Набор реагентов для иммуноферментного определения общего специфического антигена предстательной железы в сыворотке крови (ИммуноФА-ПСА) по ТУ 9398-341-11361534-2004 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
“УТВЕРЖДАЮ” Руководитель.ДЫартамента ИНСТРУКЦИЯ п о ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЖРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕГО СПЕЦИФИЧЕСКОГО АНТИГЕНА ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ||| ЖЕЛЕЗЫ В СЬШОРОТКЕ КРОВИ (ИммуноФА-ПСА) Рекомендована Комиссией по наборам реагентов для иммуноферментного (неинфекционные), радиоиммунологического и других видов иммунохимического анализа Комитета по новой медицинской технике Минздрава РФ (протокол № 10 от 17 ноября 2003 г.). 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор ИммуноФЛ-ПСА предназначен для количественного определения содержания общего (как связанного, так и не связанного с белками) специфического антигена предстательной железы (ПСА) в сыворотке крови человека методом одностадийного твердофазного иммуноферментного анализа. ПСА - сериновая протеаза, секретируемая предстательной железой. В крови здоровых мужчин находится в свободной и связанной с ингибиторами протеаз формах. При этом кон центрация общего ПСА обычно не превышает 4 нг/мл (у пожилых лиц может бьггь несколь ко вьппе). В случае доброкачественной гиперплазии простаты или злокачественного процес са концентрация сывороточного ПСА, как правило, увеличивается (при доброкачественной гиперплазии - не выше 30 нг/мл). Надежность дифференцирования этих заболеваний повы шает определение свободного ПСА, процент которого существенно снижается при злокаче ственном процессе вследствие повьппения протеолитической активности ПСА и усиления его связьшания с ингибиторами. Количественное определение ПСА имеет важное значение для диагностики заболеваний простаты, для прогноза развития рака предстательной железы и мониторинга его лечения. Набор реагентов ИммуноФА-ПСА рекомендуется использовать в сочетании с набором реагентов ИммуноФА-СвПСА, предназначенным для количественного определения содержания свободного специфического антигена предстательной железы. Составлена: заместителем генерального директора, к.б.н. Е.М. Гавриловой, заместителем генерального директора Т.А. Поздняковой - сотрудниками ЗАО “НВО Иммунотех”; заведующим централизованной лабораторией клинической иммунологии ЦКБ, д.м.н., проф. Ю.П. Резниковым. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 41 исследуемого образца, 6 калибровочных проб, 1 пробы контрольной сыворотки, всего 96 определений. 2. ПРИНЦИП МЕТОДА Принцип метода определения основан на двуцентровой схеме твердофазного иммуноферментного анализа с использованием двух типов антител. Исследуемые образцы сыворотки крови инкубируют в планшете с иммобилизованными на твердой фазе антителами к ПСА и одновременно с конъюгатом моноклональных антител к ПСА с пероксидазой. Количество связавшегося конъюгата выявляют с помощью раствора субстрата (3,3',5,5'-тетраметилбензидина с добавлением перекиси водорода). Интенсивность окраски продукта окисления субстрата прямо пропорциональна концентрации ПСА, содержащегося в анализируемом образце. 3. СОСТАВ НАБОРА: т в состав набора входят следующие компоненты: - планшет 96-луночный полистироловьш с иммобилизованными на стенках лунок моноклональными антителами к ПСА, готовый для использования - 1 шт.; - калибровочные пробы на основе сыворотки крови теленка, содержащие известные количества ПСА: О нг/мл (3,0 мл); 1,0; 2,5; 5,0; 15; 30 нг/мл (по 0,5 мл); концентрации ПСА в калибровочных пробах могут незначительно изменяться от серии к серии, точные значения концентраций указаны на этикетках флаконов, готовые для использования - 6 фл. Калибровочные пробы ПСА откалиброваны по I Международному стандарту ПСА 1st IS 96/670; - контрольная сыворотка на основе сыворотки крови теленка с известным содержанием ПСА, готовая для использования - 1 фл. (0,5 мл); - конъюгат моноклональных антител к ПСА с пероксидазой, готовый для использования - 1 фл. (И мл); - фосфатно-солевой буферный раствор с добавлением твин-20, pH 7,0+0,5, концентрированный - 1 фл. (15 мл); - раствор субстрата на основе ТМБ с добавлением перекиси водорода, готовый для использования - 1 фл. (11 мл); ' серная кислота (стоп-реагент), 0,2 М, готовая для использования - 1 фл. (15 мл); ~ пленка для заклеивания планшета -1 шт. 4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Специфичность. Использование моноклональных антител для иммобилизации на лунках планшета обеспечивает высокую специфичность анализа. Чувствительность. Минимальная концентрация ПСА, определяемая с помощью набора, составляет не более 0,1 нг/мл. Воспроизводимость результатов. Коэффициент вариации результатов определения концентрации ПСА в одном и том же образце сьшоротки крови не превьппает 8%. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на "открытие" ПСА - соответствие измеренной концентрации ПСА предписанной'в пробе, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы 2,5 нг/мл. Процент "открытия” составляет 90-110 %. Линейность. Зависимость концентрации ПСА в образцах сыворотки крови при разведении их сьшороткой крови, не содержащей ПСА, имеет линейный характер в диапазоне концентраций 1,0-30 нг/мл и составляет 90-110 %. Клиническая проверка набора. Концентрация ПСА, определяемая с помощью набора ИммуноФА-ПСА, в сыворотке крови здоровых лиц (п=300) составила 0,1-4 нг/мл. Концентрация ПСА у больных с доброкачественными заболеваниями простаты составляла до 20 нг/мл. Свыше 80% больных со злокачественными опухолями простаты имели концентрацию ПСА более 10 нг/мл. Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора ИммуноФА-ПСА уточнить значения концентраций ПСА, соответствующие нормальным для обследуемого контингента. 5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Потенциальный риск применения набора - класс 2а. Все компоненты набора, за исключением серной кислоты, в используемых концентрациях являются нетоксичными. Серная кислота действует на кожу и слизистые прижигающим образом, вызывая раздражение и ожоги, поэтому в случае попадания на кожные или слизистые покровы ее следует немедленно тщательно смьггь большим количеством проточной воды. При работе с набором следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР (Москва, 1981 г.). При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита и другие возбудители вирусных инфекций. 6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ: - Фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность раствора в лунках планшета при длине волны 450 нм; - термостат суховоздушный, поддерживающий температуру +(37+1)®С; - пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 2-20 мкл, 50-200 мкл, 200-1000 мкл; - пипетка полуавтоматическая многоканальная с переменным объемом со сменными наконечниками, позволяющая отбирать объемы жидкости 50-250 мкл; - секундомер; - шейкер; - стакан химический мерный или колба мерная вместимостью 300 мл; - вода дистиллированная; - бумага фильтровальная или салфетки марлевые; - перчатки резиновые или пластиковые. 7. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ 7.1. Приготовление рабочего раствора фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБ?). Содержимое флакона с концентратом фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБ?) перенести в мерный стакан вместимостью 300 мл, дважды ополоснуть флакон дистиллированной водой, все промьюные воды объединить с разведенным ФСБР и довести общий объем раствора до 300 мл дистиллированной водой. Полученный рабочий раствор ФСБР можно хранить в закрытой емкости при температуре +(2-8)°С не более 7 дней. Примечание. При хранении концентрата ФСБР могут образовываться кристаллы, поэтому перед отбором аликвоты ФСБР необходимо слабо подогреть флакон с буферным раствором, поместив его в водяную баню или термостат при температуре +37°С до полного растворения кристаллов. 8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Компоненты набора перед использованием необходимо вьздержать при комнатной температуре (-Ы8-25°С) в течение времени не менее 30 мин. Внесение реагентов следует проводить согласно схеме на рис. 1. 8.1. В два ряда лунок планшета внести в дубликатах по 20 мкл калибровочных проб (КП), начиная с минимальной концентрации. 8.2. В две лунки планшета внести по 20 мкл контрольной сыворотки (КС). 8.3. В оставшиеся лунки внести в дубликатах по 20 мкл исследуемых образцов сьшороток крови (ИС). 1 8 10 11 12 А КП1 КП1 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС В КП2 КП2 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС С КПЗ КПЗ ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС D КП4 КП4 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС Е КП5 КП5 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС F КП6 КП6 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС G КС КС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС Н ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС Рис. 1. Схема заполнения лунок планшета. 8.4. Во все лунки внести по 100 мкл конъюгата моноклональных антител к ПСА с пероксидазой. Конъюгат вносить в лунки планшета в той же последовательности, что и калибровочные пробы, контрольную сьюоротку и исследуемые образцы. Перемешать содержимое лунок на шейкере при комнатной температуре в течение 2 мин или пятью- шестью круговыми движениями планшета по поверхности стола. Длительность процедуры внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки, исследуемых образцов и конъюгата не должна превьш1ать 15 мин. 8.5. Плотно закрыть планшет крышкой или заклеить пленкой для заклеивания планшетов и выдержать в течение 1 ч при температуре +37°С. 8.6. Извлечь планшет из термостата и отмыть его. Промывку планшета можно проводить вручную или с использованием любого автоматического промьюающего устройства. При ручной промьшке удалить содержимое лунок декантированием, в каждую лунку планшета внести по 250 мкл рабочего раствора ФСБР (см п. 7.1), оставить планшет на 2 мин, после чего удалить его содержимое декантированием. Процедуру повторить еще 2 раза. После этого тщательно удалить остатки влаги из лунок, несколько раз резко вытряхнув планшет о марлевую салфетку или фильтровальную бумагу. При автоматической промывке в каждую лунку планшета следует вносить 300 - 350 мкл рабочего раствора ФСБР. 8.7. Внести во все лунки планшета по 100 мкл раствора субстрата в той же последовательности, что и конъюгат. Выдержать планшет в течение 15 мин при температуре +37°С в темноте. Примечание. При внесении раствора субстрата рекомендуется всегда использовать новые наконечники. 8.8. Внести во все лунки планшета с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор субстрата, по 100 мкл 0,2 М серной кислоты. Тщательно перемешать содержимое лунок, поместив планшет на шейкер, при комнатной температуре (-Ы8-25°С) в течение 2 мин. 8.9. Измерить оптическую плотность в лунках планшета при длине волны 450 нм. Процедура измерения оптической плотности не должна превышать 15 мин. Окраска в лунках планшета стабильна в темноте в течение 1 ч при комнатной температуре. 9. РАСЧЕТЫ 9.1. Построить калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации ПСА в калибровочных пробах. Образец калибровочного графика приведен на рис. 2. 10 20 30 40 ПСА, нг/мл Рис. 2. Типичный калибровочный график, полученный с использованием набора ИммуноФА-ПСА 9.2. Рассчитать средние арифметические значения показателей оптической плотности контрольной сьшоротки и анализируемых образцов и по калибровочному графику определить концентрацию ПСА. 9.3. При построении калибровочного графика и определении содержания ПСА в исследуемых образцах с помощью автоматического анализатора иммуноферментных реакций рекомендуется использовать кусочно-линейный метод аппроксил1ации. 9.4. Если концентрация ПСА в анализируемом образце превьппает 30 нг/мл, следует развести образец калибровочной пробой О нг/мл, повторить определение и полученный результат умножить на фактор разведения.