSfl результаты, необходимо использовать адекватные контроли для
последующих реакций и тестов.
7. Условия хранения (температура, продолжительность) образцов, лшатов,
осадков культуральных клеток и элгоатов должны пройти валидацию по
икаУ18иауальныь{ параметрам IVD.
8. Определенные хара 1аерисгнки теста должны быть определены
пользователем, особенно если это касается последующего применения
выделенных нуклеиновых кислот. Любой результат необходимо
интерпретировать в кошексте соответствующих клинических и
лабораторных данных. Поскольку коние 1гграиня аналита может
значительно варьировать в зависимости от типа клинического образца,
рекомендуется провести проверку защищенности от перекрестных
контаминаций. HanpiLMCp, разместить в шахматном порядке
высокот(првжныс позитивные и негативные образцы и провести
рутинное тестирование.
9. Вследствие различий между технология.ми, пользователю
рекомендуется провести корреляционное исследование перед переходом
с одной технологии на друтую, чтобы оценить возможные различия.
Пользователи должны следовать при этo.^( со6сгвенны.м правилам и
процедурам.
10. Вл{1яние икторферируюших веществ оценивали методом тестирования
серий образцов с повышенными концентрациями следующих веществ,
часто присутствующих в образцах: человеческого гемоглобина,
билирубина и липидов.
--- стр. 237 ---
10. ДОПОЛНИТЕЛ1>МАЯ ИНФОРМАЦИЯ
10.1 Символы
Используемые в Я0 1ШОМ nof^-Mcirre и на данном проду^кте символы :
Символ Значение
N Важное примечание
1. Информационное примечание
J Номер н кшалоге
в Код серии
r Температурный диапазон (Хранить при)
G Казичесгво, содержашасся в упаковке
s Использовать ло
n Распространитель
Глобальный номер товарной позиции
У Обритггесь к инструкции по применению.
t Производитель
V Набор соответствует требованиям
диреетивы IVD 98/79/ЕС.
с Для диагностики in vitro.
10.2 Изменения относительно предыаушей версии
* Первая версия
--- стр. 240 ---
Приложими« 1 (Раздел специально предназначен для инструкции по применению на руссюм языка.)
Назначение
Система MagNA Риге 24 является автоматизированной системой для вьщеления нуклеиновых шслот
и состоит из прибора MagNA Риге 24, программного обеспечения, расходных материалов и реагентов.
Система MagNA Риге 24 предназначена для профессионального выделения нуклеиновых кислот из
биологических образцов для задач диагностики In vitro.
Набор MagNA Pure 24 Total NA isolation Kit и Пробирка с магнитными частицами MagNa Риге 24
(MagNa Pure 24 MGP Set) предназначены для работы с системой MagNA Риге 24.
Срок годности
Срок годности - MagNA Риге 24 MGP и MagNa Pure 24 Total NA Isolation kit стабильны до указанного
на упаковке срока, максимально 18 месяцев.
Комплект поставки
Набор реагентов для общего выделения нуклеиновых кислот, 24 (MagNA Риге 24 Total Nucleic Acid
Isolation Kit).
Пробирка с магнитными частицами MagNa Риге 24 (MagNa Pure 24 MGP Set) (12шт./1 yn.)
Условия транспортировки
Перед отправкой с завода продукт проходит контрольные проверки. Мехщународные символы на
упаковке и специальные инструкции по обращению указывают транспортировщику, как следует
обращаться с этим продуктом. При получении продукта внимательно осмотрите упаковку. При наличии
любых следов неправильного обращения или повреждения немедленно обратитесь в отдел
обслуживания клиентов компании «Roche Diagnostics GmbH» («Рош Диагностике ГмбХ») или к
региональному поставщику.
Транспортировка осуществляется всеми видами транспорта в крытых транспортных средствах в
соответствии с правилами перевозки грузов, действующими на ка)кдом виде транспорта. Температура
при транспортировке 2-8*С.
Требования к охране окружающей среды
Медицинское изделие при использовании, транспортировке и хранении не оказывает негативного
воздействия на человека и окружающую среду при соблюдении условий применения и мер
предосторожности, указанных в инструкции.
Стерилизация
Изделие поставляется нестерильным. Не подлежит повторному использованию и/или стерилизации
пользователем.
Утилизация или уничтожение
Изделия, пришедшие в непригодность, в том числе в связи с истечением срока годности, подлежат
утилизации.
Уничтожение изделий осуществляется организациями, имеющими соответствующую лицензию, на
специально оборудованных площадках, полигонах и в помещениях в соответствии с требованиями,
предусмотренными существующими Федеральным законам, и с соблюдением обязательных
требований по охране окружающей среды.
Использованные изделия перед уничтожением дезинфицируют и складируют в контейнеры или пакеты
для сбора отходов класса Б и утилизируют в соответствии с требованием СанПиН 2.1.7.2790'Ю
--- стр. 241 ---
г
Прилож«ниф 1 (Раздел специально предназначен для инструкции по применению на русааэм языке.)
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».
Гарантийные обязательства
Предприятие-изготовитель гарантирует соответствие качества медицинского изделия требованиям
национальных стандартов при соблюдении правил использования, транспортирования и хранения.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, возникших вследствие
нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо действия третьих лиц,
либо непреодолимой силы.
Производитель обязуется за свой счёт заменить изделие, технические и функциональные
характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют нормативной и технической
документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого дефекта материалов или
некачественного изготовления изделия производителем.
Рекламации
По вопросам качества продукции обращаться:
ООО «Рош Диагностика Рус»
Адрес: 107031, Москва. Трубная площадь, д.2
Тел.: +7 (495) 229-69-99
Email: moscow.receotion dia(®roche.com
--- стр. 242 ---
Перевод с английского и немецкого языков на русский язык
Зеелер энд Др. Феллмет (Seeler & Dr. Fellmeth)
Нотариальная контора
Нотариальная контора Зеелер эн д Др. Ф еллмет (Seeler & Dr. Fellm eth) № 7* 23*68161 Маннхайм
Удостоверение копии
Настоящим сегодня подтверждается верность копии с представленного оригинала
документа.
г. Маннхайм,
[Штамп: 28 апреля 2021 г.]
[Подпись]
Клаудия Зеелер (Claudia Seeler)
Нотариус в г. Маннхайм
[Гербовая печать: Клаудия Зеелер (Claudia Seeler)
Нотариус в г. Маннхайм]
Нотариальная контора Зеелер энд Др. Феллмет (Seeler & 1>г. l-ellmeth)*M> 7. 23*68161 Маннхайм * Идентификационный номер
плательщика НДС DE308834223
Тел. +49621860862-0 * Факс +49 621 860 862-89 • KANZL,Eir<>'N0TARlAr-07.DE • WWW.NQTAR1AT-Q7 DE