Реагенты диагностические in vitro для дифференциации микроорганизмов (см. Приложение на 12 листах) — инструкция и характеристики

РУ: ФСЗ 2008/01440 от 07.04.2008 · класс риска 1

Производитель: "ХайМедия Лабораториз Пвт. Лтд.", Индия

Вид изделия: Реагент для микробиологического теста на способность восстанавливать нитраты ИВД · Цитратный раствор для окрашивания/определения ИВД · Стандартный образец для калибровки/контроля лабораторных оптических приборов ИВД, одноразового использования

В госконтрактах 44-ФЗ: 38 контрактов, медианная цена за единицу 3 380 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

Дифференциальные диски с факторами X / V / X + V DD020 / DD021 / DD022
Используются для предварительной
идентификации представителей рода Haemophilus по
потребности в факторах роста (X, V или X+V).
Принцип и оценка результата:
Расположенные во флакончиках стерильные
бумажные диски пропитаны факторами роста,
используемыми для предварительной идентификации
представителей рода Haemophilus. По потребности в
факторах X и/или V при росте на основной среде можно
идентифицировать виды гемофильных бактерий и
бордетелл.
Стерильные бумажные диски диаметром 6 мм
пропитаны факторами X (гемином) и/или V
(никотинамидадениндинуклеотид, НАД).
Микроорганизмы с потребностью только в гемине (фактор
X) растут вблизи дисков с факторами X или X+V, с
потребностью только в НАД вокруг дисков с факторами V
или X+V. При потребности в обоих факторах рост
отмечается только возле диска X+V. Таким образом, на
основной питательной среде вокруг дисков с
соответствующим факгором (ами) роста наблюдается
сателлитный рост испытуемого микроорганизма.
Штаммы микроорганизмов Рост в условиях
Указания по применению: (АТСС)
Без С С С
фаючро фактором фактором факгорами
Засейте культуру испытуемого микроорганизма в роста X V X+V
газоном на поверхность основы кровяного агара (М073)
или сердечно-мозгового агара (М211) в чашке Петри.
Haemophilus
Асептически наложите на засеянную поверхность агара
influenzae (35056)
диски с факгорами X (DD020), V (DD021) и X+V (DD022),
расположив их в точках, соответствующих 12, 4 и 8 часам
Haemophilus
циферблата. Инкубируйте чашки при 35-37°С в течение parainfluenzae (7901)
24-48 ч. Проверьте наличие микробного роста вблизи
каждого диска.
Haemophihis ducreyi - + - +
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через Примечание: +=положительный результат (сателлитный рост вокруг
24-48 ч при 35-37еС на основе кровяного агара (М073) или диска);
сердечно-мозговом агаре (М211). -=отсутствие роста;
Внимание!
У" Для контроля питательной среды и дисков
рекомендуется использовать известные штаммы
Haemophilus influenzae.
У Не рекомендуется использовать для посева густые
суспензии микроорганизмов, поскольку вместе с
ними на поверхность агара могут быть внесены
факторы роста (в том числе X или V) со среды
предыдущего культивирования.
Диски с оптохином DD009
Используются для идентификации и Образцы мокроты, трахео-бронхиального аспирата,
дифференциации Streptococcus pneumoniae и «зеленящих» плевральной жидкости, ликвора, мочи или крови
стрептококков. предварительно подвергают микроскопическому
Принцип и оценка результата: исследованию (готовят мазки, окрашенные по Граму),
делают посевы на соответствующие питательные среды
Оптохиновые диски представляют собой диски для выделения чистых культур, которые затем
из фильтровальной бумаги, пропитанные оптохином. Тест испытывают в оптохиновом тесте.
основан на способности «зеленящих» стрептококков, в «Зеленящие» (а-гемолитические) стрептококки
отличие от Streptococcus pneumoniae, расти на трудно отличить от пневмококков по росту на чашках с
питательных средах в присутствии оптохина. кровяным агаром, так как пневмококки тоже дают зоны
Данный тест используют при диагностике частичного просветления агара, окрашенные в зеленый
пневмококковых инфекций. ц в е т
(а-гемолиз). Оптохин подавляет рост пневмококков, тогда агара на одной из половин чашки Петри. На другой
как рост других стрептококков не подавляется или половине засейте тем же образом известную культуру
образуется очень небольшая зона задержки роста. Bowers пневмококка (для положительного контроля). Сразу после
и Jeffries установили наличие корреляции между посева наложите по одному оптохиновому диску в центры
способностью клеток растворяться в присутствии желчи и засеянных половгш агара и инкубируйте чашку при 35-
полной чувствительностью к оптохину, что позволяет 37°С. После инкубирования среды проверьте наличие
дифференцировать Streptococcus рпеитотае от других вокруг дисков зон задержки роста.
стрептококков (2).
Культуральные свойства: (Cultural response)
Ввиду вышесказанного оптохиновый тест имеет
диагностическое значение при идентификации и Ростовые характеристики референс-штаммов
дифференциации Streptococcus рпеитотае и «зеленяших» через 18-24 ч при 35-37еС на триптон-соевом агаре с
стрептококков. добавлением крови (М290) в присутствии диска с
оптохином:
Указания по применению:
Приготовьте триптон-соевый агар (М290) с
добавлением крови или кровяной агар из агаровой основы Ш13ММЫ микроорганизмов (АТСС) Диаметр зонызалержки роста (мм)
(М073). Засейте чистую культуру испытуемого Streptococcus pneumoniae (6303) 15
микроорганизма газоном на поверхность приготовленного
Streptococcus pyogenes (19615) 13
Диски с бацитрацином DD015
Используются для идентификации и Streptococcus milleri от энтерококков и Streptococcus mitis
дифференциации стрептококков группы А (главным (4).
образом, Streptococcus pyogenes) и других
Указания по применению:
Р-гемолитических стрептококков.
Приготовьте кровяной агар из основы триптозного
Принцип и оценка результата :
кровяного агара (М097). Засейте чистую культуру
Бащ1трациновые диски представляют собой диски испытуемого микроорганизма газоном на поверхность
из фильтровальной бумаги, пропитанные 0,04 ЕД приготовленного агара. Сразу после посева асептически
антибиотика бацитрацина. Тест основан на способности наложите на поверхность агара диски с бацитрацином и
указанного количества бацитрацина подавлять рост (3- слегка прижмите их. Переверните чашку с засеянным
агаром и инкубируйте ее при 35 - 37°С в атмосфере 10%
гемолитических стрептококков группы А на кровяном
СО^ до появления роста (18-24 ч). После инкубирования
агаре. Диск с бацитрацином (0,04 ЕД) подавляет рост
стрептококков и микрококков, но не стафилококков: все среды проверьте наличие вокруг дисков зон задержки
коагулазо-отрицательные стафилококки устойчивы к роста.
бацитрацину (7). Бацитрациновые диски позволяют
существенно экономить время, трудозатраты и материалы Результаты:
в том случае, если скрининговое исследование с дисками
Наличие зоны торможения роста исследуемой
проводится перед серотипированием. Как показано
культуры стрептококка предположительно указывает на ее
Maxted, стрептококки группы А более чувстветельны к
принадлежность к группе А. Для дальнейшего
бацитрацину, чем Р-гемолитические стрептококки других подтверждения следует использовать серологические
групп (3). В связи с этим он пред}южил использовать методы.
бацитрацин для быстрого выявления стрептококков
Культуральные свойства:
х-руппы А.
Levinson и Frank (4), использовавшие бумажные диски с Ростовые характеристики референс-штаммов
бацитрацином, показали, что многие чувствительные к через 18-24 ч при 35-37еС на триптозном кровяном агаре
нему р-гемолитические стрептококки относятся к группе (М097) в присутствии диска с бацитрацином.
А. Проведенное Streamer и соавт. (5) исследование по
сравнению результатов, полученных с помощью
бацитрациновых дисков, методом флюоресцирующих
Штамм микроорганизмов (АТСС) Диаметр зонызалержки роста (мм)
антител и в реакции преципитации по Лэнсфилду,
показало, что методика дисков наиболее приемлема в Streptococcus pyogenes (19615) 15
рутинных лабораторных исследованиях. Тесты на
чувствительность к бацитрацину, фурацину и оптохину
полезны для дифференциации Aerococcus viridans и
UiMCrniA
DD008
Диски с ОНФГ (ONPG)
Используются для быстрого определения
р-галактозидазной активности микроорганизмов, что
особенно важно при идентификации видов, медленно
ферментирующих лактозу.
Принцип и оценка результата:
ОНФГ-диски представляют собой диски
из фильтровальной бумаги, пропитанные специальным
реактивом орто-нитрофенил -(3-D галактопиранозидом
(ONPG). Для утилизации лактозы микроорганизмы
используют 2 фермента. Первый пермеаза необходим для
переноса молекул лактозы в клетку. Второй Р-
галактозидаза обеспечивает гидролиз поступившей
молекулы с образованием глюкозы и галактозы. У
истинных лактозоотрицательиых микроорганизмов (не
Инкубируйте пробирку с испытуемой суспензией при 35-
ферментирующие лактозу) оба фермента отсутствуют. В
37°С. Для выявления лактозоположительных
то же время встречаются микробные виды, у которых
микроорганизмов (быстро ферментирующих лактозу)
отсутствует только пермеаза, а (3-галактозидаза имеется
результат учитывают ежечасно в течение 6 часов. Для
это т. н. поздно ферментирующие виды.ОНФГ является
выявления медленно ферментирующих лактозу
бесцветным веществом синтетического происхождения
микроорганизмов пробирки с отрицательным результатом
(галактопиранозид), которое имеет структурное сходство с
продолжают инкубировать до конца 24-часового периода.
лактозой (12). Фермент Р-галактозидаза расщепляет
Культуральные свойства:
ОНФГ с образованием глюкозы и орто-нитрофенила
вещества, имеющего желтый цвет. Результаты теста с дисками ОНФГ и суспензиями
Тест с ОНФГ особенно полезен для выявления референс-штаммов в физиологическом растворе через 4 ч
поздно ферментирующих лактозу микроорганизмов, при35еС:
которые обычно не определяются в общепринятых тестах
ферментации лактозы. Ввиду того, что отнощение к
лактозе широко используется для характеристики
энтсробактерий, для их дифференциации применяют
также тест с ОНФГ. Штаммы микроорганизмов (АТСС) Реакция
Указания по применению : Citivbacter fi-eundii (8090) +
Enterobacter aerogenes (13048) +
Внесите один ОНФГ-диск в стерильную пробирку для
Escherichia coli (25922)
тестирования. Добавьте 0,1 мл стерильного
Proteus vulgaris (6380)
физиологического раствора хлорида натрия (0,85%,
вес/об). Стерильной петлей снимите колонию (рост) Salmonella серовар Arizonae (13314)
испытуемого микроорганизма и эмульгируйте клетки в Salmonella серовар Typhimurium (14028)
пробирке с диском ОНФГ в физиологическим растворе. Примечание : + = положительный ре1ультат (желтый цвет
— = отрицательный результат (бесцветная суспензия и диск).
^ о г
Continuous, Automatic
Ambient Air Purifier
Indispensable for
Hospital Rooms / Wards / ICUs
j Surgical Theatres
j Nursing Homes
j Consulting Rooms
Rest Rooms
^ BioTechnology Labs
Microbiology Labs
Office Cabins
W aiting Rooms
Flight Kitchens
Hotel Rooms
Оксидазные диски
DD018
Используются для дифференциации
представителей родов Neisseria, Alcaligenes, Aeromonas,
Vibrio, Campylobacter и Pseudomonas (обладают
оксидазной активностью) от энтеробактерий
(оксидазоотрицательные).
Принцип и оценка результата :
Во флакончиках находятся стерильные диски из
фильтровальной бумаги, пропитанные оксалатом N,N-
диметил-р-парафенилендиамина, аскорбиновой кислотой
и а-нафтолом. С использованием таких дисков отпадает
необходимость в ежедневном приготовлении свежего
реактива на оксидазу. Для осуществления дыхания
(биологического окисления с целью получения энергии) у
некоторых бактерий имеется цитохромоксидаза, либо
индофенолоксидаза железосодержащий белок,
гемопротеин, который катализирует перенос электронов от
вещества-донора (например, НАД-Н) к веществам-
реципиентам (обычно О^). Бесцветный К,К-диметил-
парафенилендиамин служит искусственным реципиентом а-нафтола образуется синий индофенол.
электронов. В ходе оксидазного теста из него в результате
Указания по применению ;
окислительно-восстановительных реакций с участием
микробной оксидазы образуется индофенол вещество Оксидазный тест проводят путем снятия микробной
синего цвета. Оксидазный тест полезен для первичной колонии и растирания ее по оксидазному диску. Учет
характеристики аэробных храмотрицательных бактерий из реакции ведут в течение 5-10 секунд при 25-30®С.
родов Aeromonas, Plesiomonas, Pseudomonas, Замедленные полож1ггельные реакции появляются через
Campylobacter и Pasteurella. 10-60 секунд. Отсутствие изменения цвета на диске или
Gordon и McLeod (1), используя способность развитие окраски через 60 и более секунд расценивают, как
некоторых бактерий в ходе окислительно­ отрицательную реакцию.
восстановительных реакций образовывать индофенол из Культуральные свойства :
димстилпарафснилсндиамщ1а и а-нафтола, предложили
Реакции референс-щтаммов в течение 5-10 секунд
применять оксидазный тест для идентификации
при25-30еС.
гонококков. Gaby и Hadley (2) предложшш использовать
более чувств1ггельный метод с использованием оксалата
Н , Н - д и м е т и л
Штаммы микриорганнзмов (АТСС) Реакция Цвет
р-парафенилендиамина (при этом все стафилококки (результат)
стабильно давали отрицательный результат). В случае Pseudomonas aeruginosa (27853) Темно-лиловый,
положительной реакции (наличие цитохромоксидазы) из синий
оксалата N,N-димeтил-пapaфeнилeндиaминa и Staphylococais aureus (25923)
Neisseria gonorrhoeae (19424) + Темно-лиловый,
синий
Escherichia coli (25922)
Внимание! (Note)
©Bo избежание ложноположительных реакций не применяйте стальную
иди нихромовую проволоку для оксидазного теста, т. к. возможно
поверхностное окисление этих металлов.
ф Для оксидазного теста не подходят культуры, выращенные на средах и
lO ildas^ индикаторами (например, на срсде Эндо, МакКонки и др.)-
.....
©Для учета результатов важно соблюдение временного интервала (5-10
сек).
©Оксидазный тест, ввиду его важности для идентификации, надо
проводить со всеми фамотрицательными бактериями.
©Выработка цитохромоксидазы может подаатяться на средах, где идет
ферментация углеводов (например, на агаре МакКонки), поэто.му
возможны ложноотрииательные результаты теста с культурами
родов Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas.
UlM iCniA
m m
DD024
Диски с эскулином и желчью
Используются для определения гидролиза
эскулина в присутствии желчи, что имеет значение для
дифференциации энтерококков от с фептококков.
Принцип и оценка результата :
Реагент представляет собой стерильные диски из
фильтровальной бумаги, пропитанные эскулином и
желчью. Rochaix (14) предложил учитывать способность к
гидролизу эскулина, как важный критерий в
идентификации энтерококков. Meyer и Schonfeld (15)
отметили, что при добавлении в среду желчи около 60%
энтерококков растут и расщепляют эскулин, в от;и1чие от
стрептококков. В сравнительном исследовании Facklam и
Moody (18) обнаружено, что желче-эскулиновый тест
позволяет идентифицировать стрептококки группы D Культуральные свойства :
(энтерококки) и дифференцировать их от стрептококков
Результаты теста референс-щтаммов с дисками
других групп. Энтерококки гидролизуют эскулин до
через 18-24 ч при 35-37еС:
глюкозы и эскулетина, который реагирует с цитратом
железа, входящим в состав среды, в результате чего
образуется коричнево-черный преципитат. При
отрицательной реакции цвет среды не меняется (17). Штаммы микроорганизмов (ЛТСС) Гидролиз эскулина
Указания по применению: Stfeptococciis faecalis (29212) +
Нанесите один диск с эскулином и желчью на Streptococcus pyogenes (19615) -
поверхность засеянной основы желче-эскулинового агара
Listeria monocytogenes (19118) +
(М430) и инкубируйте чащку при 35-37°С в течение 18-24
часов. Примечание-. + = положительный результат (почернение среды вокруг
диска);
- =отрицательный результат (цвет среды не изменяется).
Полоски с реактивом Ковача (на индол) DD019
Используются для обнаружения
микроорганизмов, продуцирующих индол.
Принцип и оценка результата:
Реагент представляет собой полоски из
фильтровальной бумаги, пропитанные реактивом Ковача.
Реактив Ковача готовят путем растворения 10 г пара-
диметил-аминобензальдегида в 150 мл изоамилового
спирта с последующим медленным добавлением 50 мл
концентрированной соляной кислоты. Участвующий в
процессе гидролитического расщепления триптофана
комплекс ферментов условно называют триптофаназой
(17). При ферментации микроорганизмами триптофана
образуется индол. Последний при взаимодействии с
бензальдегидом образует окрашенные в красный цвет
соединения «розиндолы». 1. Control
Для приготовления пептонной воды, содержащей 2. Escherichia coli
больщое количество триптофана, используют
пептический перевар животной ткани (пептон). Для Результаты теста на индол у референс-щтаммов на
определения продукции индола представителями пептонной воде (М028) через 18-24 ч при 35-37еС:
колиформных бактерий в качестве альтернативы
применяют триптонную воду (18).
Указания по применению :
Штаммы микроорганизмов (АТСС) Рост Индол
Для определения индола испытуемые Escherichia coli (25922) Обильный +
микроорганизмы засевают в пробирку с пептонной водой
(М028), а полоску с реактивом Ковача прижимают пробкой Enterobacter aerogenes Обильный
к внутренней стенке пробирке и инкубируют посев при 35-
Примечание: + = положительный результат (появление розового
37°С в течение 18-24 часов. окрашивания в нижней части полоски);
Культуральные свойства : - = отрицательный результат (цвет полоски не
изменяется).
Биотест для контроля тепловой стерилизации
DD032
(Bacillusstearothermophilus АГСС 7953)
избыточным давлением стерильного воздуха при строгом
Используются для контроля эффективности процесса соблюдении правил асептики.
стерилизации водяным паром. Данные индикаторы
Стерильными ножницами в условиях асептики
готовятся в соответствии с правилами GMP по рецептуре
отрезают конец упаковки, затем стерильным пинцетом
MIL-S-36586, одобренной американскими специалистами
достают индикаторную полоску и помещают ее в пробирку
FDA.
со стерильной Триптон-соевый бульон с дрожжевым
Принцип и оценка результата : экстрактом и гемином (М207) или Триптон-соевом
бульоном (МОП), которые инкубируют при 55-60®С в
По лоски п р е д с т а в л я ю т собой
течение 7 дней с ежедневным учетом результатов.
хромато1'рафическую бумагу, пропитанную спорами
Помутнение среды свидетельствует о неэффективности
Bacillus stearothermophilus. Каждая полоска имеет
проведенной стерилизации.
индивидуальную упаковку и содержит около 1 миллиона
Культуральные свойства ;
микроорганизмов. Bacillus stearothermophilus это
термофильные бактерии, растущие при температурах 65°С Результаты теста через 7 дней после
и выше. Их споры высоко устойчивы к тепловому инкубирования в Триптон-соевом бульоне (МОИ),
воздействию, поэтому их применяют для контроля при55°С:
стерилизации водяным паром (19).
Указания по применению :
Разложите биотесты среди стерилизуемого
материала в местах, трудно доступных для пара, а также в
геометрическом центре, верхней и нижней, фронтальной и Необработанный бнотест Обильный рост
задней плоскостях загруженного материала, подлежащего
Автоклавнрованный бнотест Рост отсутствует
стерилизации. Проведите стерилизацию в соответствии с
установленным режимом. По окончании цикла
стерилизации биотесты с соблюдением правил асептики Примечания: а) перед утилизацией биотесты или бульонные культуры
надо достать из стерилизатора и направить для Bacillus stearothennophilus необходимо автоклавировать
при 121 °С в течение 30 минут ипи батее;
исследования в лабораторию.
б) каждая полоска со спорами имеет индивидуальную
Все тесты на стерильность проводятся в чистой, упаковку, пропускающую пар.
свободной от пыли зоне, предпочтительно под небольшим
Биотест для контроля «холодной» стерилизации DD039
{Bacilluspumilus АТСС 27142) Проведите стерилизацию в соответствии с установленным
Используются для контроля эффективности режимом. По окончании цикла стерилизации биотесты с
процесса стерилизации ионизирующим излучением. соблюдением правил асептики надо достать из рабочей
Данные индикаторы готовятся в соответствии с правршами камеры и направить для исследования в лабораторию.
GMP по рецептуре MIL-S-36586, одобренной Все тесты на стерильность проводятся в чистой,
американскими специалистами FD А. свободной от пыли зоне, предпочтительно под небольшим
избыточным давлением стерильного воздуха при строгом
Принцип н оценка результата :
соблюдении правил асептики.
По лоски п р е д с т а в л я ю т собой Стерильными ножницами в условиях асептики
хроматографическую бумагу, пропитанную спорами отрезают конец упаковки, затем стерильным пинцетом
Bacillus pumilus (АТСС 27142). Каждая полоска имеет достают индикаторную полоску и помещают ее в
индивидуальную упаковку и содержит около 1 миллиона пробирку со стерильной Триптон-соевый бульон с
микроорганизмов. Bacillus pumilus это бактерии, высоко дрожжевым экстрактом и гемином (М207) или Триптон-
устойчивые к действию радиащш, поэтому их применяют соевый бульон (МОП), которые инкубируют при 35-37°С в
для контроля стерилизации ионизирующим излучением течение 7 дней с ежедневным учетом результатов.
(19). Помутнение среды свидетельствует о неэффективности
проведенной «холодной» стерилизации.
Указания по применению :
Культуральные свойства :
Разложите биотесты среди стерилизуемого
материала в местах, предположительно трудно доступных Результаты теста через 7 дней после
для действия радиации, а также в геометрическом центре, инкубирования Триптон-соевый бульон (МОП) при
верхней и нижней, фронтальной и задней плоскостях
загруженного материала, подлежащего стерилизации.
и гМ с г гм л
Примечание, перед утилизацией биотесты или бульонные культуры
35-37еС:
Bacillus pumilus необходимо автоклавировать при 12 ГС в
течение 30 минут или более.
Необработанный биотест Обильный рост
Облученный биотест Рост отсутствует
Диски с гиппуратом натрия DD035
Используются для определения гидролиза надосадочной жидкости, перенесенной в другую
гиппурата натрия микроорганизмами, главным образом, пробирку, добавляют 2 мл раствора хлорида железа. После
стрептококками. тщательного встряхивания через 10 минут наблюдают
формирование в прозрачной жидкости коричневого
Принцип и оценка результа! а :
преципитата.
Стрептококки группы В {Streptococcus agalactiae)
и некоторые энтерококки могут гидролизовать гиппурат
Приготовление раствора хлорида железа :
натрия с образованием глицина и бензоата натрия. Глицин
дезаминируется окислителем нингидрином, который при Ингредиенты г/100 мл
этом восстанавливается, приобретая лиловую окраску.
Железа хлорид 12,0г
Среда для данного теста должна содержать только
гиппурат, поскольку нингидрин реагирует с любой Дистиллированная вода 94,6мл
свободной аминокислотой (7, 20). Таким образом,
Соляная к-та (конц.) 5,4 мл
стрептококки группы В можно опшчить от с'грептококков
ipynn А, С, F и G, которые не гидролизуют гиппурат.
Некоторые стрептококки группы D и единичные
«зеленящие» стрептококки тоже гидро]П1зуют гиппурат.
Как впервые показали Ayers и Rupp (21), по способности
Ход приготовления: (Procedure)
гидролизовать гиппурат натрия можно дифференцировать
гемолитические стрептококки человеческого и коровьего добавить примерно 75 мл дистиллированной воды
происхождения. Facklam и соавт. модифицировали в мерную колбу на 100 мл, затем, не касаясь стенок колбы,
методику для предварительной идентификации добавить 5,4 мл соляной 1шслоты. Добавить 12 г х;юрида
стрептококков групп А, В и D (18). Тест на гидролиз железа, растворить его, осторожно подогревая колбу и
гиппурата является одним из способов отличить тщательно перемешивая ее содержимое. Довести объем до
(З-гемолитические стрептококки группы В коровьего 100 мл дистиллированной водой. Готовый раствор имеет
происхождения от (3-гемолитических стрептококков оранжевую окраску.
группы В, обычно выделяемых от человека (18). Культуральные свойства ;
Определение ферментативного гидролиза гиппурата с
Результаты теста на гидролиз гиппурата натрия у
образованием бензойной кислоты также помогает
референс-штаммов
дифференцировать Р-гемолитические стрептококки
группы В от Р-гемолитических стрептококков группы А и
Штаммы микроорганизмов (АТСС) Рост
стрептококков ipymibi D, не относимых к энтерококкам
Гидролиз гиппурата
(19).
Enterococcusfaecalis {292\2) Обильный -
Указания по применению :
Streptococcus agalactiae (4768) Обильный +
Для определения гидролиза гиппурата натрия
соответствующий диск помещают в Сердечно-мозговой
Примечание'. + = положительный результат (появление
б у л ь о н ( М 2 1 0 ) , з а с е я н н ы й
кори чневого преципитата через 10 мин после
Р-гемолитическими стрептококками, который затем встряхи вания смеси);
инкубируют при 35-37°С в течение 48 ч. После - = отрицательный результат (преципитат, если и
инкубирования культуру центрифугируют и к 2 мл образуется, то при вС7ряхивании
он растворяется).
7
Полоски с ацетатом свинца
DD034
Используются для определения сероводорода, полоски. Ацетат свинца является самым чувствительным
продуцируемого микроорганизмами. реактивом на сероводород, поэтому такой индикатор
Принцип и оценка результата: используют для тестирования микроорганизмов,
выделяющих микроколичества сероводорода.
Реактив представляет собой полоски
Указания по применению:
фильтровальной бумаги, пропитанные ацетатом свинца.
Некоторые микроорганизмы способны ферментативным Для определения сероводорода испытуемые
путем освобождать серу из серосодержащих соединений микроорганизмы засевают в пробирку с иептонной водой
аминокислот или неорганических веществ. (М028), полоску с ацетатом свинца прижимают пробкой к
Образующийся при этом сероводород вступает в реакцию внутренней стенке пробирки и инкубируют посев при 35-
с ацетатом свинца с образованием сульфида свинца и, 37®С в течение 18-24 часов.
соответственно, наблюдается почернение индикаторной
Культуральные свойства:
Результаты теста на сероводород у референс-
штаммов на Пептонной воде (М028) через 18-24 ч при 35-
37еС:
Штаммы микроорганизмов (АТСС) Рост Сероводород
Escherichia соИ (25922) Обильный
Salmonella серовар Typhimurium (14028) Обильный
Salmonella серовар Enteriridis (13076) Обильный -
Примечание: + = положительный результат (почернение нижней части
полоски);
-=отрииательный результат (цвет патоски не изменяется).
1. Control
2. Salmonella серовар Typhimurium
Е N I S
UlMCrPklA
8
можно определить с помощью специальных реактивов а- Культу ральные свойства :
нафтиламина (R009) и сульфаниловой кислоты (R015).
Реакции референс-штаммов:
Указания по применению :
Ш гаммы микроорганизмов (АТСС) Рост Восс1анов.1енис нитрата
Асептически внести нитратный диск в 5 мл Acinetobacter calcoaceticiis (19606) Хороший
пептонной воды (М028), засеянной испытуемыми
Entembacter aerogenes (13048) Хороший +
микроорганизмами, и инкубировать пробирку при
35-37°С в течение 18-24 часов. Внести в пробирку после Escherichia coli (25922) Хороший +
инкубирования по несколько капель каждого (R009 и КО 15) Salmonella серовар Typhimurium (14028) Хороший
реактива. Развитие красного или розового окрашивания
свидетельствует о присутствии нитрита и, следовательно,
восстановлении нитрата.
В качестве отрицательного контроля желательно
использовать пробирку с незасеянной средой. Если после
добавления реактивов окрашивание не развивается, в ту же
Пр1смечание\ + = положительный результат (появление красного
пробирку вносят небольшое количество цинкового
или розового окрашивания среды);
порошка, который химичесю1м путем восстанавливает - = отрицательный результат (цвет среды не
имеющийся в среде нитрат до нитрита, что способствует изменяется).
появлению розово-красного окрашивания (17).
Диски с реактивом на нитриты DD042
Используются в качестве индикатора для
определения нитратредуктазной активности
микроорганизмов.
Принцип и оценка результата :
Восстановление нитратов (NOj) до нитртггов
(NOJ и газообразного азота (N,) обычно происходит в
анаэробных условиях, когда осуществляется т. н.
нтгратное дыхание перенос электронов от окисляемого
субстрата на нитраты (22). Большинство факультативных
анаэробов в бескислородной среде для получения энергии
пользуются нитратным или другими типами дыхания, при
которых акцептором электронов является не кислород, а
неорганические вещества (23). Конечные продукты
восстановления нитрата зависят от видовой
принадлежности микроорганизма, но чаще конечным
продуктом является молекулярный азот (23). Обычно эти
продукты далее не участвуют в клеточном метаболизме и
не окисляются, а вьшеляются в окружающую среду.
Данный тест предназначен для определения
микробной нитратредуктазы, которая в присутствии Культу ральные свойства:
подходящего окисляемого субстрата восстанавливает
Реакции референс-штаммов:
нитрат до нитрита. Появление нитрита определяют
колориметрическими методами. Почти все
энтеробактерии восстанавливают нитраты. Когда диск с
реактивом накладывают на колонию
нитратредуцируюшего микроорганизма, выросшего на
Штаммы микроорганизмов (АТСС) Рост Восстановление
агаре с нитратом, развивается розово-красное нитрата
окрашивание.
А cinetobacter calcoaceticiis (19606) Хороший
Указания по применению :
Entembacter aerogenes (13048) Хороший
Испытуемую культуру выращивают на
Escherichia coli (25922) Хороший
подходящем агаре с добавлением субстрата (нитрата),
например, Нитратный агар (код М072 по каталогу Salmonella серовар Typhimurium (14028) Хороший
HiMedia). Затем на подозрительную колонию
накладывают диск. Появление красно-розового
Примечание-. + = положительный результат (появление красного ilth
окрашивания диска в течение 2-10 минут свидетельствует розового окрашивания диска);
о наличии у микроба нитратредукгазной активности. -= отр»шательный результат (цвет диска не изменяется).
U liyicni л
чтт
1 0
Диски с углеводами
Используются для дифференциации
микроорганизмов по их способности ферментировать
различные углеводы.
Ферментация углеводов:
Микроорганизмы, способные к ферментации того
или иного углевода, выращивают в питательной среде с
соответствующим диском и индикатором Андреде,
который под действием кислых продуктов расщепления
углевода изменяет первоначальный соломенно-желтый
цвет на красный (3).
Принцип и оценка результата:
Ферментация микроорганизмами специфического
углевода приводит к образованию кислоты или кислоты и
1.Alkaligenesfecalis withDD013- 2.Escherichiacoli
газа. Эти характеристики учитываются при идентификации
with DD004
и дифференциации бактерий (18,19). 3, Proteus vulgaris with DD002 4. Salmonella серовар Typhimurium with
При добавлении диска в питательную среду DD006
происходит диффузия углевода из него в среду. В процессе 5. Control
ферментации сахара образуется кислота (или кислота и
газ), что приводит к изменению цвета индикатора в
питательной среде (например, фeнoJЮвый красный меняет
цвет с красного на оранжево-желтый).
Для тестов на ферментацию углеводов могут быть M885 Пептонная вода с индикатором Андреде
использованы следующие диски: М909 Пептонная вода с мясным экстрактом и
№ по каталогу Субстрат индикатором Андреде
DD025 Адонит Ad М054 Основа бульона с феноловым красным
М279 Основа бульона с мясным экс'грактом и
DD001 Арабиноза Аг
феноловым красным
DD028 Целлобиоза Се М284 Основа бульона с бромкрезоловым пурпурным
М676 Бульон с бромкрезоловым пурпурным
DD002 D-Глюкоза De
DD003 Дульцит Du ПОЛУЖИДКИЕ СРЕДЫ:
DD016 Галактоза Ga Ml59 Триптон-цистиновый агар
М395 Основа среды ХьюЛейфсона для теста ОФ
DD017 Фруктоза Fc
М319 Основа триптонного агара
DD027 Инозит Is
ПЛОТНЫЕ СРЕДЫ :
DD026 Инулин In
М053 Основа агара с феноловым красным
DD004 Лактоза La М098 Основа агара с бромкрезоловым цурп)фным
DD005 Мальтоза Ma М288 Ai'ap Сандерса
DD006 Маннит Mn
На выбор можно использовать любую из
DD007 Манноза Mo перечисленных сред. Жидкие и полужидкие среды после
приготовления разливают по 5 мл в пробирки и
DD030 Мелибиоза Mb
стерилизуют. После посева испытуемого микроорганизма
DD029 Раффиноза Rf в каждую пробирку асептически помещают по 1 диску с
DD010 Рамноза Rh соответствующим углеводом. В случае полужидкой среды
диск погружают по ходу посева на небольщое расстояние
DD011 Салицин Sa
от поверхности среды так, чтобы нижняя часть ее служила
DD012 Сорбит Sb отрицательным контролем ферментации, наблюдаемой в
DD013 Сахароза Su верхней части. При использовании плотных сред на одной
чашке можно определять ферментацию культурой ряда
DD031 Трегалоза Те
углеводов. После распределения испытуемой культуры по
DD014 Ксилоза Xy поверхности выбранного питательного агара на него
наносят и слегка прижимают диски с углеводами (на
Указания по применению :
расстоянии 2 см друг от друга). Чашку инкубируют в
Готовится и стерилизуется подходящая течение 18-48 часов при 35-37°С. Результаты учитывают
питательная среда без углеводов. Для данного теста можно через 18 и 48 часов. Желательно часто просматривать
рекомендовать следующие питательные среды. результаты, так как возможна их быстрая реверсия. В
ЖИДКИЕ СРЕДЫ ; жидких средах образующаяся кислота способствует
окрашиванию среды в красный цвет, а газ скапливается в
поплавке. В полужидких средах газ виден в толще среды
(пузырьки). На агаровых средах о ферментации углевода
свидетельствует изменение цвета среды вокруг диска.
References:
1. Kilian М., 1980, In Manual of Clinical Microbiology, Lennette et al 13. Steel K. J., 1962, J.Appl. Bact., 25:445.
(Eds.), Amer.Soc. for Microbiol., 3rd ed., Washington.
14. Rochaix, 1924, C. R. Soc. Biol., 90:771.
2. BowersE.F.andJeffriesLR.,1995,J.Clin.Path.,8:58.
15. Meyer and Schonfeld, 1926, Zentralbl. Bacteriol. Parasitenkd.
3. MaxtedW.R., 1953,J.Clin. Path.,6:234. Infectionskr. Hyg. Abt. I Orig., 99:402.
4. Levinson M.L.andFrankP.P., 1955,J.Bact.,69:234. 16. Facklam and Moody, 1970, Appl. Microbiol., 20:245.
5. StreamerC.W.etal, 1962,Am.J. Dis.Children, 104:157. 17. MacFaddin J. F., 1980, Biochemical Tests for Identification of
Medical Bacteria, 2nd ed.,Williams and Wilkins, Baltimore.
6. Guthof0., 1960,Ztschr. F Hyg. u.Infektionskr., 146:425.
18. Greenberg A.E., Trussell R.R. and Clesceri L.S. (Eds.), 1985,
7. Facklam,R.R.etal,1974,Appl.Microbiol.,27:102113.
Standard Methodsforthe Examination ofWaterand Wastewater,
8. Levinson M.L.and FrankP. F., 1955,J. Bact.,69:234. 16th ed.,APHA, Washington, D.C.
9. StreamerC.W.etal, 1962,Am.J.Dis.Children, 104:157. 19. Mackie and McCartney. 2000, Practical Medical Microbiology,
14th ed.. Vol. 2, Collee, Duguid, Fraser and Marmion (Eds.),
10. LoweG.H., 1962, J.Med. Lab.Technol., 19:21.
Churchill Livingstone, Edinburgh.
11. GordonJ.and McLeodJ.W., 1928,J.Path.Bact.,31:185.
20. Finegold and Baron, 1990, Bailey and Scott's Diagnostic
12. GabyW.L.andHadleyC.,1957,J.Bact., 74:356.
Microbiology, 8th ed.,The C.V. Mosby Co., St. Louis.
Хранение и срок годности: Все вышснсрсчисленные иродукгы следует хранить при +2...+8°С, к*роме дисков с
фактором V, который храня г при гемпсратуре ниже -20°С. Не используйте диски и
полоски после истечения срока годности. Срок годности от 1 до 3 лет.
ВНТ^ШАНИЕ: материалы надо держать во влагонепроницаемых контейнерах с поглотителем влаги. Перед тем, как
открыть контейнер, надо дать ему нагреться до комнатной температуры.
Ы 1М С 1ГЫ Л
12
tU 1 •l Mt« » Cft—D iA
М икробиология на служ бе ч ел о веч еству
П рои зводи тель и эксп ортер диагности чески х и культуральны х
питательны х ср ед , о б оруд ован и я и расходн ы х м атер и ал о в
д л я б акл аб о р ато р и й
М е ж д у н а р о д н ы й с е р т и ф и к а т к а ч е 1 б Ф э а о 1
л Сухие и готовые к употреблению л Пластиковая посуда и разные
^ питательные среды
типы
Компоненты: ^ тампоны для биологических
бактериологический агар, образцов
^ пептоны, желчь и соли желчных
^ Транспортные системы
кислот,
Флаконы для гемокультур
дрожжевой, мясной и др.
^ экстракты ^ Металлические и пластиковые
бактериологические петли
^ Питательные среды для культур
клеток » Лабораторные реактивы и
^ биохимикаты
Диски с антибиотиками и
высокой очистки
диспенсер для картриджей,
Продукция зарегистрирована в М инздраве России и разреш ена к прим енению на территории РФ .
По всем воп росам о б р ащ аться по:
А дрес: 124498, М осква, а/я 130.
тел.: (095) 536-43-00
HiM edia L aboratories Pvt. Lim ited
A-406, Bhaveshwar Plaza, LBS Marg, M um bai - 400 086, India.
Fax: 00-91-22-2500 5764,2500 2468, 2500 2286 Phone : 2500 0970, 2500 3747,2500 1607,2500 0653
E m ail: info@ him edialabs.com / sarojw(s)giasbm01 .vsnl.net.in W ebsite : w w w .him edialabs.com