Наборы реагентов для определения характеристик альбумина в сыворотке и плазме крови методом парамагнитного резонанса — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»: Приказом Росздравнадзора Г енеральный директор от 20 г. № ООО «Альбутран-М» ЕнилееваС.К. ^ 2012 г. Наборы реагентов для определения характеристик альбумина в сыворотке и плазме крови методом парамагнитного резонанса ИНСТРУКЦИЯ п о ПРИМЕНЕНИЮ Данные идентификации набора реагентов находятся на этикетке, нанесенной на упаковку, и содержат: • Наименование и адрес изготовителя Частное предприятие«Альбутран»; • Наименование набора: “АТА-тест-С-ХХ”, “АТА-тест-Т-ХХ”,“АТА-тесг-СТ-ХХ”, где XX - количество исследований, обеспечиваемое набором; • Указание на использование только для лабораторных исследований: Для лабораторных исследований(Для исследований invitro); • Код партии ПартияХХХ, где XXX - комбинация цифр и букв; • Срок годности набора в формате ГГГГ-ММ (год-месяц); • Указания по условиям транспортированияи хранения. Изготовитель набора реагентов: Частное предприятие«Альбутран». Адрес: Некрасова 29-58, 220040Минск, Беларусь. | 1. Н | А | ЗНАЧЕНИЕ............ | ..................................................................................................................................... | | 2. П | Р | ИНЦИП МЕТОДА | ................................................................................................................................... | | 3. С | О | СТАВ НАБОРОВ | РЕАГЕНТОВ...................................................................................................... | | 3. | 1. | Срок годности........ | ............................................................................................................................... | | 3. | 2. | Условия и сроки х | ранения реагентов при транспортировании............................... | | 3. | 3. | Условия хранения | реагентов до вскрытия упаковки.................................................... | | 3. | 4. | Условия и сроки х | ранения реагентов после вскрытия упаковки........................... | | 4. А | Н | АЛИТИЧЕСКИЕ | ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ.............. | | 4. | 1 | Специфичность к а | льбумину....................................................................................................... | | 4. | 2 | Воспроизводимост | ь результатов................................................................................................. | | 4. | 3 | Линейность............... | ............................................................................................................................... | | 4. | 4 | Нормальные велич | ины показателей....................................................................................... | | 5. М | Е | РЫ ПРЕДОСТОР | ОЖНОСТИ........................................................................................................... | | 6. О | Б | ОРУДОВАНИЕ И | ПРИНАДЛЕЖНОСТИ.................................................................................. | | 7. И | С | СЛЕДУЕМЫЕ ОБ | РАЗЦЫ................................................................................................................... | | 8. П | О | ДГОТОВКА РЕАГ | ЕНТОВ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ........................................................... | | 9. И | Р | ОВЕДЕНИЕ ИССЛ | ЕДОВАНИЯ....................................................................................................... | | 10. | Р | АСЧЕТ РЕЗУЛЬТА | ТА АНАЛИЗА.............................................................................................10 | | 11. | И | НТЕРПРЕТАЦИЯ | РЕЗУЛЬТАТОВ..........................................................................................10 | | 12. | Р | ЕКЛАМАЦИИ НА | КАЧЕСТВО..................................................................................................11 | СОДЕРЖАНИЕ .4 5 .5 ф .8 8 8 8 .9 1. Н азн ач ен и е 1.1. Наборы реагентовпредназначены для определения характеристик альбумина в образцах сыворотки и EDTA-плазмы крови человека методом спинового зонда (проведения АТА-исследования) на лабораторном анализаторе электронного парамагнитного резонанса типа «ЭПР АХМ-09». 1.2. Сывороточный альбумин - основной транспортный белок крови, основной физиологической функцией которого является транспорт жирных кислот. Сывороточный альбумин также обеспечиваетперенос билирубина и многих других гидрофобных метаболитов, а такжесвязывание эндотоксинов и их эвакуацию к гепатоцитам. В процессе транспорта жирных кислот молекулы альбумина обеспечивают сначала их эффективное связываниепри загрузке и далее при переносе в циркуляторной системе, а в конце транспортного пути - эффективную диссоциацию при передаче клеткам-мишеням. Изменчивость связывающих свойств альбумина в процессе транспорта метаболитов обеспечивается за счет конформационной подвижности этого белка и аллостерических взаимодействий между его различными центрами связывания. В крови молекулы альбумина частично загружены переносимыми метаболитами, состав и количество которых зависят от состояния организма и изменяются при развитии патологических процессов, что может отражаться на характеристиках транспортнойфункции альбумина в отношении жирных кислот, и проявляться в изменении характеристикконформациибелка. 1.3. ЭПР-метод оценки характеристик сывороточного альбумина (АТА-тест) может быть использован при диагностических лабораторных исследованиях с целью; - диагностики и мониторинга нарушений транспортной функции альбумина при интоксикации; - диагностики модификацииконформации молекул альбумина при связывании метаболитов злокачественного роста для диагностики и мониторинга онкологических заболеваний. 1.4.Наборы реагентов рассчитаны на проведение следующих объемов исследований: Наименование Количество Выполняемое исследование набора реагентов исследований Определение характеристик транспортной “АТА-тест-СТ-20” функции альбумина и показателя конформации 20 молекул альбумина Определение характеристик транспортной “АТА-тест-СТ-80” функции альбумина и показателя конформации 80 молекул альбумина Определение характеристик транспортной “АТА-тест-Т-20” 20 функции альбумина Определение характеристик транспортной “АТА-тест-Т-80” 80 функции альбумина Определение показателя конформации молекул “АТА-тест-С-20” 20 альбумина Определение показателя конформации молекул “АТА-тест-С-80” 80 альбумина 1.5. Наборы реагентов предназначены для применения в лабораторных исследованиях (диагностика invitro). 1.6. Наборы реагентов предназначены для проведения качественного анализа - определения показателей функциональности сывороточного альбумина. 2. П р и н ц и п м етода Определение характеристик (показателей) функции сывороточного альбумина основано на методе спиновых меток и зондов, теория и методики применения которого описаны в следующих книгах; 1) М етод спиновых меток в молекулярной биологии. Лштенштейн Г.И. М., “Наука", 1974; 2) М етод спинового зонда. Кузнецов А. Н.. М., "Наука", 1976; 3) Метод спиновых меток. Под ред. Л. Берлинера. М. "Мир", 1979). Метод исследования состоит в следующем: • в исследуемомобразцепроводят реакщ1ю связывания альбумином специфичного спинового зонда, при этомчастично снижают связывающую способность молекул альбуминапутем добавления определенных концентрацийэтанола. • Из спектров электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) проб, содержащих исследуемую пробу, спиновый зонд и этанол, путем компьютерного анализаспектров определяют параметры связывания спинового зонда наспецифических и неспецифических центрах альбумина, а также концентрацию несвязанного зонда. • На основе измеренных таким образом параметров рассчитывают характеристики транспортной функции альбумина и показатель конформации молекул альбумина. Для исследования берут пробы образца сыворотки или плазмы EDTA, которые смещивают с реагентами,содержащими различные концентрации этанола и спинового зонда 16-доксил-стеариновая кислота. Затем пробы инкубируют для прохождения реакции связывания спинового зонда с альбумином. После инкубации пробы набирают в капилляры, которые последовательно исследуют на Анализаторе ЭПР. Анализатор регистрирует ЭПР-спектры спинового зонда от проб, находящихся в каждом капилляре, выполняет анализ каждого спектра и рассчитывает показатели функции альбумина в отношении жирных кислот: связывающую способность (BE), транспортную эффективность (RTQ), детоксификационную способность (DTE), а также показатель нарушения конформации белка (DR). Величины показателей функции альбумина выражаются в процентах к среднему значению нормы у взрослого человека, показатель нарушения конформации выражается в условных единицах. 3. Состав наборов реагентов Комплектность наборов реагентов указана в таблицах 1-6. Наборы реагентов не содержат токсичных веществ. Таблица 1.Комплектность набора реагентов “АТА-тест-СТ-20’ Концентрация Состав Объем, мл Количество, шт. , ммоль/л Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 3,5 0,3 1 в этаноле (в пробирке) Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 5,8 0,35 1 в этаноле (в пробирке) Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 7,5 0,4 1 в этаноле (в пробирке) Инструкция по применению — - 1 Паспорт - - 1 Таблица 2.Комплектность набора реагентов “АТА-тест-СТ-80” Концентрация, Состав Объем, мл Количество, шт. ммоль/л Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 3,5 0,3 4 в этаноле (в пробирке) Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 5,8 0,35 4 в этаноле (в пробирке) Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 7,5 0,4 4 в этаноле (в пробирке) Инструкция по применению — — 1 Паспорт — — 1 Таблица З.Комплектность набора реагентов “АТА-тест-С-20” Концентрация, • Состав Объем, мл Количество, шт. ммоль/л Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 5,8 0,35 1 в этаноле (в пробирке) Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 7,5 0,4 1 в этаноле (в пробирке) Инструкция по применению — — 1 Паспорт — — 1 Таблица 4.Комплектность набора реагентов “АТА-тест-С-80” Концентрация, Состав Объем, мл Количество, шт. ммоль/л Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 5,8 0,35 4 • в этаноле (в пробирке) Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 7,5 0,4 4 в этаноле (в пробирке) Инструкция по применению - - 1 Паспорт — — 1 Таблица З.Комплектность набора реагентов “АТА-тест-Т-20” Концентрация, Состав Объем, мл Количество, шт. ммоль/л Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 3,5 0,3 1 в этаноле (в пробирке) Инструкция по применению — - 1 Паспорт — — 1 6 Таблицаб.Комплектность набора реагентов “АТА-тест-Т-80’ Концентрация Состав Объем, мл Количество, шт. , ммоль/л Раствор спинового зонда 16- доксил-стеариновая кислота 3,5 0,3 4 в этаноле (в пробирке) Инструкция по применению — — 1 Паспорт — - 1 3.1. Срок годности Срок годности реагентов составляет один год после даты изготовления. Предельный срок хранения указан на упаковке. 3.2.Условия и сроки хранения реагентовпри транспортировании При транспортировании допускается хранение набора при температуре не выше 25°С в течение не более 14 дней. 3.3. Условия хранения реагентов до вскрытия упаковки Реагенты должны храниться в упаковке при температуре от О до10°С. 3.4. Условия и сроки хранения реагентов после вскрытия упаковки После вскрытия упаковки, пробирки с растворами спинового зонда должны храниться при температуре от О до10°Св течение не более 2-х месяцев после даты первого вскрытия. 4. Аналитические характеристики метода исследования 4.1 Специфичность к альбумину Специфичность связывания спинового зонда на альбумине: в пробах с концентрацией сывороточного альбумина 40 г/л и выше - не менее 80%, в пробах с концентрацией альбумина от 20 до 40 г/л - не менее 70%. 4.2 Воспроизводимость результатов Коэффициенты вариации результатов определения показателей BE,RTQhDTEb одном и том же образце: вариация показателей(среднеквадратическое отклонение)связывающей способности альбумина (BE), транспортной эффективности альбумина (RTQ) и детоксификационной способности альбумина (DTE) не более 20%. Для показателей со средними значениями более 100% коэффициент вариации показателей не более 20%. Значение вариации (среднеквадратического отклонения)показателя DR должно уточняться в каждой лаборатории для обследуемого контингента. Типичное значение вариации(сре днеквадратического отклонения)результатов определения показателя ОКсоставляет не более 0,5 единиц при значениях показателя меньше 2,5 единиц, и не более 1,0 единиц при значениях показателя больше 2,5. 4.3 Линейность Коэффициент корреляции (линейность) показателя BE эффективности связывания спинового зонда альбумином в пробах с концентрацией альбумина в диапазоне от 20 г/л до 60 г/л не менее 0,95. 4.4 Нормальные величины показателей Нормальные величины показателей функциональности альбумина в сыворотке (EDTA- плазме) крови взрослого человека составляют: - BE от 65 до 135% (среднее значение 100%); - RTQot 60 до 100% (среднее значение 82%); - DTEot 40 % до 175% (среднее значение 100%); - DRoT 1,0 до 5,5 (среднее значение 3). Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин у обследуемого контингента. 5. Меры предосторожности При выполнении исследования необходимо соблюдать правила безопасности при работе с кровью и ее компонентами в клинико-диагностических лабораториях лечебных учреждений. Все используемые реагенты и материалы являются нетоксичными. Удалять неиспользованные реактивы в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10- Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами. 6. Оборудование и принадлежности Для выполнения анализа используются; • Анализатор электронного парамагнитного резонанса лабораторный типа «ЭПР АХМ-09»; • Пробирки для сыворотки вместимостью 2 -5 мл; • Центрифуга лабораторная на 1000 -1500 g; • Пипетки на 10, 12, 14 и 50 мкл, со сменными наконечниками. • Пипетка для наполнения капилляров, позволяющая отбирать объем жидкости 40 мкл, с наконечником для капилляров; • Расходные и вспомогательные материалы для проведения ЭПР-исследования: - Капилляры (длина 125 мм, калиброванный объем 40 мкл); - Пробки для капилляров; - Замазка для закупоривания капилляров (на подложке); - Пробирки типа Эппендорф (объем 0,2 мл, 1,5-2 мл); - Планшет пластиковый с крышкой, 96 лунок; - Пробки для ячеек планшета; - Пленка парафильм. 7. Исследуемыеобразцы Исследуют нативные или размороженные образцы сыворотки либо плазмы ЭДТАкрови,объемом не менее 0,2 мл. ф Для получения образцов забор проб цельной крови у пациента следует производить натощак, путем венопункции в объеме 3 - 5 мл. Кровь набирают в пробирки, которые центрифугируют в течение 10 минут при 1000-1500 g. Затем сыворотку или EDTA-плазму отбирают в пробирки. При необходимости центрифугирование сыворотки следует повторить. Сыворотку до момента проведения исследования можно хранить до 5 дней при температуре 4 - 7 °С, либо в замороженном виде максимально в течение 6 месяцев при температуре не выше минус 18 °С. Размораживать пробирки с замороженными образцамиследуетнепосредственно перед исследованием, предпочтительно в водяной бане при температуре 37 °С. После размораживания образцов исследование должно быть проведено в течение не более чем 2 часов. Повторное замораживание-размораживание образцов для исследования не допускается. 8. Подготовка реагентов для исследования Перед использованием пробирки с растворами спинового зонда R1, R2 и R3 необходимо выдержать при комнатной температуре (20 - 25 °С) не менее 30 минут. 8 После первого вскрытия пробирок R1, R2 или R3, с растворами спинового зонда, эти реагенты могут использоваться в течение не более чем 20 календарных дней, при условии хранения надежно укупоренных пробирок при температуре от О до 10 °С. 9. Проведение исследования 9.1. Исследование должно проводиться в лабораторных условиях, при температуре в помещении не выше 25 °С. 9.2. Приготовить пробы для измерения на анализаторе, для чего внестидозы исследуемого образца и реагентов в пробирки типа Эппендорфили в лунки пластикового планшета согласно схеме, приведенной в таблицах 8-10: Таблица З.Подготовка проб одного образца сыворотки при использовании наборов _____________реагентов “АТА-тест-СТ-20” и “АТА-тест-СТ-80” Кодпробы Объем образца(сыворотки) Объемреагента Реагент (мкл) (мкл) 50 R1 10 В 50 R2 12 50 R3 14 ф Таблица 9.Подготовка проб одного образца сыворотки при использовании наборов _____________реагентов “АТА-тест-С-20” и “АТА-тест-С-80” Код пробы Объем образца (сыворотки) Объем реагента Реагент (мкл) (мкл) В 50 R2 12 50 R3 14 Таблица Ю.Подготовка проб одного образца сыворотки при использовании наборов Код пробы Объем образца (сыворотки) Объем реагента Реагент (мкл) (мкл) А 50 R1 10 Допускаетсяодновременное раскапываниепроб для нескольких образцов сыворотки, не более пяти. Во избежание чрезмерного испарения реагентов из пробирок типа Эппендорф или из лунок планшета, рекомендуется следующее: • Начинайте раскапыватьреагенты только после того, как все запланированные к измерениюобразцы сыворотки были накапаны в пробирки или лунки. • Раскапывайте сначала peareHTRl во все пробиркиили лунки, содержащие пробы “А”, затем реагент R2 в пробиркиили лунки с пробами “В”, затем реагент R3 в пробиркиили лунки с пробами “С”. • В любом случае, не раскапывайте более 5 образцов (15пробирокили лунок) одновременно. • После раскапываниясразу же плотно закройте пробирки крышками а заполненные лунки планшета закройте или крышками или сначала парафилмом, а затем накройте планшет крышкой. 9.3. Пробирки с образцами встряхните не менее 5 раз, и оставьте их для инкубирования при комнатной температуре 20-25 °С в течение15 минут. В случае использования планшета поместите его в шейкер и инкубируйте при температуре 37 °С и частоте встряхивания 800 - 1000 мин'^ в течение 10 минут. 9.4. Подготовка капилляров для измерения проб на Анализаторе Из каждой пробирки или лунки планшета набрать в отдельный капилляр 40 мкл пробы, используя пипетку с наконечником для капилляров. Для этого соединить верхнюю часть капилляра с наконечником, вставить нижнюю часть капилляра в пробирку типа Эппендорф или лунку планшета и произвести забор содержимого. Повернуть капилляр в горизонтальное положение, отсоединить наконечник, затем, изменяя угол наклона капилляра, расположить пробу в капилляре согласно Рис. 1 и, не изменяя наклона капилляра, запечатать его конец в его верхней части с помощью замазки. Замазка ^идкий образец Не менее 50 мм Пробка НИЗ Капилляр В0рХ Рис. 1. Позиция исследуемой пробы в капилляре При наполнении капилляра удостовериться, что: - в пробе отсутствуют пузырьки; ф - проба занимает не менее 50 мм длины капилляра и располагается на расстоянии 5 - 10 мм от нижнего конца капилляра (Рис.1), чтобы предотвратить вытекание пробы при последующих действиях; ' - замазка надежно закупоривает капилляр, что предотвращает вытекание содержимого капилляра. 9.5. Поместить подготовленный капилляр вертикально, запечатанным замазкой концом вверх, в подставку, отметив код образца и код пробы. 9.6. Провести измерения подготовленных капилляров на анализаторе «ЭПР АХМ-09» (см. Инструкцию по эксплуатации анализатора). Перед помещением в Анализатор закрепить на капилляре пробку, как показано на Рис. 1. 10. Расчет результата анализа Расчет результата анализа выполняется автоматически программой, управляющей работой лабораторного анализатора «ЭПР АХМ-09», после завершения измерений всех капилляров с пробами одного образца, в соответствии с типом используемого набора реагентов. Результат анализа выводится на экран монитора и записывается на диск управляющего компьютера, а также может быть распечатан на принтер при выборе оператором соответствующей опции в окне вывода результатов. 11. Интерпретация результатов 11.1. При лабораторных исследованиях с целью диагностики и мониторинга транспортной функции альбумина при интоксикации, при использовании наборов типа “АТА-тест-Т-ХХ” и “АТА-тест-СТ-ХХ”, значения показателя детоксификационной способности альбумина (DTE) в диапазоне нормы (выше 40%) свидетельствуют о нормальном состоянии транспортной функции альбумина. Значения DTE ниже 40% указывают на снижение транспортной функции альбумина, что наблюдается при интоксикациях различного генеза, в том числе при токсемии вызванной существенно сниженной концентрацией альбумина. Значения DTE в диапазоне 20-30% свидетельствуют о выраженной интоксикации, значения ниже 20% - о высоком риске развития септических осложнений. Значения DTE ниже 9% наблюдаются у пациентов с развивающимся сепсисом или системным воспалительным процессом, ниже 3% - при септическом шоке. 10 Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазоны показателя DTE для обследуемого контингента. 11.2. При лабораторных исследованиях модификации конформации молекул альбумина с целью диагностики или мониторинга онкологических заболеваний, при использовании наборов типа “АТА-тест-С-ХХ” и “АТА-тест-СТ-ХХ”, сниженные относительно нормы значения показателя DR указывают на нарушение конформации альбумина, наблюдающееся вследствие связывания на белке метаболитов активного злокачественного роста. Значения DR в диапазоне нормы (больше 1,0) указывают на отсутствие активного злокачественного роста в организме, значения в диапазоне от О до 1,0 следует рассматривать как пограничные, значения DR ниже О указывают на активный злокачественный рост у пациента. При этом следует учитывать, что достоверно показатель DR может быть определен только для пациентов, не имеющих выраженной интоксикации (показатель DTE должен быть в диапазоне нормы - более 40%). У пациентов с выраженной интоксикацией нарушение конформации альбумина (и снижение показателя DR) может быть вызвано связыванием токсинов. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазоны показателя DR для обследуемого контингента. 11.3. При лабораторных исследованиях качества альбумин-содержащих препаратов для инфузий, таких как растворы альбумина, препараты плазмы и т.п., показатели BE и RTQ свидетельствуют о функциональном состоянии альбумина в препарате. Значения показателя BE в диапазоне 100-135% и выше указывают на высокую эффективность связывания метаболитов альбумином (увеличенную константу связывания белка), что соответствует препаратам, предназначенным для детоксификации. Значения BE ниже 65% указывают на сниженную связывающую способность альбумина, что может быть вызвано нарушением конформации белка при производстве или хранении препаратов, чрезмерной концентрацией стабилизирующих реагентов и т.п. Значения показателя RTQ в диапазоне нормы (от 60 до 100%) свидетельствуют о сбалансированности транспортных характеристик альбумина в исследуемом препарате, в соответствии с альбумином нативной сыворотки взрослого человека в норме, что соответствует препаратам предназначенным для инфузий с целью поддержки и восполнения транспортной системы альбумина. Значения RTQ ниже 60% указывают на разбалансировку функций альбумина по связыванию и отдаче метаболитов. Сниженные значения RTQ также могут наблюдаться в нормальных препаратах альбумина для детоксификации, поскольку эти препараты содержат белок с увеличенной связывающей способностью. 12. Рекламации на качество Рекламации на качество набора реагентов направляются по адресу предприятия- изготовителя (Частное научно-производственное предприятие Альбутран): 220040, Минск, ул. Некрасова, д.29, к.58.; телефон/факс: (375) 278-12-68; E-mail: albutran.mail@gmail.com. и Общества с ограниченной ответственностью «Альбутран-М»: 124460 г.Москва, г.Зеленоград, проезд 4806, д 4, стр.1; телефон: 8(499) 645-51-16; E-mail: info@albutranm.ru «СОГЛАСОВАНО»: Зав. кафедрой клинической лабораторной диагноста^^1^;,^ОУ ДПО РМАПО Минз! Долгов В.В. _ 2012 г. 'Ч', ' ■ 11