Набор реагентов для выявления генетических маркеров ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК), ассоциированных с устойчивостью к рифампицину и изониазиду, методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) «Амплитуб-MDR-РВ» — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
=== файл: unknown__Паспорт качества макет Амплитуб-MDR-РВ.pdf ===
--- стр. 1 ---
ООО «НПФ Синтол»
125499, г. Москва, Кронштадтский б-р, д. 39, к. 1
Тел: (499) 977-74-55 e-mail: syntol@syntol.ru
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
«Амплитуб-MDR-РВ»
Набор реагентов для выявления генетических маркеров ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК),
ассоциированных с устойчивостью к рифампицину и изониазиду, методом полимеразной цепной реакции в
реальном времени (ПЦР-РВ) «Амплитуб-MDR-РВ»
ТУ 20.59.52-015-97313483-2025
ХХХХХХ ХХХХХХ ХХХХ.ХХ ХХХХ.ХХ
1.Состав, внешний вид
Наименование компонента Характеристика и
нормы Количество Результаты
контроля
1. Комплект реагентов для проведения предварительной амплификации «Multi MDR»
Реакционная смесь, РС Multi-MDR
Прозрачная жидкость от
бесцветного до светло-
сиреневого цвета
0,004 мл × 7 упаковок
по 2 стрипа по 8
микропробирок
соответствует
Положительный контрольный образец,
ПКО-multi-MDR
Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 мл × 1 пробирка соответствует
Отрицательный контрольный образец, ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 0,2 мл × 1 пробирка соответствует
2. Реакционная смесь для исследуемых образцов,
РС-MDR
Прозрачная жидкость от
светло- розового до
светло-сиреневого цвета
0,004 мл × 48
упаковок по 2 стрипа
по 8 микропробирок
соответствует
3. Реакционная смесь, содержащая
положительные контрольные образцы, ПКО1-MDR
Прозрачная жидкость от
светло- розового до
светло-сиреневого цвета
0,004 мл × 12
упаковок по 2 стрипа
по 8 микропробирок
соответствует
4. Реакционная смесь, содержащая
положительные контрольные образцы, ПКО2-MDR
Прозрачная жидкость от
светло- розового до
светло-сиреневого цвета
0,004 мл × 3 упаковки
по 2 стрипа по 8
микропробирок
соответствует
5. Раствор для разведения образцов, ddH2O Прозрачная бесцветная
жидкость 5 мл × 5 пробирок соответствует
Инструкция по применению - 1 штука В наличии
2.Технические характеристики
Наименование показателя Норма Результаты
контроля
Достоверность результатов
тестирования отрицательного
контрольного образца ПЦР-РВ (ОКО)
Отсутствие роста сигнала в пробирках с ОКО по каналам
FAM, R6G/HEX/VIC, Cy5 с величиной порогового цикла Ct ≥
20 (N/A).
Соответствует
Достоверность результатов
тестирования положительного
контрольного образца (ПКО-multi-MDR)
Регистрация роста сигнала в пробирках ПКО-multi-MDR по
каналам FAM, R6G/HEX/VIC, Cy5 с величиной порогового
цикла Ct<16.
Соответствует
Достоверность результатов
тестирования положительных
контрольных образцов ( ПКО1-MDR,
ПКО2-MDR)
Регистрация роста сигнала в пробирках с ПКО1-MDR или
ПКО2-MDR по одному из каналов на мутации FAM, или
R6G/HEX/VIC, или ROX (в соответствии с инструкцией по
применению) одновременно с наличием сигнала по каналу
Cy5 с Ct менее 25 и ∆Ct ≤ 7*.
Соответствует
Выявление целевых аналитов,
соответствующих мутациям, в образцах
СКО в концентрации 250 ГЭ/мл.
Регистрация роста сигнала с Ct менее 30 по каналу Cy5.
Регистрация роста сигнала по каналам на мутации FAM, или
R6G/HEX/VIC, или ROX (в соответствии с паспортом
качества на СКО) с ∆Ct ≤ 7∗.
Соответствует
Выявление целевых аналитов, не
имеющих мутаций, в образцах СКО в
концентрации 250 ГЭ/мл.
Регистрация роста сигнала с Ct менее 30 по каналу Cy5.
Отсутствие регистрации или регистрация роста сигнала по
каналам на мутации FAM, или R6G/HEX/VIC
, или ROX (в
соответствии с паспортом качества на СКО) с ∆Ct > 7*.
Соответствует
Отсутствие мутаций в образцах СКО, не
содержащих мутации согласно паспорту
качества СКО.
Регистрация роста сигнала с Ct менее 30 по каналу Cy5.
Отсутствие регистрации роста сигнала по каналам на
мутации, не заявленные в паспорте качества СКО.
Соответствует
Заключение ОБТК : Набор реагентов «Амплитуб -MDR-РВ», LOT ХХХХХХ по своим показателям
соответствует требованиям ТУ 20.59.52-015-97313483-2025.
∗∆Ct – разница по модулю в значениях пороговых циклов по каналу Cy5 и к а н а л а м н а м у т а ц и и (FAM,
R6G/HEX/VIC, ROX).
--- стр. 2 ---
Условия транспортирования : Транспортирование набора реагентов «Амплитуб -MDR-РВ» должно
производиться крытым транспортом (автомобильным, железнодорожным, воздушным) при температуре от
минус 24 до минус 16°С с соблюдением требований «холодовой цепи» в термоконтейнерах одноразового
пользования, содержащих хладоэлементы, или в термоконтейнерах многократного применения с
автоматически поддерживаемой температурой. Допускается транспортирование набора при температуре до
плюс 8 °С не более 5 суток в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств.
Условия хранения: набор реагентов хранится в условиях естественной влажности и защищенном от света
месте при температуре от минус 24 до минус 16 °С. Суммарный срок хранения при температуре от плюс 2 до
плюс 8 °С не должен превышать 5 суток в течение срока годности набора реагентов.
Начальник ОБТК
И.О. Фамилия М.П. «ХХ» ХХХХХХ 20ХХ г.
(подпись)
=== файл: unknown__Набор маркировок Амплитуб-MDR-РВ.pdf ===
--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДАЮ
ектор
'/�: А.В. Кузубов
/�
( i' - ...!.i..l.L.!,��,._ц___-2025
�,
НАБОР МАРКИРОВОК
На медицинское изделие для диагностики ин витро
Набор реагентов для выявления генетических маркеров ,.П:НК микобактерий
туберкулезного комплекса (МБТК), ассоциированных с устойчивостью к
� рифампицину и изониазиду' методом полимеразной цепной реакции в реальном
времени (m_ц>-РВ) «Амплитуб-МDR-РВ»
Маркировку медицинского изделия для диагностики ин витро (МИ ИВД) набора
реагентов «Амплитуб-МDR-РВ» осуществляют в соответствии с ГОСТ Р ИСО 18113-1-
2024, гост Р исо 181 lJ-2-2024, гост Р 51088-2013 и гост Р исо 15223-1-2023.
Этикетки отпечатывают при помощи УФ плоттер-каттера с использованием
графического редактора Adobe illustrator и оформляют в соответствии с рисунками 1-1 О.
Маркировка упаковки компонентов.
На этикетке каждого компонента указывают:
- сокращенное наименование или логотип предприятия-изготовителя;
- сокращенное наименование набора реагентов;
- полное или сокращенное наименование компонента;
- объём компонента или количество стрипов с компонентом;
- номер набора по каталогу*;
- номер серии набора*;
- срок годности набора*;
- символ «Медицинское изделие для диагностики in vitro»;
- символ «Температурный диапазон».
Этикетки компонентов РС Multi-МDR, PC-МDR, ПКОl-МDR и ПКО2-МDR
дополнительно маркируются символом «Не допускать воздействия солнечного света».
*Даm-шя информация сопровождается нанесением символов согласно ГОСТ 15223-1. Пиктограммы
использованных символов и их расшифровки приведены в Приложении В ТУ 20.59.52-015-97313483-2025.
--- стр. 2 ---
На этикетки компонентов PC-МDR, ПК:01-МDR и ПК:02-МDR дополнительно
наносится информация о флуорофорах, используемых для детекции, а также краткие
наименования реакционных смесей, входящих в состав каждого стрипа.
1. Комплект реагентов для проведения предварительной амплификации «Multi
МDR» в составе:
Г'-
синтол
Аммитуб-МDR-РВ
РС Multi-MDR
Реакционная смесь
7 упаковок по 2 стрипа
по 8 микропробирок
по 0,004 мл
I IVD 1 � хххх.хх
IREF I хххххх
lm.Т]XXXXXX
Рисунок 1 - Образец этикетки полиэтиленового пакета с реакционной смесью
РС Multi-МDR
§СИНТОЛ
Амплитуб-МОR-РВ
. !REFIXXXXXX
1},-16"(
-24"(1
ПKO-muLti-MDR !IVDI
0,2 мл � хххх.хх !LOTIXXXXXX
Рисунок 2 - Образец этикетки пробирки с положительным контрольным образцом
ПKO-multi-МDR
§СИНТОЛ !REFIXXXXXX
Амплитуб-МDR-РВ {-16·с-24•с
око !IVDI
О,2мл �хххх.хх !LDTIXXXXXX
Рисунок 3 - Образец этикетки пробирки с отрицательным контрольным образцом
око
2
--- стр. 3 ---
2. Реакционная смесь для исследуемых образцов, PC-МDR:
§СИНТОЛ
Амплитуб-МDR-РВ
PC-MDR
!REF! ХХХХХХ
Реакционная смесь дпя исследуемых образцов
48 упаковок по 2 стрипа по
8 микропробирок по 0,004 мл
Состав одноrо стрипа:
1 пробирка rpo8450 IШ)i·~:.:.@И
2 пробирка rpoB445 �=пи
3 пробирка rроВ445 1�1�1.�11. . I��
4 пробирка rpo8435 (Ш]<:З!"И
5 пробирка rpo8452 �
6 пробирка katG315 l�j�l'J'i"ill :··:Im
7 пробирха inhA С(-15)Т (Ш'R,И
8 пробирка inhA T(-S)C/A l1ЛJrm
!IVD ! � ХХХХ.ХХ [!т] ХХХХХХ
Рисунок 4 - Образец этикетки полиэтиленового пакета с реакционной смесью для исследуемых
образцов, PC-МDR
3. Реакционная смесь, содержаш:ая положительные контрольные образцы, Гll{Ql-МDR:
§СИНТОЛ
Амплитуб-МDR-РВ
ПK01-MDR
!REFI хххххх
Реакционная смесь, содержащая
положительные контрольные образцы
12 упаковок по 2 стрипа по
8 микропробирок по 0,004 мл
Состав одного стрипа:
1 пробирка S450L:Alm1 �
2 пробирка H445Y:Alm3 liJm!И
3 пробирка H445N:Alm7 �
4 пробирка D435V:Alm9 �
5 пробирка L452P: Alm11 1mm}
6 пробирка S315Т1: Alm13 иши
7 пробирка inhA С(-15)Т: Alm15 �
8 пробирка inhA Т(-8)(/А: Alm16 1ШШ1
! IVD ! � ХХХХ.ХХ [!т] ХХХХХХ
Рисунок 5 - Образец этикетки полиэтиленового пакета с реакционной смесью, содержащей
положительные контрольные образцы, ПКОl-МDR
3
--- стр. 4 ---
4. Реакционная смесь, содержащая положительные контрольные образцы, ПКО2-:мDR
§СИНТОЛ
Амплитуб-МDR-РВ
ПK02-MDR
!REFI хххххх
Реакционная смесь, содержащая
положительные контрольные образцы
3 упаковки по 2 стрипа по
8 микропробирок по 0,004 мл
Состав одноrо стрипа:
1 пробирка S4SOW:Alm2 :: FИ
2 пробирка H44SD:Alm4 �
3 пробирка H44SL:Alm6 шши
4 пробирка D43SY: Alm10 шши
5 пробирка L452P: Alm11 �
6 пробирка S31SN:Alm14 �
7 пробирка inhA C(·1S)T: Alm1S WШ1И
8 пробирка inhA Т(·В)С/А: Alm16 .�
.24·c.f•16·c
I IVD 1 � хххх.хх ПШ1 хххххх
Рисунок 6 - Образец этикетки полиэтиленового пакета с реакционной смесью, содержащей
положительные контрольные образцы, ПКО2-МDR
5. Раствор для разведения образцов, ddН2O
§СИНТОЛ [Ш!ХХХХХХ
АмплИl)'б·МDR·РВ IJ,..16·c
ddH20 ·24·с1
Раствор для разведения образцов ! IVD 1
5 мл � хххх.хх !LDTIXXXXXX
Рисунок 7 - Образец этикетки пробирки с раствором для разведения образцов,
ddH20
Маркировка упаковки комплекта реагентов.
На этикетке комплекта реагентов для проведения предварительной
амплификации «Multi МDR» указывают:
- сокращенное наименование или логотип предприятия-изготовителя;
- сокращенное наименование набора реагентов;
- полное или сокращенное наименование комплекта реагентов;
- состав комплекта;
- флуорофоры, используемые при детекции;
- номер набора по каталогу*;
*Данная информация сопровождается нанесением символов согласно ГОСТ 15223-1. Пиктограммы
использованных символов и их расшифровки приведены в Приложении В ТУ 20.59.52-015-97313483-2025.. 4
--- стр. 5 ---
- номер серии набора*;
- срок годности набора*;
- символ «Температурный диапазон»;
- символ «Не допускать воздействия солнечного света»;
- символ «Медицинское изделие для диагностики in vitt·o»;
- символ «Содержимого достаточно для проведения 96 тестов».
§СИНТОЛ
Аммитуб-МDR-РВ
!REF! ХХХХХХ
Комплект реагентов для проведения предварительной
амплификации «MuLti MDR»
Реакuионная смесь в микроnробирках,
РС Мutti-МDR ОДО4 мл 7 упаковок по 2 арипа
по 8 микр�:шробирок
Положительный контрольный образец,
ПKO-mu!ti-МDR 0,2 мл 1 пробирка
От!)14ЦЗ'Тельный КОНТJ:)ОЛЫ4ЬIЙ об�зец, око 0,2 мл 1 пробирка -------
[ЬQ!) � 0 -16
°
( �·� Пiin1 �
хххххх хххх.хх ·24"(--r- 7J'\ 1..!.!.!:!.1 \/'96
Рисунок 8 - Образец этикетки поJШэтиленового пакета комплекта реагентов для проведения
предварительной ампJШфикации «Multi МDR»
Маркировка упаковки набора реагентов.
На этикетках набора реагентов указывают:
- логотип предприятия:-изготовителя;
- сокращенное наименование и адрес предприятия-изготовителя*;
- полное наименование набора реагентов;
- полное или сокращенное наименование комплекта реагентов;
- состав набора реагентов;
- флуорофоры, используемые при детекции;
- номер набора по каталогу*;
- номер серии набора*;
- дата изготовления набора*;
- срок годности набора*;
- символ «Температурный диапазон»;
- символ «Не допускать воздействия солнечного света»;
- символ «Медицинское изделие для диагностики in vitt-o»;
- символ «Содержимого достаточно для проведения 96 тестов»;
*Данная информация сопровождается нанесением символов согласно ГОСТ 15223-1. Пиктограммы
использованньIХ символов и их расIIШфровки приведены в Приложении В ТУ 20.59.52-015-97313483-2025.
5
--- стр. 6 ---
- символ «Обратитесь к инструкции по применению»;
- надпись «Для профессионального применения»;
- . Номер технических условий;
- Номер ЕРУ Л.
!эСИНТОЛ
Аммюуб-МDR-РВ
!REF! ХХХХХХ
Набор реагентов для выявления генетических маркеров ДНК микобактерий
туберкулезного комплекса (МБТК),.ассоц.иированных с устойчивостью к рифампицину
и изониазиду, методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР�РВ)
«Амnпитуб•МDR·РВ»
� ре�Ш!Я �� а� «Мutti МDR•
- Реакционная р;�есь, РС Мutti·№R
- Положительный контрольный образец,
ПKO•multi-MDR
- Отрицательный контрольный образец, ОКО
Реакционная at,tecь дnя исследуемых образцов,
PC•МDR
Реа1Щ1ЮННая смесь, содержащая 11опожиrе.льные
ко1пропънъ1е образцы, ПК01 ·МDR
Реакционная смесь, содержащая пол.о ительные
К{)Нтролъные образцы, ПК02·МDR
Раствор дnя разведения обращов,.ddН2O
Инструкцкя по применению
О,004мл
0,2мл
0,2 мл
0,004 мл
О,004мл
О,004мл
S м11
7 упаmвок по l стрипа
по 8 микропробирок
1 пробwрка
1 пробкрха
48 упаковок по 2 стрипа
по .8 микроnробирок
12 упа1СО11Окпо 2 сrрипа
по 8 микропробирок
3 улаК{)ВКИ по.2 стрмпа
по 8 микропробирок
5 пробирок
1 штука
Рисунок 9 - Образец этикетки МИ ИВД «Набор реагентов для выявления генетических маркеров
ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК), ассоциированных с устойчивостью к
рифампицину и изониазиду, методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ)
«Амплитуб-МDR-РВ »
Маркировка транспортной упаковки.
На каждый ящик транспортной тары должна быть наклеена этикетка с указанием
следующей информации:
- логотип предприятия-изготовителя; � * - краткое наименование и юридическим адрес предприятия-изготовителя ;
- адрес электронной почты и сайт предприятия-изготовителя;
*Данная информация сопровождается нанесением символов согласно ГОСТ 15223-1. Пиктограммы
использованных символов и их распшфровки приведены в Приложении В ТУ 20.59.52-015-97313483-2025
6
--- стр. 7 ---
- номер набора по каталогу*;
- полное наименование набора;
- срок годности набора*;
- дата изготовления набора*;
- номер серии набора*;
- количество наборов в таре;
- масса нетто потребительской упаковки;
- масса нетто наборов в транспортной таре;
- масса брутто транспортной тары;
- требования к условиям хранения и транспортирования (манипуляционные
знаки «Хрупкое. Осторожно», «Беречь от влаги», «Пределы температуры» по
гост 14192);
Транспортная тара маркируются наклеиванием этикетки. Массу нетто и массу
брутто, количество изделий в таре допускается наносить печатным или рукописным
способом.
§СИНТОЛ !REF!XXXXXX
Амппитуб-МDR-РВ
Набор реагентов для выявления генетических маркеров ДНК
микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК), ассоциированных
с устойчивостью к рифампицину и изониазиду, методом полимеразной
цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) «Амплитуб-МDR-РВ»
___ ед.
Масса нетто потребительской упаковки: ____ кг
Масса нетто: ----
Масса брутто:. ___ _
Рисунок 1 О -Образец этикетки транспортной тары МИ ИВД «Набор реагентов для выявления
генетических маркеров ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК), ассоциированных с
устойчивостью к рифампицину и изониазиду, методом полимеразной цепной реакции в реальном
времени (ПЦР-РВ) «Амплитуб-МDR-РВ»
• Данная информация сопровождается нанесением символов согласно ГОСТ 15223-1. Пиктограммы
использованных символов и их расшифровки приведены в Приложении В ТУ 20.59.52-015-97313483-2025
7
=== файл: unknown__Фотофайл Амплитуб-MDR-РВ.pdf ===
--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДАЮ
ектор
....,,..,,._,,,.,,....,..,,__�,......,.__ __ А.В. Кузубов
��-'---Ь'.ч=-Н!---- 2025
ФОТОГРАФИЧЕСКИЕ ИЗОБРАЖЕНИЯ
На медицинское изделие для диагностики in vitro
Набор реагентов для выявления генетических маркеров ДНК микобактерий
туберкулезного комплекса (МБТК), ассоциированных с устойчивостью к
рифампицину и изониазиду, методом полимеразной цепной реакции в
реальном времени (ПЦР-РВ) «Амплитуб-МDR-РВ»
--- стр. 2 ---
Набор реагентов выпускается в одной модели и состоит из инструкции по применению
и 5 компонентов. В состав набора входит комплект для проведения предварительной
мультиплексной ПЦР-РВ с целью накопления специфического ДНК фрагментов генов rpoB,
katG и inhA Mycobacterium tuberculosis сотр/ех.
Набор реагентов «Амплитуб-МDR-РВ» включает:
1. Комплект реагентов для проведения предварительной амплификации «Multi MDR»:
- реакционная смесь, РС Multi-MDR: 0,004 мл - 7 упаковок по 2 стрипа по 8
. микропробирок;
- положительный контрольный образец, ПKO-multi-MDR: 0,2 мл - 1 пробирка;
- отрицательный контрольный образец, ОКО: 0,2 мл - 1 пробирка.
2. Реакционная смесь для исследуемых образцов, PC-MDR: 0,004 мл - 48 упаковок по 2
стрипа по 8 микропробирок.
3. Реакционная смесь, содержащая положительные контрольные образцы, ПKO1-MDR:
0,004 мл - 12 упаковок по 2 стрипа по 8 микропробирок.
4. Реакционная смесь, содержащая положительные контрольные образцы, ПKO2-MDR:
0,004 мл - 3 упаковки по 2 стрипа по 8 микропробирок.
5. Раствор для разведения образцов, ddH2O: 5 мл - 5 пробирок.
,.-----. 6. Инструкция по применению - 1 шт.
2
--- стр. 3 ---
,�
1. Потребительская упаковка Набора реагентов «Амплитуб-МDR-РВ»
§СИНТОЛ
ДМnnиryб-MIJfH!,�, м�днк НКХQбаmрмя
Haicp pmet"'8IJIJ' �i�x с rcnni'JHIOCТЬIO к рифампицину �,...,,..-,а� цenнoii JЖIO!J<H в реальном щт,,енм (ПЦР-РВ)
и:::=:::
,.,,,,,,.,_-к�l!f!III
-��
о6р,)щ
/Ж� ·� -°"811-llt� oro
�-.,.,,,�� PG.нslR
е.__а«,;��---..-•<№11 =c:wu..� ��w•
otip,lщjr.·ill!OJ.IIDll
P�М!t,...._«!fil!IP,dдH,O
Инат,у,,ц,,R f/o �
Q,D0-1 ....
одмл
О.2мn
й,004мл
СJ,DО4нл
ОЛЗ4мп
5нл
1,,,...,_..,2,,,,_
ло8�
1�
l�ra
48 }'121J:8ок по l ap,ma
nоВн,�
12 Yll8DIQ( по, np,ma
ПО 8 MlllфDlijJD01qJ,,k
3.yr1UC111<11 по 2 СфЮа
nоВм�
Snpat;,,q,a,,
1 IIJТ'/l(a
�""'
ПK02-MDR ----�
J�-1..-
•�c-10
""""--
1 _ ...
,_, --·- '""""._ ,,,,,,.,, , ._ 10:JIIIJ
, __ .... ' ·--�,
,_ ... lf'II;"�
-u-tt'" ,
l№1 i-№Ш
3
--- стр. 4 ---
т о 1-::I:
ф '-
со ф
а.
со а. о tD
со I
i:::[ :s: т
>:S:
:s:
3" tD
о
N
--- стр. 5 ---
3. ) Печатная продукция Набора реагентов «Амплитуб-МDR-РВ»
УТВЕРЖДАЮ
Ге"еральны!! диреl<ТОр ООО «НПФ Синтоn»
·----- А,В. Куэубов
__ . __ .202S
MeдИЦIIHCli:oe юдеяltе 41111 Дlt8пtОСТНКИ нн ••n:po
Набор реаге�пов 41111 BL111ВJ1tн1111 генtтnческнх марnров ДНК
мнlСОбактtрнil rуберкулезного комnл,кса (МБТК), ассоцн■рованнwх с
устоilч11востью к рифамnиQllну n юони•1�, методом полимерuвоil
цепноii реаКQ\lи в реал�,,ном времени (11.ЦР•РВ) «Aiitпл�МDR•PB»
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
B�pcш•.IID•Y•a:im 202S'•l
)
�o;нn,:��.J....-� !5-P. 31, �, т.,, 1•�\.,,.,.:,r.:;;;,;,"ЪiiiiiJмf;,,,щ
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
сАмnnм,у6-МОR-РВ•
titaop реаrенто■ AПllf IWfl8"8kMllf retitmNecккx м•р� ДНК мwiсоб11СТермt туберсу.nе,наrо 111!DМПJ18w:li (МБТК}, IССОЦММр()UНН...Х Cycтotчw�:.=:1�$,r:�,x�t��,;�;мepa:ttfOA Ц41П"ОЙ ре8IЩММ 8
ТУ 20,58,&2-01&-8731Я83-2025,
1. tm11401U •1 l!!!jOМ-IOO - 1 �2021.01 1 � 20U.ol ]
, .. ,. ··-н ..... ......,....,,.f'iOltetfТ. x.-r�• -, .. ........ ....... '' ,cM•""MDR•
P......-�PCMi;aйll-МDA
ПpcцpaчrwW.owocn,. .wr
�"°�
:ПМl"l .... .tм.МОR
·-- П,,С,Ороl��
---
о,р.цот.-�-(),0 Про,��
:�т----.... --
·прсорачt18,r�9"'
:т:�АО
�-,��CQ(lll.-ц8111 "��"·
nD���ПКO'I.МDfl C8fJD,.pc808Cl'0,IJO
1�-•--.... -· : �� ..
•-���1ПkQZ<flDR ��-�-
J·•-.... �--....cldlt/9 "���
no
2.IT.IJOIИl.fec:«м• -�
0,W4'МЛ • 7 )1$'}1коiо« no2�no•
0,2,мn • t �
Q,2un•1�
Oj004мn••48 �no2�
' . в O,OD4·Nn • 12·
':.,.;-�•102�
· о;.а:ммn·•з� Ф•2 еrрим no 8
' ,
5мn•Sn�
1
':V�'ЩW
-
..,.,_...,.. _.,.
------
...,..,.,.,.,
·-
'"""'"""8y8f
с ......... ,.,.
�
Cooiм.c,o,ot
� ..
Эамооч"мо ОБТI\\ H�i!OP l!"!'IWll1!'! �D�В.. �GT 141112f ао - _,,
ШОТМ!'СТ8У""�•�м Т'f 20,68 52�16-11Зf3"\аз-2025.
-� - рuнмца "'! -ymo • ,...,... .. ,.,._ ЦIIID no - С,О • - • •- (�АМ.
RIG.tlEXМC, ROX)
5
--- стр. 6 ---
4. Упаковка комплекта реагентов для проведения предварительной амплификации «Multi
MDR»
Анм,nуб-МDR•РЗ
Комплект pearelfJ'Os дпя прnsедения предварительной
амплификации «Multl MDR»
�CNIO&MMI 4 15 J 1
l!l!Мii/FМDR
�--...,� ... .,,
IJXO..mulll-МDR
�WIWA�1•11q;liioliplэeц,Ol(O
o.oo,i Н11
0,2 Н11
7�no2crp,,ru
по 8 НИlq)О�
1npa&qжa
1 npa6iqжa
6
--- стр. 7 ---
5. Общий вид кqмплекта реагентов для проведения предварительной амплификации
«Multi MDR»
PCMulti•MDR
J'N811-..J!fEO,
l}'NIIIIIOlr по 2,{JJ»lna
1108��
по11,DО4ш
!lliJOM-600
7-rю2013<Dil
nог..._..,,..
•111'С1611Р<а
7
--- стр. 8 ---
_r---.,,
6. Общий вид реакционной смеси, РС Multi-MDR
8
--- стр. 9 ---
1
7. Упаковка с двумя стрипами РС Multi-MDR
1
· )
9
--- стр. 10 ---
)
8. Положительный контрольный образец, ПKO-multi-MDR
10
--- стр. 11 ---
9. Отрицательный контрольный образец, окJ )
11
--- стр. 12 ---
1 О. Общий вид реакционной смеси для иссле'Д�емых образцов, PC-MDR )
12
--- стр. 13 ---
)
11. Упаковка с двумя стрипами реакционной смеси для исследуемых образцов, PC-rv1Jk, вид сбоку
13
--- стр. 14 ---
12. Упаковка с двумя стрипами реакционной смеси для исследуемых образцов, PC-MDR,
вид сверху
14
--- стр. 15 ---
13. Общий вид реакционной смеси, содержащей положительные контрольные образцы,
ПK01-MDR
15
--- стр. 16 ---
14. Упаковка с двумя стрипами реакционной смеси, содержащей положительные
контрольные об азцы, ПK01-MDR, вид сбоку·-��-----------
16
--- стр. 17 ---
15. Упаковка с двумя стрипами реакционной смеси, содержащей положительные
контрольные образцы, ПK01-MDR, вид сверху
17
--- стр. 18 ---
16. Общий вид реакционной смеси, содержащ�й положительные контрольные образцы, ПK02-MDR
!зСИНТОЛ
Aмnninyб-lMDR,PВ
iAMIJ�Ml'R
[Вl)ОМ-600
�-oita,,Щlltp:8alUII
-�o6pa11CJ;/
3)0l!!Dllllno21JJJ]!Фano
8 l!lflJIIИ!poбHJIDII ПО 0,004 М/1
CoclaCIДlallcrJМQ:
lapaliopll •ЯSOIYIAlll2 1:•':Ш}
2·11(1111i!JJ:a 111445Q!Мlв4 ,IDl!m')
3� 1144�А1116 tmm)
4'/11116!1111 D43SY:№11D !Ш1m s� wm:м.iu UDDm
liJ111161,a 531511:AIIIIU
1!1lfiolla •«� 18i'И
··� *'ft-«IA:Alld.t Jflil'ml
t16t .t.•141! •"-"
·!ill � Шб1Ф8 l!D140825
18
--- стр. 19 ---
17. Упаковка с двумя стрипами реакционной смеси, содержащей положительные
контрольные образцы, ПK02-MDR, вид сбоку
19
--- стр. 20 ---
18. Упаковка с двумя стрипами реакционной смеси, содержащей положительные
контрольные образцы, ПK02-MDR, вид сверху
20
--- стр. 21 ---
19. Общий вид раствора для разведения образцов, ddH20
�
21
--- стр. 22 ---
20. Раствор для разведения образцов, ddH2O
22
--- стр. 23 ---
-~-----...,.. __ -�
�·� ,.,��� .�; 0' r\.c,'fl\
/•' <l?or
// :
-:i
" о.::-
"?
, , rt,
\1'·._i f \Ji\\"\j
�•- '5
�'i) �/,,_
0<9✓ 0,1 ··
;;;;.��.t,'i-
--..;;:,. =- --
Про11умсровано, прошито и
скреплено 11счатью _J,,2_, J1иста(-оu)
.ыi-1 директор
Синтош>
� А.В. Кузубов
=== файл: unknown__Инструкция Амплитуб-MDR-РВ.pdf ===
--- стр. 1 ---
Медицинское изделие для диагностики ин витро
Набор реагентов для выявления генетических маркеров ДНК
микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК), ассоциированных с
устойчивостью к рифампицину и изониазиду, методом полимеразной
цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) «Амплитуб-МDR-РВ»
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
--- стр. 2 ---
Инструкция по применению
Лист 2
Всего листов 54
СОДЕРЖАНИЕ
1 НАЗНАЧЕНИЕ ........................................................................................................................................................ 4
1.1 ПОЛНОЕ НАИМЕНОВАНИЕ НАБОРА .................................................................................................................. 4
1.2 НАЗНАЧЕНИЕ НАБОРА ....................................................................................................................................... 4
1.3 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА ..................................................................................................................... 4
1.4 ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ПОЛЬЗОВАТЕЛИ ................................................................................................................. 4
1.5 ПОПУЛЯЦИОННЫЕ, ДЕМОГРАФИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПРИМЕНЕНИЯ МЕДИЦИНСКОГО ИЗДЕЛИЯ ............... 4
1.6 ПОКАЗАНИЯ К ПРОВЕДЕНИЮ ИССЛЕДОВАНИЯ ............................................................................................... 4
1.7 ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ, РИСКИ ПРИМЕНЕНИЯ ИЗДЕЛИЯ, ОЖИДАЕМЫЕ И ПРЕДСКАЗУЕМЫЕ ПОБОЧНЫЕ
ЭФФЕКТЫ ....................................................................................................................................................................... 5
2 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА ........................................................................................................................... 5
2.1 СОСТАВ НАБОРА ................................................................................................................................................ 5
2.2 КОМПЛЕКТНОСТЬ ............................................................................................................................................. 6
2.3 ПРИНЦИП МЕТОДА ............................................................................................................................................ 6
2.4 ОПИСАНИЕ ЦЕЛЕВОГО АНАЛИТА, СВЕДЕНИЯ О ЕГО НАУЧНОЙ ОБОСНОВАННОСТИ ................................... 7
2.5 ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА .................................................................................................................................... 9
3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ....................................................................................................... 9
3.1 ПРЕДЕЛ ОБНАРУЖЕНИЯ .................................................................................................................................... 9
3.2 АНАЛИТИЧЕСКАЯ СПЕЦИФИЧНОСТЬ ............................................................................................................ 10
3.3 ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО
МАТЕРИАЛА.................................................................................................................................................................. 10
3.4 ПРЕЦИЗИОННОСТЬ ИЗМЕРЕНИЯ ..................................................................................................................... 11
4 ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ............................................................................................... 12
5 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ ................................................................. 12
6 ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ ........................ 15
6.1 СВЕДЕНИЯ О ВОЗМОЖНОСТИ И ОСОБЕННОСТИ СОВМЕСТНОГО ПРИМЕНЕНИЯ МИ С ДРУГИМ МИ ....... 15
6.2 СВЕДЕНИЯ ОБ ОТСУТСТВИИ ОГРАНИЧЕНИЯ ВЗАИМОЗАМЕНЯЕМОСТИ ...................................................... 15
6.3 ОБОРУДОВАНИЕ .............................................................................................................................................. 16
6.4 МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА .................................................................... 17
7 АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ПРОБЫ ............................................................................................................................ 17
7.1 ТИП ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ ..................................................................................................................... 17
7.2 КРИТЕРИИ ОТБОРА ОБРАЗЦОВ ДНК МБТК, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО
АНАЛИЗА НА ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ С ПОМОЩЬЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ
«АМПЛИТУБ-MDR-РВ» .............................................................................................................................................. 18
7.3 УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ПРОБ (ОБРАЗЦОВ ДНК) .................... 18
8 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА.................................................................................................................................. 18
8.1 ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-РВ С ПОМОЩЬЮ КОМПЛЕКТА «MULTI MDR» ........................................................... 19
8.1.1 Подготовка и проведение ПЦР-РВ «Multi MDR» ............................................................................. 19
8.1.2 Учет и интерпретация результатов ПЦР-РВ «Multi MDR» ........................................................ 20
8.2 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕННЫХ МУТАЦИЙ В ЛОКУСАХ RPOB, KATG И INHA МБТК ............................................ 22
8.2.1 Постановка и выбор контролей .......................................................................................................... 22
8.2.2 Подготовка и проведение ПЦР-РВ ..................................................................................................... 23
8.2.3 Анализ и интерпретация результатов ............................................................................................. 25
8.2.4 Примеры интерпретации результатов анализа ............................................................................. 34
8.2.5 Возможные ошибки............................................................................................................................... 50
9 УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА .......................... 51
9.1 УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ ...................................................................................................................................... 51
9.2 УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ .................................................................................................................. 51
9.3 УСЛОВИЯ ЭКСПЛУАТАЦИИ И УКАЗАНИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ ....................................................................... 51
9.4 СРОК ГОДНОСТИ .............................................................................................................................................. 52
10 ИНФОРМАЦИЯ ПО БЕЗОПАСНОЙ УТИЛИЗАЦИИ ............................................................................. 52
11 ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ .................................................................... 52
12 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ МАРКИРОВКЕ НАБОРА ......................................................... 53
13 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ ................................................... 53
--- стр. 3 ---
Инструкция по применению
Лист 3
Всего листов 54
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:
МБТК - микобактерии туберкулезного комплекса
ЛУ - лекарственная устойчивость
МЛУ ТБ - туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью
ПЦР - полимеразная цепная реакция
АС-ПЦР - аллель-специфичная ПЦР
АС-ПЦР-РВ - аллель-специфичная ПЦР в реальном времени
ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция с флуоресцентной детекцией результата
амплификации в режиме «реального времени»
ГЭ - геномный эквивалент (геном)
РС - реакционная смесь
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ПКО - положительный контрольный образец
ОКО - отрицательный контрольный образец
СКО - специализированный контрольный образец
Ct - пороговый цикл
--- стр. 4 ---
Инструкция по применению
Лист 4
Всего листов 54
1 НАЗНАЧЕНИЕ
1.1 Полное наименование набора
Набор реагентов для выявления генетических маркеров ДНК микобактерий
туберкулезного комплекса (МБТК), ассоциированных с устойчивостью к рифампицину и
изониазиду, методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР -РВ)
«Амплитуб-MDR-РВ» (далее – Амплитуб-MDR-РВ, набор, набор реагентов, медицинское
изделие, изделие).
1.2 Назначение набора
Набор реагентов «Амплитуб -MDR-РВ» предназначен для выявления генных мутаций
ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК) в клиническом материале и образцах
биологических культур методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с
праймерами, специфичными в отношении фрагментов ДНК генов rpoB, katG и inhA, с целью
in vitro диагностики форм туберкулеза с устойчивостью к рифампицину и изониазиду и оценки
эффективности проводимой терапии.
Диагностическая роль набора реагентов заключается в возможности его использования
как ускоренного теста лекарственной устойчивости (ЛУ) МБТК при исследовании материала
от больного туберкулезом и назначении или коррекции режима химиотерапии с целью
повышения вероятности эффективного лечения больных туберкулезом с множественной
лекарственной устойчивостью (МЛУ ТБ) и сокращения сроков химиотерапии.
1.3 Область применения набора
Клиническая лабораторная диагностика туберкулеза, научные исследования. Набор
может быть использован в учреждениях медицины и здравоохранения, в лабораториях
медицинских организаций, оказывающих специализированную медицинскую помощь по
профилю «фтизиатрия», в научно-исследовательских лабораториях и учреждениях.
1.4 Потенциальные пользователи
К работе с набором реагентов допускается только квалифицированный медицинский
персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико -
диагностической лаборатории в установленном порядке (СанПиН 3.3686- 21 «Санитарно-
эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней»).
1.5 Популяционные, демографические аспекты применения медицинского изделия
Популяционные, демографические ограничения применения набора отсутствуют.
1.6 Показания к проведению исследования
Применять в соответствии с назначением.
--- стр. 5 ---
Инструкция по применению
Лист 5
Всего листов 54
1.7 Противопоказания, риски применения изделия, ожидаемые и предсказуемые
побочные эффекты
В ходе менеджмента риска установлено, что применение изделия для диагностики in
vitro «Амплитуб-MDR-РВ» не создает прямого риска для пациента или обследуемого лица,
так как его не применяют наружно или внутренне (энтерально). Следовательно,
противопоказания, ожидаемые и предсказуемые побочные эффекты, связанные с
применением медицинского изделия по назначению, отсутствуют, за исключением случаев,
когда забор материала не может быть осуществлен по медицинским показаниям.
При применении набора по назначению, в соответствии с инструкцией по применению
риски применения отсутствуют.
Набор реагентов не подлежит использованию в случаях:
нарушенной внутренней упаковки или не соответствующего описанию
внешнего вида реагентов;
несоблюдения условий транспортирования и хранения согласно инструкции;
истекшего срока годности.
2 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1 Состав набора
Набор реагентов выпускается в одной модели и состоит из 5 компонентов. В состав
набора входит комплект для проведения предварительной мультиплексной ПЦР -РВ с целью
накопления специфического ДНК фрагментов генов rpoB, katG и inhA Mycobacterium
tuberculosis complex. Компоненты, входящие в состав набора реагентов, представлены в
таблице 1.
Таблица 1 – Состав набора реагентов
№ Компонент Номинальный
объем, мл Количество
1.
Комплект реагентов для проведения предварительной амплификации «Multi MDR»
Реакционная смесь, РС Multi-MDR 0,004 мл 7 упаковок по 2 стрипа
по 8 микропробирок
Положительный контрольный образец,
ПКО-multi-MDR 0,2 мл 1 пробирка
Отрицательный контрольный образец,
ОКО 0,2 мл 1 пробирка
2. Реакционная смесь для исследуемых
образцов, РС-MDR 0,004 мл 48 упаковок по 2 стрипа
по 8 микропробирок
--- стр. 6 ---
Инструкция по применению
Лист 6
Всего листов 54
№ Компонент Номинальный
объем, мл Количество
3.
Реакционная смесь, содержащая
положительные контрольные образцы,
ПКО1-MDR
0,004 мл 12 упаковок по 2 стрипа
по 8 микропробирок
4.
Реакционная смесь, содержащая
положительные контрольные образцы,
ПКО2-MDR
0,004 мл 3 упаковки по 2 стрипа
по 8 микропробирок
5. Раствор для разведения образцов, ddH2O 5 мл 5 пробирок
Инструкция по применению - 1 штука
Набор рассчитан на определение 96 образцов и содержит 126 стрипов, включая
контрольные образцы. Каждый стрип предназначен для анализа 1 образца и содержит 8
пробирок с раскапанными различными реакционными смесями, предназначенными для
выявления мутаций в определенных кодонах генов rpoB, katG и inhA, ответственных за
устойчивость к рифампицину и изониазиду. Первая пробирка каждого стрипа
промаркирована.
2.2 Комплектность
В комплект поставки входят:
− Набор реагентов «Амплитуб-MDR-РВ»;
− Паспорт качества.
Паспорт качества поставляется пользователю в количестве 1 шт. на серию набора
реагентов.
2.3 Принцип метода
Выявление генных мутаций ДНК МБТК в определенных кодонах генов rpoB, katG и
inhA МБТК с помощью набора реагентов основано на использовании оригинального метода
мультиконкурентной аллель -специфичной полимеразной цепной реакции с получением
результата в режиме реального времени. Метод мультиконкурентной аллель-специфичной
ПЦР-РВ сочетает ПЦР-РВ и аллель-специфичную ПЦР (АС-ПЦР).
Аллель-специфичная ПЦР (АС-ПЦР) основана на том положении, что для эффективной
ПЦР 3’ -концевой нуклеотид праймера должен быть комплементарен соответствующему
нуклеотиду ДНК-матрицы, в противном случае эффективность удлинения праймера во время
ПЦР резко снижается или может отсутствовать совсем. АС -ПЦР позволяет получать
информацию не только о наличии мутации в геномной ДНК, но и ее аллельном распределении.
Мультиконкурентная АС -ПЦР в реальном времени (АС-ПЦР-РВ) основана на
конкурентном встраивании аллель -специфичных праймеров с различными нуклеотидами на
3’-конце.
--- стр. 7 ---
Инструкция по применению
Лист 7
Всего листов 54
В реакционной смеси ПЦР -РВ содержатся прямой и обратный праймеры,
гибридизационный флуоресцентный зонд, не содержащие мутаций, а также 5’ -
флуоресцентно-меченные аллель-специфичные праймеры, несущие на 3’-конце определенные
нуклеотидные замены, и общий комплементарный аллель -специфичным праймерам 3’ -
меченный олигонуклеотид -гаситель. Каждый аллель -специфичный праймер со своей
нуклеотидной заменой мечен своим флуоресцентным красителем, что позволяет по мере
накопления продукта реакции определять его присутстви е в исходной ДНК по изменению
флуоресценции. В одной пробирке одновременно можно определять до трех точек мутаций
(зонд + 3 аллель -специфичных праймера) по числу возможных флуорофоров, одновременно
считываемых прибором. Если анализируемый образец не содержит мутаций, то будет идти
ПЦР-РВ с прямым и обратным праймерами, не мечеными и не содержащими мутаций, и
нарастание флуоресценции будет наблюдаться только по флуорофору гибридизационного
зонда. Если образец содержит мутацию, то нарастание флуоресценции будет наблюдаться
и по флуорофору гибридизационного зонда, и по флуорофору 5’ -флуоресцентно-меченного
аллель-специфичного праймера, который будет встраиваться вместо обычного праймера, не
содержащего мутаций.
Гибридизационный флуоресцентный зонд, не содержащий мутаций, является маркером
присутствия искомого специфического фрагмента и играет роль внутреннего контроля,
контролируя возможное ингибирование реакции в целом.
2.4 Описание целевого аналита, сведения о его научной обоснованности
Рифампицин и изониазид – основные противотуберкулезные препараты I ряда.
Механизм действия рифампицина связан с ингибированием бактериальной ДНК-зависимой
РНК-полимеразы. Мутации, приводящие к устойчивости, препятствуют связыванию
препарата с мишенью и расположены в гене rpoB. Несмотря на довольно значительный размер
белка – 1172 ак – у МБТК почти все мутации (93%-98%) происходят в сегменте гена rpoB,
состоящем из 81 основания и кодирующем аминокислоты 426-452.
Изониазид представляет собой про-лекарство, для проявления антибактериальной
активности которого молекула препарата должна быть активирована внутри микробной
клетки ферментом бифункциональной каталазой/пероксидазой KatG, кодируемой геном katG.
Активация изониазида KatG приводит к образованию множества высокореактивных частиц, в
дальнейшем атакующих целую группу мишеней внутри палочки M.tuberculosis. Любая
мутация, нарушающая способность KatG окислять изониазид, приводит к устойчивости к
изониазиду. Это первый и основной механизм развития устойчивости к изониазиду. Мутации
в гене katG (обычно в положении 315) обнаруживают приблизительно у половины изониазид-
--- стр. 8 ---
Инструкция по применению
Лист 8
Всего листов 54
устойчивых штаммов МБТК. Вторым механизмом развития устойчивости МБТК к изониазиду
является гиперпродукция мишеней действия активных форм препарата. К указанным
мишеням относятся белки, участвующие в транспорте предшественников миколовой кислоты
и ее биосинтезе: ацилированный белок-носитель (ген асрМ), синтетаза (ген kasA) и редуктаза
(ген inhA) белка -переносчика еноил -ацильного радикала. Миколовая кислота является
основным компонентом клеточной стенки МБТК. Мутации обычно выявляются в
промоторных областях перечисленных генов. Уровень устойчивости связан с
гиперпродукцией мишеней и, как правило, ниже, чем при мутациях в генах каталазы -
пероксидазы. Туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ ТБ) – это
туберкулез, устойчивый по крайней мере к двум наиболее эффективным
противотуберкулезным препаратам, изониазиду и рифампицину.
Набор реагентов «Амплитуб -MDR-РВ» определяет 11 мутаций, ассоциированных с
устойчивостью к рифампицину – наиболее часто встречаемые мутации в кодонах 450, 445, 435
и 452 гена rpoB МБТК, и 6 мутаций, ассоциированных с устойчивостью к изониазиду – 3
мутации в 315 кодоне гена katG и 3 мутации в промоторной части оперона fabG1-inhA (таблица
2).
Таблица 2 – Кодоны и генные мутации rpoB, katG и inhA локусов, определяемые с помощью
набора
Анти
биот
ик
№
проб-
ки в
стрип
е
Гены и
кодоны
Мутации, определяемые в каждой
пробирке Красители
замена обозн-е мутации контроль
ный зонд
Рифампицин
1 rpoB450 S450L TCG – TTG Alm1 FAM Cy5 S450W TCG – TGG Alm2 ROX
2 rpoB445
H445Y CAC – TAC Alm3 FAM
Cy5 H445D CAC – GAC Alm4 JOE*
H445R CAC – CGC Alm5 ROX
3 rpoB445
H445L CAC – CTC Alm6 FAM
Cy5 H445N CAC – AAC Alm7 JOE*
H445P CAC – CCC Alm8 ROX
4 rpoB435 D435V GAC – GTC Alm9 ROX Cy5 D435Y GAC – TAC Alm10 FAM
5 rpoB452 L452P CTG – CCG Alm11 FAM Cy5
Изониазид
6 katG315
S315T2 AGC – ACA Alm12 FAM
Cy5 S315T1 AGC – ACC Alm13 JOE*
S315N AGC – AAC Alm14 ROX
7 inhA inhA_C-777T (fabG1_C-15T) Alm15 FAM Cy5
8 inhA inhA_T-770C (fabG1_T-8C)
inhA_T-770A (fabG1_T-8A) Alm16 FAM Cy5
* JOE является спектральным аналогом красителей R6G/HEX/VIC
--- стр. 9 ---
Инструкция по применению
Лист 9
Всего листов 54
По каналу Cy5 детектируется гибридизационный флуоресцентный зонд,
определяющий наличие в образце генных локусов rpoB, katG и inhA МБТК. По каналам FAM,
R6G/HEX/VIC и ROX определяется наличие мутаций генов rpoB, katG и inhA МБТК.
Положительный результат теста означает, что исследуемый образец ДНК содержит
мутации в генах микобактерий туберкулеза, определяющих устойчивость к рифампицину
и/или изониазиду. Отрицательный результат теста означает, что в исследуемом образце ДНК
не обнаружено мутаций, определяемых данным набором.
2.5 Ограничения метода
Для анализа используют образцы, в которых подтверждено наличие ДНК МБТК при
помощи количественного анализа с применением зарегистрированных наборов реагентов
(например, «Амплитуб-РВ» (ООО «Синтол», Россия, ФСР 2010/07635)).
Причиной получения ложноотрицательного результата является ингибирование ПЦР -
РВ и/или недостаточное количество ДНК в исследуемой пробе. Это может быть вызвано
некачественной предобработкой биологического материала и/или недостаточной
эффективностью выделения ДНК. Поэтому, для экстракции ДНК и последующего ПЦР -РВ-
анализа с целью обнаружения МБТК следует использовать наборы реагентов, содержащие
контролирующие компоненты, проходящие все этапы анализа. Ложноотрицательный
результат выявляется с помощью специфического зонда, контролирующего наличие генных
локусов rpoB, katG и inhA МБТК, в котором могут содержаться мутации.
3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Аналитические характеристики набора реагентов «Амплитуб-MDR-РВ»
(специфичность, предел обнаружения, прецизионность (повторяемость, воспроизводимость))
были установлены в ходе валидации набора реагентов на базе ООО «НПФ Синтол» (г. Москва)
и подтверждены в ходе клинических испытаний на базе ФГБНУ «Центральный научно -
исследовательский институт туберкулеза» (107564, г. Москва, Яузская аллея, д. 2).
При валидации набора реагентов для получения образцов использовали реагент для
предобработки образцов, предположительно содержащих ДНК микобактерий, «Амплитуб -
Преп» (ООО «Синтол», Россия, РЗН 2017/6634) и набор реагентов «Амплитуб -РВ» (ООО
«Синтол», Россия, ФСР 2010/07635) для выделения, обнаружения и количественного
определения ДНК микобактерий туберкулезного комплекса в культуре микобактерий и
клиническом материале.
3.1 Предел обнаружения
Предел обнаружения – 2,5× 102 ГЭ/мл (5 ГЭ на амплификационную пробирку) ДНК,
выделенной из биологического материала, с воспроизводимостью 95%.
--- стр. 10 ---
Инструкция по применению
Лист 10
Всего листов 54
3.2 Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность анализа – 100%, определяется используемыми
праймерами и флуоресцентными зондами, строго специфичными по отношению к
Mycobacterium tuberculosis и мутациям rpoB_D435V, rpoB_D435Y, rpoB_H445D, rpoB_H445L,
rpoB_H445N, rpoB_H445P, rpoB_H445R, rpoB_H445Y, rpoB_L452P, rpoB_S450L,
rpoB_S450W, katG_S315N, katG_S315T1, katG_S315T2, inhA_C-777T (fabG1_C-15T ), inhA_T-
770C (fabG1_T-8C), inhA_T-770A (fabG1_T-8A) в генах rpoB, katG и inhA МБТК.
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана при исследовании ДНК,
выделенных из образцов клинического материала и культур:
- от больных с комплексно установленным диагнозом туберкулез с МЛУ возбудителя;
- от больных туберкулезом с возбудителем, чувствительным к рифампицину и
изониазиду.
В процессе валидации были исследованы следующие микроорганизмы/штаммы:
700403 Mycobacterium tuberculosis H37Rv TMC 102, ATCC-35719 Mycobacterium avium subsp.
avium, ATCC-12478 Mycobacterium kansasii, ATCC-19977 Mycobacterium abscessus.
В качестве контрольных методов для сравнения результатов был использован метод
секвенирования по Сенгеру для выявления мутаций, набор реагентов для определения
лекарственной устойчивости микобактерий туберкулезного комплекса к рифампицину и
изониазиду методом полимеразной цепной реакции в реальном времени «Амплитуб -МЛУ-
РВ» (ООО «Синтол», Россия, ФСР 2010/07636) , а также определение лекарственной
чувствительности к препаратам рифампицину и изониазиду в жидкой среде методом
пропорций в системе для автоматического учета роста культур BACTEC MGIT 960.
При тестировании образцов ДНК микобактерий и ДНК человека неспецифических
реакций выявлено не было.
3.3 Интерферирующие вещества и ограничения по использованию проб исследуемого
материала
Интерферирующие вещества могут присутствовать в исследуемом образце или попасть
в него на этапе пробоподготовки. При работе с набором реагентов используются не нативные
образцы клинического материала или культур ы, а образцы уже выделенной ДНК МБТ К в
определенной концентрации. Для предварительной подготовки, экстракции ДНК и
последующего ПЦР -РВ-анализа с целью обнаружения МБТК следует использовать наборы
реагентов, содержащие контролирующие компоненты, проходящие все этапы анализа. Для
получения образца ДНК и выявления МБТК в образце ДНК могут быть использованы любые
наборы реагентов, предназначенные для этих целей и зарегистрированные в РФ (например,
реагент для предобработки образцов, предположительно содержащих ДНК микобактерий ,
--- стр. 11 ---
Инструкция по применению
Лист 11
Всего листов 54
«Амплитуб-Преп» (ООО «Синтол», Россия, РЗН 2017/6634) и набор реагентов «Амплитуб -
РВ» (ООО «Синтол», Россия, ФСР 2010/07635)).
Ингибирующего влияния эндогенных (гемоглобин 200 мкг/мл, муцин 5%) и
экзогенных (Изокомб (1 %), АЦЦ (0,1 %), амброксол (1 %), бромгексин (0,5 %), беродуал (1
%) потенциально интерферирующих веществ на результат ПЦР -исследования набором
реагентов «Амплитуб-MDR-РВ» после обработки образцов реагентом «Амплитуб -Преп»
(ООО «Синтол», Россия, РЗН 2017/6634), выделения и количественного анализа ДНК МБТК
набором «Амплитуб-РВ» (ООО «Синтол», Россия, ФСР 2010/07635) не обнаружено.
3.4 Прецизионность измерения
В ходе валидации набора реагентов для шести видов амплификаторов, разных мест и
времени анализа, а также различными операторами, была проведена оценка прецизионности
в условиях повторяемости и воспроизводимости. Повторяемость и воспроизводимость
выявления генных мутаций ДНК МБТК были установлены путем тестирования образцов,
содержащих и не содержащих мутации, ассоциированные с устойчивостью к рифампицину и
изониазиду. Образцы представляли собой разведения специализированных контрольных
образцов (СКО) с концентрациями 5 ГЭ/мкл, 0,5 ГЭ/мкл фрагментов ДНК МБТК, а также ДНК
МБТК, выделенные из образцов клинического материала и культур и проанализированные
молекулярно-генетическими методами с целью выявления генетических маркеров,
специфичных для МБТК, и количественной оценки клеток МБТК в образце.
Под повторяемостью понимали степень близости друг к другу независимых результатов,
полученных в стандартизованных условиях: тестирование одним и тем же методом, в одной и
той же лаборатории, одним и тем же оператором, с использованием одного и того же
комплекта оборудования в пределах короткого промежутка времени.
Под воспроизводимостью понимали степень близости друг к другу независимых
результатов, полученных в стандартизованных условиях: тестирование разными операторами,
в разные дни, с использованием различных комплектов оборудования, разных серий набора.
Внутрипостановочная повторяемость результатов исследования специализированных
контрольных образцов на выявление генных мутаций ДНК микобактерий туберкулезного
комплекса набором на 6 видах амплификаторов составила 100 % с коэффициентом вариации
пороговых циклов амплификации 10- ти повторов каждого образца не более 7 % (для двух
серий). Межсерийная воспроизводимость результатов исследования контрольных образцов на
выявление генных мутаций ДНК микобактерий туберкулезного комплекса набором на 6 видах
амплификаторов составила 100 % с коэффициентом вариации пороговых циклов
амплификации 10-ти повторов каждого образца не более 7 %.
При проведении исследований наблюдалась полная внутрипостановочная
--- стр. 12 ---
Инструкция по применению
Лист 12
Всего листов 54
повторяемость, межпостановочная и межсерийная воспроизводимость для всех
положительных образцов.
4 ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Клинические испытания МИ проведены в ФГБНУ «Центральный научно -
исследовательский институт туберкулеза» (107564, г. Москва, Яузская аллея, д. 2).
В ходе клинических испытаний на образцах ДНК МБТК, содержащих и не содержащих
целевые для набора мутации, ассоциированные с устойчивостью к изониазиду и
рифампицину, доказана эффективность набора реагентов «Амплитуб -MDR-РВ» для
выявления генных мутаций ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК) в
клиническом материале и образцах культур методом полимеразной цепной реакции в
реальном времени с праймерами, специфичными в отношении фрагментов ДНК генов rpoB,
katG и inhA , и определены значения диагностических характеристик с доверительной
вероятностью 95% (таблица 3).
Чувствительность набора реагентов «Амплитуб -MDR-РВ» при выявлении
генетических маркеров ДНК МБТК, ассоциированных с устойчивостью к рифампицину и
изониазиду, составляет для каждой мутации не менее 91,24% с доверительной вероятностью
95%.
Специфичность набора реагентов «Амплитуб-MDR-РВ» при выявлении генетических
маркеров ДНК МБТК, ассоциированных с устойчивостью к рифампицину и изониазиду,
составляет для каждой мутации не менее 97,82% с доверительной вероятностью 95%.
Таблица 3 - Диагностические характеристики набора реагентов «Амплитуб-MDR-РВ»
Мутация
Чувствительность (%) метода при
выделении ДНК из
Специфичность (%) метода при выделении
ДНК из
культур клин. мат-ла суммарно культур клин. мат-ла суммарно
rpoB_S450L 91,24-1001) 91,24-1001) 95,42-100 98,53-1005) 98,53-1005) 99,26-100
rpoB_S450W 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
rpoB_H445Y 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
rpoB_H445D 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
rpoB_H445R 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
rpoB_H445L 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
rpoB_H445N 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
rpoB_H445P 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
rpoB_D435V 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
rpoB_D435Y 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
rpoB_L452P 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
katG_S315T2 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
katG_S315T1 98,22-1003) 98,22-1003) 99,10-100 95,72-1007) 95,72-1007) 97,82-100
katG_S315N 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
inhA_C-777T
(fabG1_C-15T) 95,99-1004) 95,99-1004) 97,95-100 98,17-1008) 98,17-1008) 99,08-100
inhA_T-770C/A
(fabG1_T-8C/A) 83,89-1002) 83,89-1002) 91,24-100 98,64-1006) 98,64-1006) 99,31-100
Примечание: 1) число заведомо положительных образцов - 40;
--- стр. 13 ---
Инструкция по применению
Лист 13
Всего листов 54
2) число заведомо-п оложительных образцов - 20;
3) число заведомо-п оложительных образцов - 212;
4) число заведомо-п оложительных образцов - 92;
5) число заведомо отрицательных образцов - 258;
6) число заведомо отрицательных образцов - 278;
7) число заведомо отрицательных образцов - 86;
8) число заведомо отрицательных образцов – 206.
5
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ
Класс потенциального риска применения набора (Приказ Минздрава РФ от 06.06.2012
№ 4н; приложение № 2 в редакции Приказа Минздрава РФ от 07.07.2020 № 686н) – 2б.
Работа с набором должна проводиться в лаборатории, использующей методы
амплификации нуклеиновых кислот для исследования материала, с соблюдением требований
ГОСТ Р ИСО 15190- 2023 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности », МУ
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I –IV групп
патогенности», СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по
профилактике инфекционных болезней» , СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-
эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений,
водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху,
почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений,
организаций и проведению санитарно -противоэпидемических (профилактических)
мероприятий», Приказа МЗ РФ № 109 от 21 марта 2003 г. «О совершенствовании
противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации», Приказа МЗ РФ № 951 от 29
декабря 2014 г. «Об утверждении методических рекомендаций по совершенствованию
диагностики и лечения туберкулез а органов дыхания». При работе необходимо всегда
выполнять следующие требования: рассматривать исходные исследуемые образцы
биологического материала как инфекционно -опасные; инактивировать исходные
исследуемые образцы биологического материала в соответстви и методическими указаниями
МУ 1.3.2569-09.
К работе с набором допускается только квалифицированный медицинский персонал,
обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико -
диагностической лаборатории в соответствии с СанПиН 3.3686- 21 (раздел IV) . Необходимо
одновременное обеспечение и соблюдение персоналом правил биологической безопасности и
требований к организации и проведению исследования материала методом ПЦР -РВ с целью
предотвращения контаминации нуклеиновыми кислотами исследуемых проб, помещений и
оборудования.
При работе необходимо всегда выполнять следующие требования:
--- стр. 17 ---
Инструкция по применению
Лист 17
Всего листов 54
6. Штатив для работы с микропробирками объемом 1,5-2,0 мл.
7. Штатив для работы со стрипованными микропробирками объемом 0,2 мл.
8. Х олодильник от 2 °С до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 16 °С.
6.4 Материалы и реагенты, не входящие в состав набора
1. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с аэрозольным барьером
до 20 и до 200 мкл.
2. Ми
кропробирки типа «Эппендорф» объемом 1,5-2,0 мл.
3. Од
норазовый медицинский халат, шапочка, обувь и одноразовые медицинские
перчатки по МУ 1.3.2569-09.
4. Ко
мплект средств для обработки рабочего места.
5. Ем
кости для сброса наконечников и микропробирок.
7
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ПРОБЫ
7.1 Тип исследуемых образцов
При использовании набора реагентов в качестве анализируемой пробы может быть
любой образец ДНК МБТК с содержанием клеток МБТК не менее 250 м.к./мл (0,25 ГЭ/мкл) и
отобранный в соответствии с критериями, указанными в п. 7.2.
ДНК МБТ К может быть получена экстракцией из любого клинического материала,
предназначенного для анализа микобактерий туберкулеза, деконтаминированных осадков,
полученных в результате стандартных процедур пробоподготовки при микробиологических
исследованиях (Приказ №109 Минздрава РФ от 21 марта 2003 г., приложение 11), образцов
культур. Выделенные образцы ДНК должны быть проанализированы молекулярно -
генетическими методами с целью выявления генетических маркеров, специфичных для
МБТК, и количественной оценки клеток МБТ К в образце. Для получения образца ДНК и
количественного анализа МБТ К в образце ДНК могут быть использованы любые наборы
реагентов, предназначенные для этих целей и зарегистрированные в РФ (например,
«Амплитуб-Преп» (ООО «Синтол», Россия, РЗН 2017/6634) и «Амплитуб -РВ» (ООО
«Синтол», Россия, ФСР 2010/07635)).
В соответствии с Приказом МЗ РФ № 109 от 21 марта 2003 г. «О совершенствовании
противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации» клиническим материалом для
исследований служит: мокрота и отделяемое верхних дыхательных путей (пробы со слизью),
промывные воды бронхов (ПВБ), бронхо- альвеолярная лаважная жидкость (БАЛЖ), смыв с
ротоглотки, биоптаты, пунктаты, операционный материал, промывные воды желудка, моча,
плевральная жидкость, спинномозговая жидкость, перикардиальная жидкость, синовиальная
жидкость, асцитическая жидкость, раневое отделяемое, отделяемое половых путей,
--- стр. 18 ---
Инструкция по применению
Лист 18
Всего листов 54
менструальная кровь, кровь из вены, кал, секционный материал, парафинизированный
материал.
7.2 Критерии отбора образцов ДНК МБТК , предназначенных для молекулярно -
генетического анализа на определение лекарственной устойчивости с помощью набора
реагентов «Амплитуб-MDR-РВ»
Для проведения анализа и получения достоверных результатов образцы должны
соответствовать следующим требованиям:
• Содержание ДНК МБТК в концентрации 0,25 ГЭ/мкл – 5×10
3 ГЭ/мкл (рабочий
диапазон);
• Отсутствие ингибиторов ПЦР-РВ.
Если на этапе количественной оценки ДНК МБТК в образце, содержащем ДНК МБТК
в концентрации менее 5×103 ГЭ/мкл, выявлено ингибирование ПЦР-РВ (по реакции
внутреннего контроля), то этот образец перед постановкой на определение ЛУ с помощью
набора реагентов необходимо развести деионизованной водой в 2-10 раз в отдельной чистой
пробирке для снятия ингибирования.
Положительные образцы с высокой бактериальной нагрузкой ( более 5×103 ГЭ/мкл),
перед проведением анализа на определение ЛУ с помощью набора реагентов необходимо
развести в 10-100 раз деионизованной водой независимо от наличия/отсутствия
ингибирования. Образцы с концентрацией в диапазоне 5×103-5×104 ГЭ/мкл разводят в 10 раз,
образцы с концентрацией более 5×104 ГЭ/мкл – в 100 раз.
7.3 Условия транспортирования и хранения анализируемых проб (образцов ДНК)
Раствор ДНК может храниться при температуре от плюс 2 до плюс 8°С в течение 5
суток и при температуре не выше минус 16°С в течение года.
Раствор ДНК допускается транспортировать при температуре от плюс 2 до плюс 8°С в
течение 5 суток в термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы.
8 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
ПЦР-РВ проводят в рабочей зоне 3 (МУ 1.3.2569-09).
ВНИМАНИЕ! При работе с ДНК необходимо использовать только одноразовые пластиковые
расходные материалы, имеющие специальную маркировку «DNase-free».
На всех этапах проведения ПЦР -РВ необходимо использовать наконечники с аэрозольным
барьером!
Выявление генных мутаций ДНК М БТК, ассоциированных с устойчивостью к
рифампицину и/или изониазиду, набором «Амплитуб-MDR-РВ» включает 2 этапа:
проведение предварительной ПЦР-РВ;
--- стр. 19 ---
Инструкция по применению
Лист 19
Всего листов 54
определение генных мутаций в определенных кодонах генных локусов rpoB, katG
и inhA МБТК.
8.1 Проведение ПЦР-РВ с помощью комплекта «Multi MDR»
Проведение предварительной ПЦР -РВ с помощью комплекта «Multi MDR» – первый
этап анализа образцов, содержащих МБТК и отобранных по количественному содержанию
клеток МБТК для определени я лекарственной устойчивости к рифампицину и/или
изониазиду. Предварительная амплификация проводится с целью накопления специфических
локусов генов rpoB, katG и inhA МБТК, ассоциированных с устойчивостью к рифампицину
и/или изониазиду.
С целью предотвращения контаминации режим амплификации мультиплексной ПЦР-РВ
специально включает только 20 циклов , когда рост флуоресценции обычно еще не
регистрируется прибором. Поэтому ПКО-multi-MDR является только внешним контролем
работы реагентов. Пробирку с ПКО-multi-MDR после окончания реакции амплификации
утилизируют.
8.1.1 Подготовка и проведение ПЦР-РВ «Multi MDR»
1. Комплект реагентов извлекают из холодильника, ПКО-multi-MDR, ОКО и исследуемые
образцы (при необходимости) размораживают, перемешивают на микроцентрифуге -
встряхивателе и центрифугируют 3-5 секунд для сброса капель.
2. Отбирают необходимое количество микропробирок с реакционной смесью РС Multi-
MDR из расчета ( N+2), где N - количество исследуемых образцов, 2 – контрольные
образцы1 ПКО-multi-MDR и ОКО, устанавливают в штатив и маркируют в соответствии
с протоколом исследования.
ВНИМАНИЕ! Не допускать размораживания и повторного замораживания оставшихся
пробирок со смесью!
3. О ткрывают крышки микропробирок и вносят в них (на стенку пробирки) по 20 мкл ОКО,
исследуемых образцов и, в последнюю очередь, ПКО-multi-MDR, в соответствии с
маркировкой, используя наконечники с аэрозольным барьером, плотно закрывают
крышки.
4. Перемешивают содержимое микропробирок на микроцентрифуге -встряхивателе и
центрифугируют 30 секунд при 3000 об·мин-1.
1 Если ПКО и ОКО не используют в постановке согласно п.8.1.2, то необходимое количество микропробирок
будет равно количеству исследуемых образцов
--- стр. 20 ---
Инструкция по применению
Лист 20
Всего листов 54
ВНИМАНИЕ! После смешивания реакционной смеси и препарата ДНК микропробирки
могут храниться при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С в течение 30 мин. перед установкой
в амплификатор.
5. В ключают прибор, запускают программу в соответствии с инструкцией по эксплуатации
и программируют амплификатор для выполнения соответствующей программы
амплификации и детекции флуоресцентного сигнала согласно таблице 4.
6. Помещают микропробирки в прибор для ПЦР -РВ и «прикатывают» крышки
микропробирок.
ВНИМАНИЕ! В случае неполной загрузки приборов планшетного типа рекомендуется
дополнительно установить пустые пробирки или стрипы (аналогичные используемым) по
краям реакционного модуля амплификатора.
Таблица 4 – Температурно-временной режим амплификации и детекции флуоресцентного
сигнала
№ п/п Температурно-временной режим Количество
циклов
1 95 ºС – 180 секунд (3 минуты) 1
2 95 ºС – 15 секунд
20 3
64 ºС – 50 секунд
Считывание сигнала флуоресценции
по каналам FAM, R6G/HEX/VIC, Cy5
7. Вводят сведения об образцах по всем красителям и активируют прибор в соответствии с
руководством по эксплуатации.
8. Закрывают крышку прибора, запускают реакцию ПЦР-РВ и фиксируют в рабочем
журнале название файла с результатом работы прибора, расчетное время анализа
составляет около 1 часа.
9. По окончании реакции микропробирки с ПКО-multi-MDR и ОКО утилизируют, а
амплификаты исследуемых образцов разводят в 9 раз раствором для разведения образцов
ddH2O (200 мкл раствора на один образец). Содержимое микропробирок кратковременно
перемешивают на вортексе и центрифугируют 30 секунд при 3000 об·мин-1. Разбавленные
амплификаты образцов являются исходными образцами для следующего этапа анализа
при определении мутаций.
8.1.2 Учет и интерпретация результатов ПЦР-РВ «Multi MDR»
Проведение предварительной амплификации и оценку ее результатов проводят с
помощью с помощью приборов для ПЦР -РВ (см. п. 6.3 настоящей инструкции) и
специализированного ПО, поставляемого производителем прибора:
программа АНК_Shell версия 100 и выше, поставляемая с приборами АНК-32М;
Bio-Rad CFX Manager 3.1 и выше, поставляемая с прибором CFX96;
--- стр. 22 ---
Инструкция по применению
Лист 22
Всего листов 54
Если результаты реакции «Multi MDR» по ПКО-multi-MDR и ОКО при первой
постановке после вскрытия комплекта реагентов были достоверными, то в дальнейшем при
использовании вскрытого комплекта допускается постановка реакции «Multi MDR» без ПКО-
multi-MDR и ОКО. Однако, рекомендуется включать ПКО-multi-MDR и ОКО в каждую 3 ÷5
постановку.
В случае получения недостоверного результата «Multi MDR» по ПКО-multi-MDR и
ОКО все результаты исследуемых образцов признаются недостоверными. В этом случае
необходимо повторить этот этап анализа.
8.2 Определение генных мутаций в локусах rpoB, katG и inhA МБТК
8.2.1 Постановка и выбор контролей
Положительные контрольные образцы (ПКО) представляют собой контрольные
стрипы и содержат 8 микропробирок с раскапанными различными реакционными смесями,
предназначенными для выявления мутаций в определенных кодонах генов rpoB, katG и inhA,
ответственных за устойчивость к рифампицину и изониазиду, и содержащими препараты
синтетических молекул ДНК, соответствующих определенным мутациям. ПКО представлены
в 2 -х вариантах контрольных стрипов: ПКО1- MDR и ПКО2 -MDR. В состав контрольного
стрипа ПКО1-MDR входят контроли, определяющие наиболее значимые мутации. Состав
контрольных стрипов ПКО приведен таблице 6.
Таблица 6 – Состав положительных контрольных образцов (ПКО)
№
проб
-ки в
стри
пе
Реакционные
смеси
Рекомендуемые возможные
варианты постановки
контролей
Мутаци
и в
каждой
пробир
ке
Красители
ПКО1-MDR
1 вариант
ПКО2-MDR
2 вариант мутации контрольны
й зонд
1 rpoB450 ПКО-Alm1 Alm1 FAM Cy5 ПКО-Alm2 Alm2 ROX
2 rpoB445
ПКО-Alm3 Alm3 FAM
Cy5 ПКО-Alm4 Alm4 JOE*
Alm5 ROX
3 rpoB445
ПКО-Alm6 Alm6 FAM
Cy5 ПКО-Alm7 Alm7 JOE*
Alm8 ROX
4 rpoB435 ПКО-Alm9 Alm9 ROX Cy5 ПКО-Alm10 Alm10 FAM
5 rpoB452 ПКО-Alm11 ПКО-Alm11 Alm11 FAM Cy5
6 katG315
Alm12 FAM
Cy5 ПКО-Alm13 Alm13 JOE*
ПКО-Alm14 Alm14 ROX
7 inhA(-15) ПКО-Alm15 ПКО-Alm15 Alm15 FAM Cy5
8 inhA(-8) ПКО-Alm16 ПКО-Alm16 Alm16 FAM Cy5
* JOE является спектральным аналогом красителей R6G/HEX/VIC
--- стр. 23 ---
Инструкция по применению
Лист 23
Всего листов 54
В каждую постановку рекомендуется включить как минимум 1 контрольный стрип
ПКО. Для постановки можно выбрать контрольный стрип по 1 варианту ПКО1-MDR или по
2 варианту ПКО2-MDR, включенные в набор (таблица 6).
ПРИМЕЧАНИЕ: Контрольный стрип по 1 варианту более предпочтителен, т.к. содержит
наиболее значимые мутации.
8.2.2 П одготовка и проведение ПЦР -РВ
1. Набор реагентов извлекают из холодильника, отбирают необходимое количество
стрипованных микропробирок с реакционной смесью РС-MDR по числу исследуемых
образцов, полученных после этапа предварительной амплификации «Multi MDR» (1 стрип – 1
образец), и контрольных стрипов (по 1 варианту ПКО1-MDR и/или 2 варианту ПКО2-MDR),
устанавливают в штатив в соответствии с маркировкой 1-ой пробирки и маркируют в
соответствии с протоколом исследования.
ВНИМАНИЕ! Не допускать размораживания и повторного замораживания оставшихся
пробирок со смесью!
ПРИМЕЧАНИЕ: Общее количество пробирок не должно превышать размер реакционного
модуля, используемого амплификатора. Например, максимальная загрузка для 96- луночного
прибора составляет 12 стрипов (11 образцов + 1 ПКО), для 48-луночного прибора – 6 стрипов
(5 образцов + 1 ПКО), для 32-луночного прибора – 4 стрипа (3 образца + 1 ПКО).
2. И сследуемые образцы (разведенные амплификаты) после предварительной реакции
«Multi MDR» перемешивают на микроцентрифуге -встряхивателе и центрифугируют 3- 5
секунд для сброса капель.
3. Вносят образцы в стрипованные микропробирки с реакционной смесью РС-MDR из
расчета 1 стрип – 1 образец. Один исследуемый образец вносится в каждую пробирку стрипа
(на стенку пробирки) по 20 мкл, начиная с 1 -й промаркированной пробирки , используя
наконечники с аэрозольным барьером.
4. Вносят в микропробирки контрольного стрипа (по 1 варианту ПКО1-MDR и/или 2
варианту ПКО2-MDR) (на стенку каждой пробирки) по 20 мкл раствора для разведения
образцов ddH
2O, используя наконечники с аэрозольным барьером.
5. Содержимое стрипованных микропробирок кратковременно перемешивают на
микроцентрифуге-встряхивателе и центрифугируют 30 секунд при 3000 об ·мин
-1 на
микроцентрифуге с использованием ротора для стрипованных микропробирок объемом
0,2 мл.
--- стр. 24 ---
Инструкция по применению
Лист 24
Всего листов 54
ВНИМАНИЕ! После смешивания реакционной смеси и препарата ДНК микропробирки
могут храниться при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С в течение 30 мин. перед установкой
в амплификатор.
6. В ключают прибор, запускают программу в соответствии с инструкцией по
эксплуатации и программируют амплификатор для выполнения соответствующей программы
амплификации и детекции флуоресцентного сигнала согласно таблице 7.
7. Помещают микропробирки в прибор для ПЦР -РВ в соответствии с рекомендуемым
порядком установки в прибор (рис. 1) и «прикатывают» крышки микропробирок.
ВНИМАНИЕ! В случае неполной загрузки приборов планшетного типа рекомендуется
дополнительно установить пустые пробирки или стрипы (аналогичные используемым) по
краям реакционного модуля амплификатора.
Таблица 7 – Температурно-временной режим амплификации и детекции флуоресцентного
сигнала
№ п/п Температурно-временной режим Количество
циклов
CFX96, CFX Opus 96 Dx, QS5, Fluorite
1 95 ºС – 180 секунд (3 минуты) 1
2 95 ºС – 15 секунд
40
3 62 ºС – 40 секунд
4
58 ºС – 40 секунд
Считывание сигнала флуоресценции
по каналам FAM, R6G/HEX/VIC, ROX, Cy5
DT
1 94 ºС – 300 секунд (5 минут) 1
2 94 ºС – 15 секунд
40
3 62 ºС – 40 секунд
4
58 ºС – 40 секунд
Считывание сигнала флуоресценции
по каналам FAM, R6G/HEX/VIC, ROX, Cy5
АНК
1 95 ºС – 300 секунд (5 минут) 1
2 95 ºС – 15 секунд
40
3 62 ºС – 30 секунд
4
58 ºС – 30 секунд
Считывание сигнала флуоресценции
по каналам FAM, R6G/HEX/VIC, ROX, Cy5
--- стр. 51 ---
Инструкция по применению
Лист 51
Всего листов 54
№ Возможная ошибка Действие
MDR, и стрипы для исследуемых
образцов с РС-MDR.
3 Для исследуемого образца значение
порогового цикла по каналу Cy5
отсутствует или превышает 30 в какой -
либо пробирке (пробирках) стрипа ( Ct
C
y5≥30,0).
Недостоверный (ложноотрицательный)
результат, ингибирование ПЦР -РВ.
Необходимо проверить образец на
соответствие критериям отбора образцов
для проведения анализа, указанных в п.
7.1 – концентрацию ДНК МБТК в
исходном образце и возможное наличие
ингибиторов. Если образец ДНК
соответствует критериям анализируемой
пробы для данного набора, то необходимо
повторить весь анализ, начиная с этапа
проведения предварительной ПЦР -РВ с
помощью комплекта реагентов «Multi
MDR».
5 Для исследуемого образца в результате
предварительной амплификации с
помощью ком плекта «
Multi MDR»
наблюдается рост сигнала флуоресценции
по любому из каналов ( значение
порогового цикла менее 20).
Риск контаминации, количество ДНК
превышает рабочий диапазон . При
определении мутаций возможно
получение невалидного результата –
некорректное отображение кривых
флуоресценции в ПО прибора.
9
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1 Условия хранения
В соответствии с ТУ 20.59.52-015-97313483-2025 – в условиях естественной влажности
и защищенном от света месте при температуре от минус 24°С до минус 16°С. Суммарный срок
хранения при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С не должен превышать 5 суток в течение
срока годности набора реагентов.
9.2 Условия транспортирования
Транспортирование набора «Амплитуб-MDR-РВ» должно производиться крытым
транспортом (автомобильным, железнодорожным, воздушным) при температуре от минус
24°С до минус 16°С с соблюдением требований «холодовой цепи» в термоконтейнерах
одноразового пользования, содержащих хладоэлементы, или в термоконтейнерах
многократного применения с автоматически поддерживаемой температурой. Допускается
транспортирование набора при температуре до плюс 8 °С не более 5 суток в
термоконтейнерах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых транспортных средств.
9.3 Условия эксплуатации и указания по применению
Набор должен применяться в соответствии с действующей версией инструкции по
применению.
--- стр. 52 ---
Инструкция по применению
Лист 52
Всего листов 54
Набор предназначен для одноразового применения для проведения ПЦР -исследования
указанного количества проб (см. п. 2.1).
Набор реагентов готов к применению согласно данной инструкции.
Исследование образцов с использованием набора должно проводиться при температуре
от плюс 20 °С до плюс 28 °С и относительной влажности воздуха от 15 % до 75 %.
9.4 Срок годности
Срок годности набора составляет 12 месяцев с даты выпуска предприятием -
изготовителем при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения.
Серии наборов реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежат.
Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов.
10 ИНФОРМАЦИЯ ПО БЕЗОПАСНОЙ УТИЛИЗАЦИИ
Компоненты набора реагентов «Амплитуб-MDR-РВ» (неиспользованные, пришедшие в
негодность в связи с истечением срока годности и/или несоблюдением регламентированного
режима хранения, транспортирования и применения), внешнюю упаковку комплекта,
эксплуатационную документацию необходимо утилизировать в соответствии с требованиями
СанПиН 2.1.3684-21 к утилизации медицинских отходов класса Г.
Использованные компоненты набора реагентов «Амплитуб-MDR-РВ» необходимо
утилизировать в соответствии с требованиями СанПин 2.1.3684-21 к утилизации медицинских
отходов класса Б.
ВНИМАНИЕ! При удалении пробирок, содержащих продукты амплификации, недопустимо
открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, так как это может привести к
контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудования и реагентов.
11 ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие характеристик набора требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение установленного срока
годности при соблюдении условий его транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора направлять производителю ООО «НПФ Синтол» по
адресу: 125499, г. Москва, Кронштадтский бульвар, д. 39, корп. 1, тел. (495) 984-69-93, факс.
(499) 977-74-55, e-mail: syntol@syntol.ru.
При выявлении неблагоприятных событий (инцидентов), возникших в ходе работы с
набором и не указанных в данной инструкции, рекомендуется направить сообщение
производителю ООО «НПФ Синтол» по адресу, указанному выше, а также в уполномоченную
--- стр. 53 ---
Инструкция по применению
Лист 53
Всего листов 54
государственную регулирующую организацию в соответствии с действующим
законодательством.
12 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ МАРКИРОВКЕ НАБОРА
Символ Значение
М едицинское изделие для диагностики in vitro
Дата изготовления
К од партии
Н омер по каталогу
Использовать до
Содержимого достаточно для проведения <n> тестов
Изготовитель
Обратитесь к инструкции по применению или к инструкции по
применению в электронном виде
Температурный диапазон
Не допускать воздействия солнечного света
Беречь от влаги
Хрупкое. Осторожно
Наименование флуорофоров (FAM, R6G/HEX/VIC, ROX, Cy5)
используемых для детекции в изделии.
13 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ
ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы
реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям
и поддерживающей документации
ГОСТ Р ИСО 15223-1-2023 Изделия медицинские. Символы, применяемые для передачи
информации, предоставляемой изготовителем. Часть 1. Основные требования
ГОСТ Р ИСО 18113-1-2024 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация,
предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины, определения и общие
требования
ГОСТ Р ИСО 18113-2-2024 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация,
предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики in vitro для
профессионального применения
ГОСТ ISO 14971- 2021 Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к
медицинским изделиям
--- стр. 54 ---
Инструкция по применению
Лист 54
Всего листов 54
ГОСТ Р 51352- 2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы
испытаний
ГОСТ Р ИСО 23640- 2015 Изделия медицинские для диагностики in vitro . Оценка
стабильности реагентов для диагностики in vitro
ГОСТ Р ЕН 13612- 2010 Оценка функциональных характеристик медицинских изделий
для диагностики in vitro
--- стр. 55 ---
�
Пронумеровано, прошито и
скреплено 11сч�rr'ью .j-,,// J1исп1(-ов)
тор
узубов
' ,.