Набор реагентов для иммуноферментного определения тестостерона в сыворотке крови (ИммуноФА-ТС) по ТУ 9398-019-11361534-2007 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
УТВЕРЖДЕНА 'УТВЕР Приказом Росздравнадзора от 200 г. № А.П. Осипов 2007 г. ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (ИммуноФА-ТС) Регистрационное удостоверение JV9. .о т ”../'....................200 г. 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор ИммуноФА-ТС предназначен для количественного определения содержания общего тестостерона (ТС) в сыворотке крови человека методом твердофазного иммунофер- ментного анализа (ИФА). Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 41 неизвестного образца, 6 ка либровочных проб и 1 пробы контрольной сыворотки, всего 96 определений. ТС является наиболее важным андрогенным природным анаболическим гормоном мужчин и женщин. У мужчин основная часть ТС образуется в семенниках клетками Лейдига, меньщее количество вырабатывается клетками сетчатого слоя коры надпочечников и при трансформации из предшественников в периферических тканях. У женщин этот гормон сек- ретируется яичниками и корой надпочечников, являясь промежуточным продуктом стеро идного обмена. Нормальная секреция ТС необходима для поддержания репродуктивной функции у мужчин, ТС контролирует сперматогенез, функцию предстательной железы и по тенцию. У женщин секреция ТС зависит от фазы менструального цикла - максимальное зна чение достигается в лютеиновой фазе и в период овуляции. Секреция ТС надпочечниками резко снижается у обоих полов после 50-60 лет. У мужчин недостаток андрогенов может вызвать замедленное половое созревание, бесплодие и импотенцию. У девочек избыток ТС в организме всегда является следствием нарушения функции надпочечников, а гиперсекреция у женщин может быть причиной гир- сутизма с вирилизмом разной степени, часто в сочетании с олигоменореей, аменореей и бес плодием. Количественное определение содержания тестостерона в сыворотке крови человека может быть использовано для оценки функционального состояния репродуктивной системы, а также при некоторых заболеваниях, связанных с гормональными нарушениями. Составлена: заместителем генерального директора, к.б.н. Е.М. Гавриловой, замести телем генерального директора Т.А. Поздняковой - сотрудниками ЗАО “НВО Иммунотех”; руководителем лаборатории эндокринологии , д.б.н., проф. Н.Д. Фанченко, с.н.с. лаборато рии эндокринологии, к.б.н. В.Г. Колодько - сотрудниками НЦАГиП РАМН. tf 2. ПРИНЦИП МЕТОДА Принцип метода основан на конкуренции тестостерона из измеряемой пробы и тесто стерона, меченного пероксидазой, за центры связывания специфичных к тестостерону моно клональных антител, иммобилизованных на поверхности лунок нолистиролового планшета. Количество связавшегося конъюгата тестостерон-пероксид аз а выявляют с помощью раство ра субстрата (тетраметилбензидина с добавлением перекиси водорода). Интенсивность окра ски продукта окисления субстрата обратно пропорциональна концентрации тестостерона, содержащегося в анализируемом образце. 3. СОСТАВ НАБОРА В состав набора входят следующие компоненты: - планшет 96-луночный полистироло вый, сенсибилизированный моноклональными антителами к тестостерону, готовый для использования - 1 шт.; - калибровочные пробы на основе сыворотки крови теленка, содержащие известные количества тестостерона: 0; 1,0; 3,0; 10; 30 и 60 нмоль/л; концентрации ТС в калибровочных пробах могут незначительно изменяться от серии к серии, точные значения концентраций указаны на этикетках флаконов, готовые для использования - 6 фл. (по 0,5 мл); - контрольная сыворотка на основе сыворотки крови человека с известным содержа нием тестостерона, готовая для использования - 1 фл. (0,5 мл); - конъюгат тестостерона с пероксидазой, готовый для использования - 1 фл. (12,5 мл); - фосфатно-солевой буферный раствор, pH 7,0+0,5, концентрированный - 1 фл. (15 мл); - раствор субстрата на основе тетраметилбензидина (ТМБ) с добавлением перекиси водорода, готовый для использования - 1 фл. (12,5 мл); - стоп-реагент (серная кислота, 0,2 М), готовый для использования - 1 фл. (15 мл); - пленка для заклеивания планшета - 1 шт. 4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Специфичность. Перекрестная реакция антител к тестостерону с другими стероидами приведена в таблице. Таблица Стероид Перекрестная реакция, % 5 - Дигидротестостерон 9 11 -Г идрокситестостерон 1 5 - Андростан-3,17-диол 1 Дегидроэпиандростерон сульфат 0,01 Дегидроэпиандростерон 0,008 Андростерон 0,08 Прогестерон 0,66 11-Гидроксипрогестерон 0,03 Дезоксикортикостерон 0,03 Кортикостерон 0,03 Чувствительность. Минимальная концентрация тестостерона, определяемая с помо щью набора, составляет не более 0,2 нмоль/л. Воспроизводимость результатов. Коэффициент вариации результатов определения концентрации тестостерона в одном и том же образце сыворотки крови не превьппает 8%. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на "открытие" тесто стерона - соответствие измеренной концентрации тестостерона предписанной в пробе, полу ченной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы 3,0 нмоль/л. Процент "открытия" составляет 90 - 110%. Линейность. Зависимость концентрации тестостерона в образцах сыворотки крови при разведении их сывороткой крови, не содержащей тестостерон, имеет линейный характер в диапазоне концентраций 1,0-60 нмоль/л и составляет 90 - 110%. Клиническая проверка набора. Концентрация тестостерона, определенная с помощью набора реагентов ИммуноФА-ТС, в сыворотке крови здоровых женщин не превышала 4,0 нмоль/л, в сыворотке крови здоровых мужчин составила 8,5-30 нмоль/л. Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора уточнить значения концентраций ТС, соответствующие нормальным для обследуемого контингента. 5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Потенциальный риск применения набора - класс 2а. Все компоненты набора, за исключением серной кислоты, в используемых концен трациях являются нетоксичными. Серная кислота действует на кожу и слизистые прижигающим образом, вызывая раз дражение и ожоги, поэтому в случае попадания на кожные или слизистые покровы следует ее немедленно тщательно смыть большим количеством проточной воды. При работе с набором и утилизации отходов следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и лич ной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно- эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.). При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые пер чатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфициро ванные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита и другие возбудители вирусных инфекций. 6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ: - Фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность раствора в лунках планшета при длине волны 450 нм; - термостат суховоздушный, поддерживающий температуру +(37+1 )°С; - секундомер; - шейкер; - пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным объемом со сменными на конечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 2-20 мкл, 50-200 мкл, 200-1000 мкл; - пипетка полуавтоматическая многоканальная с переменным объемом со сменными на конечниками, позволяющая отбирать объем жидкости 50-250 мкл; - стакан химический мерный или колба мерная вместимостью 300 мл; - бумага фильтровальная или салфетки марлевые; - вода дистиллированная; - перчатки резиновые или пластиковые. 7. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ 7.1. Приготовление рабочего раствора фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБР). Содержимое флакона с концентратом фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБР) перенести в мерный стакан или колбу вместимостью 300 мл, дважды ополоснуть флакон дистиллированной водой, все промывные воды объединить с разведенным ФСБР и довести общий объем раствора до 300 мл дистиллированной водой. Полученный рабочий раствор ФСБР можно хранить в закрытой емкости при темпера туре +(2-8)*^С не более 7 дней. Примечание. При хранении ФСБР могут образовываться кристаллы, поэтому перед отбором аликвоты ФСБР необходимо слабо подогреть флакон с буферным раствором, по местив его в водяную баню или термостат нри температуре +(37±1) °С до полного растворе ния кристаллов. 8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Построение калибровочной кривой необходимо проводить для каждой серии анализов. Внесение реагентов следует проводить согласно схеме на рис. 1. 1 6 10 11 12 А КП1 КП1 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС В КП2 КП2 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС С КПЗ КПЗ ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС D КП4 КП4 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС Е КП5 КП5 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС F КП6 КП6 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС G КС КС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС Н ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС Рис. 1. Схема заполнения лунок планшета. 8.1. Вставить в рамку необходимое количество лунок для калибровочных проб, кон трольной сыворотки и исследуемых образцов для постановки в дубликатах. Неиспользуемые стрипы необходимо тщательно заклеить пленкой для заклеивания планшетов и хранить в упаковке при температуре +(2-8)°С в течение всего срока годности набора. 8.2. В два ряда лунок планшета внести в дубликатах по 20 мкл калибровочных проб (КП), начиная с минимальной концентрации. 8.3. Внести в две лунки планшета по 20 мкл контрольной сыворотки (КС). 8.4. В оставшиеся лунки внести в дубликатах по 20 мкл исследуемых образцов сыво ротки крови (ИС). 8.5. Во все лунки планшета внести по 100 мкл конъюгата. Конъюгат вносить в лунки планшета в той же последовательности, что и калибровочные пробы, контрольную сыворот ку и исследуемые образцы. Продолжительность операции по внесению калибровочных проб, контрольной сыворотки и конъюгата не должна превышать 15 минут. 8.6. Тщательно перемешать содержимое лунок на шейкере при комнатной температу ре (+18-25°С) в течение 2-3 минут. 8.7. Закрыть планшет крышкой или пленкой для заклеивания планшетов и инкубиро вать при температуре +(37+1 )°С в течение 1 часа, избегая попадания прямого солнечного света. 8.8. Содержимое лунок удалить декантированием. Затем отмыть планшет. Для этого в каждую лунку планшета внести по 250 мкл рабочего раствора ФСБР (см п. 7.1), встряхнуть на шейкере в течение 1 минуты, после чего удалить содержимое лунок декантированием. Процедуру повторить еще 2 раза. После этого тщательно удалить остатки влаги из лунок, не сколько раз резко вытряхнув планшет о марлевую салфетку или фильтровальную бумагу. При автоматической промывке в каждую лунку планшета следует вносить 300-350 мкл рабочего раствора ФСБР. 8.9. Во все лунки планшета внести по 100 мкл раствора субстрата в той же последова тельности, что и конъюгат. Инкубировать планшет при температуре +(37+1)°С в темноте в течение 10-15 минут в зависимости от степени развития окраски. Примечание. При внесении раствора субстрата рекомендуется всегда использовать новые наконечники. 8.10. Внести во все лунки планшета с той же скоростью и в той же последовательно сти, как и раствор субстрата, по 100 мкл стоп-реагента. Тщательно перемешать содержимое лунок, поместив планшет на шейкер, при комнатной температуре в течение 1 минуты. 8.11. Измерить оптическую плотность в лунках планшета при длине волны 450 нм. Длительность процедуры измерения оптической плотности не должна превышать 15 минут. 2 т О 20 40 60 80 Тестостерон, нмоль/л Рис.2. Типичный калибровочный график, полученный с использованием набора ИммуноФА-ТС.