Набор реагентов для иммуноферментного определения пролактина в сыворотке и плазме крови (ПРЛ-ИФА) по ТУ 9398-001-38993771-2003 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Департамента государственного
контроля ле]^а15ственных средств и
медицинскбй техники Минздрава РФ
В.Е. Акимочкин
/Д.
2002 г.
И Н С Т Р У К Ц И Я
по применению набора реагентов для иммуноферментного
определения пролактина в сыворотке
и плазме крови
(ПРЛ-ИФА)
Рекомендована к утверждению экспертной комиссией
по наборам реагентов для иммуноферментного
(неинфекционные), радиоиммунологического и других
видов иммунохимического анализа Комитета по новой
медицинской технике Министерства здравоохранения
Российской Федерации.
(Протокол № 5 от 20 мая 2002 г.)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов ПРЛ-ИФА предназначен для количественного определения содержания
пролактина (ПРЛ) в сыворотке или плазме крови человека методом твердофазного иммунофер
ментного анализа.
1.2, Определение содержания пролактина в сыворотке (плазме) крови человека имеет
диагностическое значение при нарушении функций половых желез: у женщин могут отмечаться
гэлакторея, аменорея или другие нарушения менструального цикла; у мужчин - потеря либидо или
импотенция. Определение концентрации пролактина в крови важно как первичный тест на бесплодие.
Гиперпролактинемия отмечается при гипотиреоидизме. почечной недостаточности и у лиц с
пролактинсмой. Физиологическое повышение содержания пролактина в крови наблюдается во время
беременности, лактации, сна, а также при физическом и эмоциональном стрессе.
2. ПРИНЦИП РАБОТЫ НАБОРА
В основе определения концентрации пролактина лежит принцип твердофазного иммунофер
ментного анализа (ИФА), который включает иммунологическую реакцию антиген-антитело по сэндвич-
принципу и ферментативную реакцию, приводящую к изменению окраски раствора хромогена в
зависимости от концентрации пролактина. После измерения величины оптической плотности раствора
в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация пролактина в
анализируемых образцах.
Инструкция составлена Генеральным директором ООО «Диатех-ЭМ» канд. мед. наук К.Ш. Матевосян
и канд. мед, наук, доцентом кафедры акушерства и гинекологии ФПДО МГМСУ Л.Н, Ильенко
3. СОСТАВ НАБОРА:
- Планшет 96-луночный полистироловый с иммобилизованными на внутренней поверхност/i
лунок моноклональными антителами к пролактину человека -1 пакет;
- калибровочные пробы на основе сыворотки крови человека, аттестованные по Третьему
международному стандарту пролактина человека IS 84/500, содержащие известные количества
пролактина - 0; 100; 500; 1000; 2000; 4000 мкМЕ/мл; концентрации пролактина в калибровочных пробах
могут несколько отличаться от указанных величин, точные величины указаны на этикетках флаконов,
лиофильно высушенные или жидкие (0,4 мл) - 6 флаконов;
- концентрат конъюгата моноклональных антител к пролактину человека с пероксидазой
хрена - жидкий -1 флакон {0,5 мл) или лиофильно высушенный - 4 флакона;
- субстратный буфер Н2О2 - 1 флакон (12 мл);
- контрольная сыворотка на основе сыворотки крови человека с известным содержанием
пролактина, жидкая (0,5 мл) или лиофильно высушенная -1 флакон;
- фосфатный буферный раствор -1 флакон (12 мл);
- тетраметилбензидин -1 флакон (3,0 мл);
- промывочный буфер (10 х концентрат) -1 флакон (10 мл);
- стоп-реагент (2 М серная кислота), готов к использованию -1 флакон (12 мл).
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Специфичность. Не обнаружено перекрестных реакций с гормоном роста, хорионическим
гонадотропином, плацентарным лактогеном, лютеинизирующим, фолликулостимулирующим и
тиреотропным гормонами.
4.2. Воспроизводимость. Коэффициент вариации результатов определения содержания пролактина
в одном и том же образце с использованием набора ПРЛ-ИФА не превышает 8%.
4.3. Линейность. Зависимость концентрации пролактина в образцах сыворотки (плазмы) крови при
разведении их сывороткой (плазмой) крови, не содержащей пролактин, имеет линейный характер в
диапазоне концентраций 100-4000 мкМЕ/мл и составляет +10%.
4.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на "открытие" пролактина -
соответствие измеренной концентрации пролактина предписанной, полученной путем смешивания
равных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы 500 мкМЕ/мл. Процент " открытия"
составляет 90-110%.
4.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концентрация пролактина
не превышает 50 мкМЕ/мл.
4.6. Клиническая проверка. Концентрация пролактина в сыворотке (плазме) крови составляет; у
мужчин 50-500 мкМЕ/мл; у женщин: в фолликулиновой фазе -60 - 505 мкМЕ/мл, в периовуляторной
фазе- 150 - 800 мкМЕ/мл, в лютеиновой фазе 100 - 700 мкМЕ/мл.
4.7. Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора уточнить значения
концентрации пролактина, соответствующие нормальным у обследуемого контингента людей.
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Потенциальный риск применения набора -2а.
5.2. Все компоненты набора, за исключением стоп-реагента (раствор серной кислоты), являются
нетоксичными.
Раствор серной кислоты обладает раздражающим действием. Следует избегать его
разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые; при попадании на кожу и слизистые следует
промыть пораженный участок большим количеством проточной воды.
5.3. При работе с набором следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности,
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в
лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы
Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).
5.4. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки,
так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные
длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель
вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ:
- фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность
раствора в лунках при длине волны 450 нм;
- термостат, поддерживающий температуру +37 °С ±0,1 °С;
- пипетки полуавтоматические одноканальные со сменяемыми наконечниками, позволяющие
отбирать объемы жидкости 50; 100; 200 и 1000 мкл;
- пипетка полуавтоматическая многоканальная со сменяемыми наконечниками, позволяющая
отбирать объемы жидкости 50; 100 и 200 мкл;
“ колба мерная вместимостью 100 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые;
- бумага фильтровальная.
7. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА
7.1. Перед проведением анализа компоненты набора и исследуемые образцы сыворотки
(плазмы) крови следует выдержать при комнатной температуре (+18-25° С) в течение времени не
менее 30 мин.
7.2. Приготовление калибровочных проб и контрольной сыворотки.
В каждый флакон с калибровочными пробами и с контрольной сывороткой внести по 400 мкл
дистиллированной воды и тщательно перемешать, избегая образования пены, до полного растворения
лиофилизата. Хранить при температуре +2-8 °С не более 5 дней.
7.3. Приготовление раствора конъюгата.
Во флакон с фосфатным буферным раствором внести 300 мкл концентрата конъюгата и
тщательно перемешать, избегая вспенивания. Хранить при температуре +2-8 °С не более 5 дней.
4
7.4. Приготовление рабочего промывочного буфера.
В мерную колбу вместимостью 100 мл количественно перенести содержимое флакона с
концентрированным промывочным буфером и довести дистиллированной водой объем до метки.
Хранить при температуре +2-8 °С не более 7 дней.
7.5. Приготовление субстратно-хромо генной смеси.
Субстратно-хромогенную смесь готовить непосредственно перед использованием! Во флакон
с субстратным буфером Н2О2 внести содержимое флакона с раствором тетраметилбензидина и
тщательно перемешать. Приготовленный раствор до использования хранить в темном месте,
хранению не подлежит.
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Внести в соответствующие лунки в дубликатах по 50 мкл каждой калибровочной пробь и по
50 мкл контрольной сыворотки. В остальные лунки внести в дубликатах по 50 мкл анализируемых
образцов сыворотки (плазмы) крови.
8.2. Внести во все лунки в тойж е последовательности, что и калибровочные пробы и
анализируемые образцы, по 100 мкл рабочего раствора конъюгата.
8.3. Внесение калибровочных проб, контрольной сыворотки, анализируемых образцов и рабочего
раствора конъюгата необходимо проводить быстро, в течение времени не более 10-15 мин. Закрыть
планшет крышкой и инкубировать в течение 30 мин при температуре +37° С.
8.4. По окончании инкубации удалить содержимое лунок декантированием и промыть лунки
планшета 4 раза {используя 12-канальную полуавтоматическую пипетку), добавляя при ка>едой
промывке во все лунки по 200 мкл рабочего промывочного буфера с последующим декантированием.
При каждом декантировании тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием планшета в
перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Промывку лунок планшета можно проводить и при помощи прибора для промывания планшетов.
8.6. Внести во все лунки по 100 мкл субстратно-хромогенной смеси, закрыть планшет крышкой
и инкубировать при температуре +37 ° С в течение 10 мин в темноте.
8.6. Внести во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и субстратно
хромогенную смесь по 100 мкл стоп-реагента.
8.7. Измерить величину оптической плотности (ОП) растворов в лунках планшета на фотометре
вертикального сканирования при длине волны 450 нм в течение 10 мин после остановки реакции.
Если программа фотометра позволяет вычитать величину ОП в лунках с калибровочной
пробой О мкМЕ/мл из значений ОП всех остальных лунок, то для дальнейших расчетов необходимо
использовать величину В - среднее арифметическое значение величины ОП в лунках, содержащих
калибровочные и анализируемые пробы. Если программа фотометра не позволяет вычитать величину
ОП лунок с калибровочной пробой О мкМЕ/мл, то необходимо воспользоваться формулой В-Во, где Во
- среднее арифметическое значение величины ОП в лунках с калибровочной пробой О мкМЕ/мл.
8.8. Построить в линейных координатах калибровочный график: ось абсцисс •*- концентрация
пролактина в калибровочных пробах (мкМЕ/мл), ось ординат- ОП калибровочных проб (ОП450),
8.9. Определить по калибровочному графику содержание пролактина в анализируемых пробах.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Набор реагентов ПРЛ-ИФА должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при
температуре +2-8°С в течение всего срока годности (6 мес). Допускается хранение набора при
температуре до +25°С не более 5 сут,
9.2. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 41 неизвестных образцов, 6
калибровочных проб и 1 пробы контрольной сыворотки (всего 96 определений).
9.3. В случае дробного использования набора компоненты следует хранить следующим
образом:
- рабочий раствор конъюгата можно хранить при температуре +2-8°С не более 5 дней;
- субстратный буфер Н2О2, тетраметилбензидин , фосфатный буферный раствор, стоп-реагент
после вскрытия флаконов можно хранить при температуре +2-8° С в течение всего срока годности
набора;
- калибровочные пробы и контрольную сыворотку после приготовления можно хранить при
температуре +2-8° С не более 5 дней; при необходимости более длительного хранения - при
температуре -20° С в течение всего срока годности набора;
- рабочий промывочный буфер стабилен при температуре +2-8°С не более 7 дней;
- неиспользованные стрипы после вскрытия пакета хранятся в герметичных условиях при
температуре +2-8°С в течение всего срока годности набора;
- раствор субстратно-хромогенной смеси хранению не подлежит.
9.4 Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную, мутную сыворотку
крови, а также сыворотку (плазму) крови, содержащую азид натрия.
9.5. Исключается использование образцов крови людей, получавших для диагностики или
терапии препараты, в состав которых входят мышиные антитела.
9.6 При использовании набора для проведения нескольких независимых серий анализов
следует иметь в виду, что для каждого независимого определения необходимо построение новой
калибровочной кривой; кроме этого, рекомендуется определение концентрации пролактина в
контрольной сыворотке.
9.7, Внимание! Если концентрация пролактина в анализируемой пробе превышает 4000
мкМЕ/мл, следует развести анализируемый образец буферным раствором для разведения образцов и
полученный результат умножить на коэффициент разведения.
9.8, Запрещается использовать стоп-реагенты из наборов других фирм-производителей.
9.9, Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора ПРЛ-ИФА, следует обращаться в
ООО "Диатех-ЗМ" по адресу;
117418, г. Москва, ул. Цюрупы, д. 3.
Тел: (095) 129 55 22
Факс; (095) 129 28 67
и в Институт государственного контроля лекарственных средств ФГУ "НЦ ЭСМП" М3 РФ
по адресу:
117246, г. Москва, Научный проезд, д. 14а
Тел: (095) 120 60 95, 120 60 96
Генеральный директор ООО «Диатех-ЭМ»,
кандидат медицинских наук К. Ш. Матевосян
Доцент кафедры акушерства и гинекологии
ФПДО МГМСУ,
кандидат медицинских наук л. Н. Ильенко
■ / И .,:"
У
/