Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител класса IgG к Treponema pallidum (РекомбиБест антипаллидум-IgG) по ТУ 9398-068-23548172-2007 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2007/00616 от 17.08.2007 · класс риска 2б

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Treponema pallidum антитела класса иммуноглобулин G (IgG) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 375 контрактов, медианная цена за единицу 4 679 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
Главны й государственны й 
санитарны й врач 
Р оссийской Ф едерации
__________________Г.Г. О нищ енко
«___» _____________2007 г.
№
УТВЕРЖДАЮ
И Н С Т РУ К Ц И Я  п о  П Р И М Е Н Е Н И Ю
набора реагентов для иммуноферментного вы явления  
антител класса IgG к Treponem a pallidum  
«Реком биБест антипаллидум -  IgG»
ком плект 1
К ом плект 1  набора реагентов « Р еком биБ ест антипаллидум  -  IgG » представляет 
собой д и агностически й набор реагентов для проведения им м ун оф ерм ентного анализа 
(И Ф А ) на твёрдоф азн ом  носителе.
СОСТАВ КОМПЛЕКТА
-  план ш ет с им м обили зованн ы м и реком бин антны м и антигенам и Treponem a pallidum ;
-  п олож и тельн ы й контрольны й образец (К^), ин активированны й -  лиоф и ли зирован- 
ная сы воротка крови человека, содерж ащ ая ан ти тела к Treponem a pa llid u m  - ам орф ная 
м асса белого или светло-ж елтого цвета, гигроскопична;
-  отри ц ательн ы й  контрольны й образец  (К~), ин активированны й -  лиоф и ли зирован- 
ная сы воротка крови здоровы х доноров, не содерж ащ ая ан ти тела к Treponem a pallidum
-  ам орф ная м асса белого или светло-ж елтого цвета, гигроскопична;
-  конъю гат -  козьи ан ти тела к IgG  человека, конъю гированн ы е с пероксидазой хре­
на, л и о ф и ли зи рован н ы й  -  ам орф ная м асса белого или светло-ж елтого цвета, гигроско­
пична;
В зам ен и н с т р у к ц и и ,у т в е р ж д е н н о й  14,01.2001 г.


--- стр. 2 ---
«С О Г Л А С О В А Н О » «С О Г Л А С О В А Н О »
Директор ФГУН ГИСК
им. Л.А. Тарасевича Роспотребнадзора,
Руководитель НОК МИБП
Н.В. Медуницын
2007 г.« »
Директор
ФГУ «ЦНИКВИ Росздрава»


--- стр. 3 ---
-  раствор для п редвари тельн ого разведения (Р П Р ) -  прозрачная бесцветная жид- 
кость;
-  раствор для р азведения сы вороток (PC ) -  непрозрачная ж идкость оран ж ево­
красного цвета;
-  раствор для разведен и я конъ ю гата (РК ) -  непрозрачная ж и дкость светло-серого 
цвета;
-  25-кратны й кон ц ен трат ф осф атн о-солевого буф ерного р аствора с твином  (Ф СБ- 
Т х25) -  п розрачн ая или слегка опалесци рую щ ая бесц ветная ж идкость, возм ож но вы ­
падение осадка солей, растворяю щ егося р астворяю щ егося при нагреван ии до тем п ер а­
туры  (35-37) °С;
-  субстратйы й буф ерн ы й раствор (С Б Р) -  п розрачн ая б есц ветная ж идкость;
-  тетр ам ети л б ен зи д и н  (Т М Б ), конц ентрат -  п розрачн ая бесц ветная ж идкость;
-  стоп-реагент -  раствор серной кислоты , 1  м оль/л -  прозрачн ая бесцветная ж ид­
кость.
А кти вны м и ком пон ентам и набора являю тся реком б и н ан тн ы е ан ти гены  Treponem a  
p a llidum , и м м о б и л и зо ван н ы е в лунках план ш етов, конъю гат (ан ти тела к IgG человека, 
м еченны е п ероксидазой хрена), полож и тельн ы й  и отри ц ательн ы й  контрольны е образ­
цы сы вороток.
С пособ о п ределения IgG  к Treponem a p a llid u m пр едставл яет собой твер д о ф аз­
ный им м ун оф ерм ентны й анализ, в ходе которого при взаи м одействи и исследуем ы х 
образцов сы вороток крови с и м м обили зованн ы м и на поверхности лунок планш ета ре­
ком бинантны м и ан ти ген ам и  п рои сходи т связы ван и е сп ец и ф и ч ески х антител и образо­
вание ком плекса «ан ти ген-антитело», ко 1 оры й вы являю т с пом ощ ью  им м уноф ерм ент- 
ного конъю гата.
Н абор рассчи тан  на проведени е 1 9 2 (2 x 9 6 ) анализов, вклю чая контроли (по 5 
лунок каж дого п лан ш ета и спользую т для постановки контролей). Н абор содерж и т все 
необходим ы е для проведени я ан али за реагенты , кром е д и сти лл и р о ван н о й  воды.


--- стр. 4 ---
Н АЗН АЧ ЕН И Е
Н абор предн азначен для вы явлени я сп ец и ф и чески х антител (IgG ) к возбудите­
лю  си ф илиса в сы воротке (плазм е) крови и ликворе человека и реком ен дуется для д и ­
агностики сиф илиса.
С П О С О Б П РИ М ЕН ЕН И Я
П ри подготовке к проведени ю  ан ализа и его вы п олн ени и следует соблю дать м е­
ры предосторож ности, при няты е для работы  с п отен ци альн о ин ф екци онн ы м  м атериа­
лом: работать в рези н о вы х  перчатках; не пи пети ровать растворы  ртом ; все использо­
ванны е м атериалы  п одвергать обработке дези н ф и ц и рую щ и м  раствором  (наприм ер, 
6 %  раствором  перекиси водорода, врем я эксп озици и не м енее 6 часов).
Внимание!  Т щ ательное соблю дение описанны х ниже требований п о зв о л и т  
избежать искажения результатов ИФА.
-  Д ля при готовлени я растворов и проведени я И Ф А  следует использовать чис­
тую  м ерную  посуду и автом атически е пи петки с погреш н остью  изм ерения объём ов не 
более 5 %.
-  Ж ел ательн о исп ользовать свеж еотобран н ы е образцы  сы воротки (плазм ы ) 
крови. Д оп ускается и сп ользован и е образцов, хран ивш ихся при тем п ературе (2-8) °С не 
более 5 суток, л и б о при тем п ературе м инус (20 ± 3)°С не более 1  м есяца.
-  С ы воротки, со д ерж ащ и е взвеш ен ны е частицы , м огут дать неправи льн ы й р е­
зультат. П оэтом у п еред постановкой И Ф А  их следует ц ентриф уги ровать в течение 10- 
15 мин при 3000 об/м ин.
-  Н ельзя использовать сы воротки с при знакам и м икробн ой контам инации, ге- 
м олизированны е, ги перлип идны е, подвергавш иеся м ногократном у зам ораж и вани ю  и 
оттаиванию .
-  П еред постановкой реакц ии все ком пон енты  набора н еобходи м о вы держ ать 
не м енее 30 м ин при тем п ературе (18-25) °С.
-  К он трольн ы е образцы , концент])ированны й раствор кон ъ ю гата долж ны  быть 
приготовлены , как м иним ум , за 15 м инут до их использовани я.
-  П осле п остановки реакц ии плолно закры ты е ф лаконы  с оставш им и ся исход­
ными ком пон ентам и следует хранить при тем пературе (2-8) °С не более 1  месяца.


--- стр. 5 ---
-  РасГтвор ТМ Б и раствор конъ ю гата в рабочем  р азведении готовить непосред­
ственно перед и спользовани ем . С ледует исклю чить воздей ствие прям ого света на рас­
твор ТМ Б.
-  П ри пром ы вке лунки план ш ета зап олн ять полн остью  (не м енее 300 мкл про­
м ы вочного раствора) и не касаться лунок н аконечни кам и пипетки. В рем я меж ду за­
полнением  и оп орож н ен и ем  лунок д о л ж н о  составлять не м енее 30 с.
-  П ри использовани и автом ати ческого или ручного п ром ы вателя необходим о 
следить за состояни ем  ем кости с п ром ы вочн ы м  раствором  и со ед и н и тел ьн ы х  ш лангов, 
не допуская образован ия в них м икробн ы х заростов. Д ля этого раз в неделю  ж елатель­
но ем кость ,^ля пром ы вочн ого р аство р а и ш ланги п ром ы вать 70 %  этиловы м  спирчом.
-  Н ельзя допускать вы сы хания лунок м еж ду отдельн ы м и операциям и.
-  П ри постановке И Ф А  нельзя использовать ком поненты  из наборов разны х се­
рий или см еш ивать их при п ри готовлен и и  растворов, кром е несп ец и ф и чески х ком по­
нентов (Ф С Б -Т х25, С БР, Т М Б, стоп-реагент), которы е взаи м озам ен яем ы  во всех набо­
рах ЗА О  «В ектор-Б ест».
-  Зап рещ ается м ногократн ое использовани е план ш ета для предвари­
тел ьн о го  нанесения сы вороток.
-  Н акон ечн и ки  для пипеток, и сп ользован н ы е для работы  с исследуем ы м и сы ­
вороткам и и контрольны м и образцам и , следует о б еззараж и вать 6 %  перекисью  водо- 
рода в течен и е 6 часов (другие д ези н ф и ц и рую щ и е растворы  не и спользовать!). С леду­
ет прим енять п ласти ковы е наконечни ки однократн ого использовани я; в случае по­
вторного прим енения наконечни ки следует пром ы ть 10 раз проточной водой, 3 раза 
дисти лли рован н ой  водой и проки пятить в течен и е 40 м инут в п оследн ей порции д и с­
тиллирован ной воды , чтобы  избавиться от следов перекиси.
-  П осуду (п ласти ковы е ванночки), наконечни ки для пипеток, прим еняем ы е 
для работы  с остальны м и реагентам и, нет н еобходи м ости обрабаты вать дези н ф и ц и ­
рую щ им и р астворам и  и м ою щ им и средствам и , т.к. они не со д ер ж ат инф екционного 
агента. В случае повторн ого использовани я посуду (пласти ковы е ванночки), наконеч­


--- стр. 6 ---
ники для пипеток следует п ром ы вать п роточной водой, тщ ательн о и м ногократно опо­
ласкивая д и сти лл и р о ван н о й  водой.
-  Д ля работы  с раствором  Т М Б  реком ен дуется вы делить отдельную  посуду 
(пластиковы е ван ночки) и наконечни ки для пипеток. В случае п овторн ого и спользова­
ния сразу после работы  их необходи м о пром ы ть 50 %  раствором  этилового спирта, а 
затем  - д и сти лли рован н ой  водой.
-  П ипетки и раб оч и е п оверхности л аб о р ато р н ы х  столов и при боров следует об­
рабаты вать 70 %  раствором  этилового спирта. Н ельзя исп ользовать перекись водоро­
да, хлорам ин и т.д.
1. П Р И Г О Т О В Л Е Н И Е  Р Е А Г Е Н Т О В
1.1 П ромы вочны й раствор
В зболтать сод ерж и м ое ф лакона с Ф С Б -Т х25. П ри вы п адени и осадка солей в 
концентрате прогреть его перед разведением  при тем пературе (35-37) °С до полного 
растворения'^осадка.
С одерж и м ое одного ф лакона с ФСБ-Т><25 развести ди сти лл и р о ван н о й  водой до 
700 мл.
Х р а н ен и е: до 72 ч при т ем перат уре (2-8) °С.
1.2 К онтрольны е образцы
Растворить контрольны е образцы  и К* добавлени ем  в каж ды й флакон по 
200 мкл РПР.
Х р а н ен и е: до 1 м еся ц а  при т ем перат уре (2-8) °С.
1.3 Растворы  конъюгата
Внимание! Д л я  р а б о т ы  с конъ ю гат ом  р еко м ен д уем  использоват ь одноразовы е 
наконечники для пипет ок.
П риготовить кон ц ен три рован н ы й  раствор конъ ю гата путём  растворения содер­
ж им ого ф лакона с конъю гатом  в 1,0 мл РПР.
Х р а н ен и е: ко н ц ент р и р о ва нны й  р а ст во р  ко нъ ю гат а -  до I м еся ц а  при т ем пе­
р а т ур е (2-8) °С.
Внимание! Р аст во р  ко нъ ю гат а в р а б о ч ем  р а звед ен и и  гот овит ь непосредст ­
венно перед использованием !
5


--- стр. 7 ---
О тобрать из ф лакона необходи м ое количество (подбирается производителем  
для каж дой серии наборов и указы вается в инструкции, вклады ваем ой в набор) кон­
центрированного р аствора конъю гата и внести во ф лакон с раствором  для разведения 
конъю гата (РК ), тщ ательн о  перем еш ать.
1.4 Раствор ТМ Б в рабочем разведении
Внимание! Р аст во р  Т М Б  гот овит ь непосредст венно перед использованием .  
Р еком ендует ся вы делят ь на ко н ечни ки  для пипет ок, кот оры е использоват ь т олько  
для р а б о т ы  с ТМБ.
В содерж и м ом  ф лакона с С БР раствори ть 0,65 мл Т М Б , тщ ательн о  перемешсггь. 
П ри п ри готовлени и р аствора Т М Б  следует исклю чить воздей ствие света.
Х р а н ен и е: до 3 ч в за щ и щ енн о м  от  свет а м ест е при ко м на т но й  т ем перат уре 
(18-25)  °С.
2. П Р О В Е Д Е Н И Е  И М М У Н О Ф Е Р М Е Н Т Н О Г О  А Н А Л И ЗА
2.1. П риготовить п р о м ы в о ч н ы й  р а с т в о р  (п. 1.1), контрольны е образцы  (п. 1.2), 
к о н ц е н т р и р о в а н н ы й  р а с т в о р  к о н ъ ю га т а  (п. 1.3).
Все растворы  долж н ы  бы ть ком натн ой тем пературы  (1 8 -2 5 ) °С.
2.2. В о все лунки план ш ета внести по 90 мкл раствора для разведения сы вороток
(PC).
В 2 лунки план ш ета внести по 10 мкл полож и тельн ого контрольного образца 
(К+), в 2 лунки -  по 10 мкл о три ц ательн ого кон трольного образц а (К “), в 1  лунку -  10 
мкл PC (контроль конъю гата), в остальны е лунки -  по 10 мкл цельн ы х испы туем ы х 
сы вороток. В несение сы во р о т о к долж но со провож дат ься т щ ат ельны м  п ерем еш ива­
нием  (пипет ирование не м ен ее 4 р а з).
П ланш ет заклеи ть лип кой плен кой и инкубировать 30 м ин при тем пературе 
(3 7 ± 1 )°С .
За 5-10 м ин до окончан ия инкубации п ри готовить раствор конъ ю гата в рабочем  
разведении (п, 1.З.).
2.3. П о окончан ии инкубации содерж и м ое лунок собрать в сосуд с д ези н ф и ц и ­
рую щ им раствором , пром ы ть лунки п лан ш ета 5 раз пром ы вочн ы м  раствором  с пом о­
щ ью  вош ера или вручную  (используя м ногоканальную  пипетку).


--- стр. 8 ---
П ри этом  каж дую  лунку н еобходи м о зап олн ять п олн остью  (не м енее 300 мкл 
пром ы вочного раствора).
Н еобходим о д об и ваться полного опорож н ени я лунок после каж дого их зап ол­
нения. В рем я м еж ду зап олн ен и ем  и опорож н ени ем  лунок до л ж н о  бы ть не менее 
30 сек.
По окончан ии пром ы вки н еобходи м о тщ ательн о удалить влагу из лунок, посту­
кивая перевернуты м  план ш етом  по слож ен ной в несколько слоев ф ильтровальной бу­
маге.
2.4. В каж дую  лунку внести по 100 мкл раствора конъю гата в рабочем  разведе­
нии.
П ланш ет заклеи ть пленкой и ин кубировать 30 м ин при тем п ературе (37±1) °С.
2.5. П о окончан ии инкубации пром ы ть лунки 5 раз п ром ы вочн ы м  раствором  и 
удалить влагу как опи сан о вы ш е (п. 2.3).
2.6. П риготовить раствор ТМ Б в рабочем  р азведении (п. 1.4).
В нести в каж дую  лунку по 100 мкл р аствора ТМ Б. П лан ш ет пом естить на 
30 мин в заш и щ ен н ое от света м есто при тем пературе (18-25) °С.
2.7. О станови ть реакцию  д обавлен и ем  в лунки по 100 мкл стоп-реагента и через 
2-3 м инуты  изм ери ть оптическую  плотность (О П ).
С ледует  избегат ь попадания ст оп-реагент а на о деж ду и от кры т ы е уча ст ки  
тела. П ри попа да ни и —  пром ы т ь больш им  количест вом  воды.
УЧЁТ РЕЗУ Л ЬТАТО В
Р езультаты  И Ф А  реги стри ровать с пом ощ ью  сп ектроф отом етра, изм еряя опти­
ческую  плотность (О П ) в двухволновом  реж им е: основной ф ильтр -  450 нм, реф еренс- 
ф ильтр -  в ди ап азо н е 620-650 нм. Допусл им а реги страци я результатов только с ф ильт­
ром 450 нм. В ы веден и е сп ектроф отом етра на нулевой уровень («бланк») осущ ествлять 
по воздуху.
Р езультаты  и сслед ован и й  учиты вать только в том  случае, если значения ОП в 
лунках с контролем  конъю гата и К “ не более 0,2, а в лунках с не м енее 0,8.
И сследуем ую  сы воротку р асц ен и ваю т как полож и тельн ую , если соответствую ­
щ ее ей зн ачен и е О П  превы ш ает или равн о вели чи не ОП^р„,„, которую  вы числяю т по 
формуле:
7


--- стр. 9 ---
o n ,,,,,,, = ОПер(К-) + 0,2
где ОПср(К~) —  средн ее зн ачен и е О П  для отри ц ательн ого контрольного образца.
О П РЕД ЕЛ ЕН И Е ТИ ТРА  АН ТИ ТЕЛ  В ВЫ Я ВЛ ЕН Н Ы Х 
П О Л О Ж И ТЕЛ ЬН Ы Х  О БРА ЗЦ А Х
Если н еобходи м о определи ть титр антител в вы явлен н ы х полож и тельн ы х об­
разцах, п роводят их титрован ие.
В нести в лунки верхнего ряда п лан ш ета (А -1, А -2, ... А -1 1) по 180 мкл PC. В ос­
тальны е лунки, кром е лунок 12-го ряда, внести по 100 мкл PC.
Затем в одну лунку верхнего р яда (ряд А ) внести 20 мкл об разц а цельной сы во­
ротки или плазм ы . Т щ ательн о перем еш ать раствор пи пети ровани ем , после чего пере­
нести 100 мкл в соответствую щ ую  лунку второго гори зон тальн ого р яда (ряд В), тщ а­
тельно перем еш ать пи пети ровани ем  и перенести 100 мкл в соответствую щ ую  лунку 
третьего гори зон тальн ого р яда (ряд С) и т.д. до 8 ряда. И з лунки 8 ряда (ряд Н) ото­
брать 100 мкл р аство р а и слить их в д ези н ф и ц и рую щ и й  раствор. То ж е проделать с 
остальны м и образцам и.
Таким  образом , в каж дом  верти кальн ом  ряду получаю т п оследовательн ы е 2- 
кратны е р азведения образца от 1:10 до 1:1280.
В последнем , 12-ом, вертикальном  ряду поставить К + и К~ в разведении 1:10 и 
контроль конъю гата.
Заклеить плен кой п лан ш ет и ин кубировать 30 мин при TCMnepaiype (37±1) °С. 
Д алее проведени е ан али за осущ ествлять в соответстви и с настоящ ей инструкцией, как 
описано вы ш е.
За ти гр  ан ти тел к Treponem a p a llid u m в образце п ри н и м аю т м аксим альное раз- 
ведение образца, при котором  р еги стри рую т полож и тельн ы й  результат, т.е. ОП  образ­
ца превы ш ает или р авн а ОП,,р„„, (ОП,,^,,,,, = ОПср(К“) + 0,2).
И С С Л ЕДО ВА Н И Е Л И К ВО РА
И сследован ие л и кво р а м ож но осущ ествлять од н оврем ен н о с исследованием  сы ­
вороток. П ри этом  исп ользую т р азведен и е 1:1 образц а л и кво р а в PC (в лунку вносят 
50 мкл исследуем ого об разц а л и кво р а и д о б авл яю т 50 мкл PC ), а при проведении вто­


--- стр. 10 ---
рой ф азы  реакц ии кон ъ ю гат необходи м о использовать в конц ентрац ии , в 4 раза более 
вы сокой, чем при и сслед ован и и  сы воротки или плазм ы .
Например-,  если для ан али за сы вороток требуется взять а  мкл концентрированно- 
го раствора конъю гата и см еш ать с содерж и м ы м  ф лакона с РК (см. п. 1.3), то для ан а­
лиза ли квора следует взять 4 х а  мкл кон ц ен три рован н ого р аство р а конъю гата и см е­
ш ать с содерж и м ы м  ф лакона с РК.
П роведени е ан али за осуш ествляю т в соответстви и с настояш ей инструкцией, 
как описано вы ш е. Д ля контроля качества проведени я ан ализа и расчета ис­
пользую т контрольны е сы воротки , входящ и е в состав набора.
У чёт результатов осущ ествляю т в соответстви и с настоящ ей инструкцией, как 
описано выш е.
Т и трован и е л и к во р а п роводят ан алогично ти трован и ю  сы вороток, только в 
верхню ю  лунку верти кальн ого р яда следует внести 100 мкл PC и 100 мкл образца ли к­
вора. К он ъ ю гат использую т в той ж е конц ентрац ии , что и для качествен ного исследо­
вания ли квора (см. вы ш е). У чёт результатов осущ ествляю т, как опи сан о выш е.
ФОРМА ВЫПУСКА
К ом плект 1  н абора « Р еком б и Б ест ан ти паллидум  -  IgG » состои т из 11 ком пон ен­
тов, упакованн ы х в коробку:
-  П ланш ет с им м об и ли зован н ы м и  реком б и н ан тн ы м и  ан ти генам и Treponem a  
pallid u m —  2 ш т;
-  П олож ительн ы й контрольны й образец  (К^), ин активи рованн ы й —  1  фл;
-  О три цательны й контрольны й образец  (К “), ин активи рованн ы й —  1  фл;f c ?
-  К онъю гат —  1  фл. или 2 фл;
-  Раствор для п р едвари тельн ого р азведения (РП Р) -  1  фл., 3,0 мл;
-  Раствор для разведен и я сы вороток (PC ) —  1  фл., 28,0 мл;
-  Раствор для разведен и я кон ъ ю гата (РК ) —  2 фл. по 13,0 мл;
-  Т етрам ети лбен зи д и н  (Т М Б ), к о н ц е н т р а т —  1  фл., 1,5 мл;
-  25-кратны й ко н ц ен тр ат ф осф атн о-солевого буф ерного раство р а с твином  (Ф СБ- 
Т х25) —  2 фл. по 28,0 мл;
-  С убс 1р а т н ы й  буф ерн ы й раствор (С Б Р) —  2 фл. по 13,0 мл;
-  С т о п -р е а ге н т —  1  фл., 21,0 мл.


--- стр. 11 ---
С РО К годности. УС Л О ВИ Я  Х РА Н ЕН И Я  и ТРА Н С П О РТИ РО ВА Н И Я
С рок годности набора -  12 м есяцев.
Н аборы  хран ить и тран сп о р ти р о вать при тем п ературе (2-8) °С. Д опускается 
тран сп орти рован и е при тем п ературе до 25 °С не более 10 суток. Зам ораж иван ие не 
допускается.
Р еклам ац ии на качество набора направлять:
В Ф ед еральн ое Г осударственн ое У чреж дение «Ц ентральны й к о ж ­
но-венерологический институт (Ф ГУ «Ц Н И К ВИ  Росздрава») (107076, г. М осква,  
ул. К ороленко, д. 5, ст роение б, тел. (4 9 5 )-9 б 4 -3 9 -1 7);
и в адрес п редп ри яти я-и зготови теля ЗАО «В ектор-Бест» {630559, Н овосибир­
ская обл., Н о во си б и р ски й  район, п. К ольцова, ЛБК,  тел. (383)-336-73-46, т ел./ф акс  
(383) -332-67-49).
Г ен еральны й 
ЗА О  «В ектор- М .Д . Х усаинов
10


--- стр. 12 ---
Главны й государственны й 
санитарны й врач 
Р оссийской Ф едерации
__________________Г.Г. О нищ енко
«___» _____________2007 г.
№
УТВЕРЖДАЮ
И Н С Т РУ К Ц И Я  п о  П РИ М Е Н Е Н И Ю
набора реагентов для им муноферментного вы явления  
антител класса IgG к Treponem a pallidum  
«Реком биБест антипаллидум -  IgG»
ком плект 2
К ом плект 2 набора реагентов « Р еком биБ ест антипаллидум  -  IgG » представляет 
собой ди агн ости чески й  набор реагентов для проведения им м ун оф ерм ентного анализа 
(И Ф А ) на твёрдоф азн ом  носителе. ’
СОСТАВ КОМПЛЕКТА
-  план ш ет разборны й с и м м обили зованн ы м и реком бин антны м и антигенам и Tre­
p o n em a  p a llid u m ’ ,
-  п олож и тельн ы й контрольны й образец  (К^), инактиви рованн ы й -  лиоф и ли зирован- 
ная сы воротка крови человека, содерж ащ ая ан ти тела к Treponem a p a llid u m  - аморфная 
м асса б елого или светло-ж елтого цвета, гигроскопична;
-  отриц ательн ы й контрольны й образец  (К ), ин активи рованн ы й -  лиоф и ли зирован- 
ная сы воротка крови здоровы х доноров, не содерж ащ ая ан ти тела к Treponem a pallidum
-  ам орф ная м асса белого или светло-ж елтого цвета, гигроскопична;
-  конъю гат -  козьи ан ти тела к IgG  человека, конъю гированн ы е с пероксидазой хре­
на, л и о ф и ли зи рован н ы й  -  ам орф ная м асса белого или светло-ж елтого цвета, гигроско­
пична;
В зам ен инст рукципу ут ве р ж д е н н о й  14.01.2001 г.


--- стр. 13 ---
« С О Г Л А С О В А Н О » « С О Г Л А С О В А Н О »
Директор ФГУН ГИСК
им. Л.А. Тарасевича Роспотребнадзора,
Руководитель НОК МИБП
____________Н.В. Медуницын
« » 2007 г.
Директор
ФГУ «ЦНИКВИ Росздрава»


--- стр. 14 ---
-  раствор для п редварительного р азведения (РП Р) -  прозрачная бесц ветная ж ид­
кость;
-  раствор для разведения сы вороток (PC ) -  непрозрачная ж идкость оранж ево­
красного цвета;
-  раствор для разведения конъю гата (РК ) -  непрозрачная ж идкость светло-серого 
цвета;
-  25-кратны й конц ентрат ф осф атн о-солевого буф ерного раствора с твином  (Ф СБ- 
Т х25) -  прозрачная или слегка опалесци рую щ ая бесцветная ж идкость, возм ож но вы ­
падение осадка солей, растворяю щ егося растворяю щ егося при нагреван ии до тем пера­
туры  (35-37) °С;
-  субстратны й буф ерны й раствор (С Б Р) -  прозрачная бесцветная ж идкость;
-  конц ентрат тетр ам ети л б ен зи д и н а (Т М Б ) -  прозрачная бесцветная ж идкость;
-  сто п -р еаген т -  раствор серной кислоты , 1  м оль/л -  прозрачная бесцветная ж ид­
кость.
А кти вны м и ком понентам и набора являю тся реком бин антны е ан ти гены  Treponem a  
p a llid u m , им м обили зованн ы е в лунках планш ета, конъю гат (ан ти тела к IgG  человека, 
м еченн ы е пероксидазой хрена), п олож и тельн ы й и отрицательны й контрольны е образ­
цы сы вороток.
С пособ определения IgG к Treponem a p a llid u m представляет собой твердоф аз­
ный и м м ун оф ерм ентны й анализ, в ходе которого при взаи м одействи и исследуем ы х 
образцов сы вороток крови с и м м обили зованн ы м и на поверхности лунок реком бин ант­
ны м и ан ти генам и прои сходит связы ван и е сп еци ф ических антител и образован ие ком­
плекса «ан ти ген-антитело», которы й вы являю т с пом ощ ью  им м уноф ерм ентного 
конъю гата.
Н абор реагентов рассчитан на проведени е 96 анализов, вклю чая контроли. В оз­
м ож но п роведени е 12 независи м ы х постановок И Ф А , при каж дой из которы х 4 лунки 
использую тся для постановки контролей. Н абор содерж и т все н еобходи м ы е для про­
ведения ан али за реагенты , кром е д и сти лли рован н ой  воды.


--- стр. 15 ---
Н АЗН АЧ ЕН И Е
Н абор реагентов предн азначен для вы явления сп еци ф ических антител (IgG ) к 
возбудителю  си ф илиса в сы воротке (плазм е) крови и ликворе человека и реком ендует­
ся для д и агн о сти ки  сиф илиса.
С П О С О Б ПРИ М ЕН ЕН И Я
П ри подготовке к проведению  ан али за и его вы полнении следует соблю дать ме­
ры предосторож ности, приняты е для работы  с потенциально ин ф екционны м  м атериа­
лом : работать в рези новы х перчатках; не пи пети ровать растворы  ртом ; все использо­
ванны е м атериалы  подвергать обработке дезин ф иц ирую щ им  раствором  (наприм ер,
6 %  раствором  перекиси водорода, врем я эксп озици и не м енее 6 часов).
Внимание!  Тщ ательное соблю дение описанны х ниже требований позволит  
избежать искажения результатов ИФА.
-  Д ля приготовления растворов и проведения И Ф А  следует использовать чис­
тую  м ерную  посуду и автом атически е пипетки с погреш ностью  изм ерения объём ов не 
более 5 %.
-  Ж ел ательн о использовать свеж еотобранны е образцы  сы воротки (плазм ы ) 
крови. Д оп ускается использовани е образцов, хранивш ихся при тем пературе (2-8) °С не 
более 5 суток, либо при тем пературе м инус (20 ± 3)°С не более 1  м есяца.
-  С ы воротки, содерж ащ и е взвеш ен н ы е частицы , м огут дать неправильны й ре­
зультат. П оэтом у перед постановкой И Ф А  их следует ценгриф угировать в течение 10- 
15 мин при 3000 об/м ин.
-  Н ельзя использовать сы воротки с признакам и м икробной контам инации, ге- 
м олизированн ы е, гиперлип идны е, подвергавш иеся м ногократном у зам ораж и вани ю  и 
оттаиванию .
-  П еред постановкой реакции все ком поненты  набора необходи м о вы держ ать 
не м енее 30 м ин при тем пературе (18-25) °С.
-  К онтрольны е образцы , конц ентри рованн ы й раствор конъю гата долж ны  быть 
при готовлены , как м иним ум , за 15 м инут до их использования.
-  П осле постановки реакции плотно закры ты е ф лаконы  с оставш им и ся исход­
ны м и ком пон ентам и следует хран ить при тем пературе (2-8) °С не более 1  месяца.


--- стр. 16 ---
-  Р аствор ГМБ и раствор конъю гата в рабочем  разведении готовить непосред­
ственно перед использованием . С ледует исклю чить воздействие прям ого света на рас­
твор ГМБ.
-  П ри пром ы вке лунки план ш ета зап олн ять полностью  (не м енее 300 мкл про­
м ы вочного раствора) и не касаться лунок наконечникам и пипетки. В рем я между за­
полнением  и опорож н ени ем  лунок д о л ж н о  составлять не м енее 30 с.
-  П ри использовани и автом атического или ручного пром ы вателя необходим о 
следить за состояни ем  ем кости с пром ы вочны м  раствором  и соеди нительны х ш лангов, 
не допуская образован ия в них м икробн ы х заростов. Д ля этого раз в неделю  ж елатель­
но ем кость для пром ы вочн ого раствора и ш ланги пром ы вать 70 %  этиловы м  спиртом.
-  Н ельзя допускать вы сы хания лунок м еж ду отдельны м и операциям и.
-  П ри постановке И Ф А  нельзя и спользовать ком поненты  из наборов разны х се­
рий или см еш ивать их при при готовлени и растворов, кром е н еспец иф и ческих ком по­
нентов (Ф С Б -Т х 2 5 , С БР, ТМ Б, стоп-реагент), которы е взаи м озам еняем ы  во всех набо­
рах ЗА О  «В ектор-Б ест».
-  Зап рещ ается м ногократн ое использовани е план ш ета для предвари­
тельн ого нанесения сы вороток.
-  Н аконечни ки для пипеток, использованн ы е для работы  с исследуем ы м и сы ­
вороткам и и контрольны м и образцам и, следует обеззараж и вать 6 %  перекисью  водо­
рода в теч ен и е 6 часов (другие д ези н ф и ц и рую щ и е растворы  не использовать!). С леду­
ет при м енять п ласти ковы е наконечники однократн ого использовани я; в случае по­
вторного при м енен ия наконечники следует пром ы ть 10 раз проточной водой, 3 раза 
д и сти лли рован н ой  водой и проки пятить в течен и е 40 м инут в последней порции дис­
ти лли рован н ой  воды , чтобы  избавиться от следов перекиси.
-  П осуду (пласти ковы е ванночки), наконечники для пипеток, прим еняем ы е 
для работы  с остальны м и реагентам и, нет необходи м ости обрабаты вать дезин ф иц и­
рую щ им и растворам и и м ою щ им и средствам и , т.к. они не содерж ат инф екционного 
агента. В случае повторного использовани я посуду (пласти ковы е ванночки), наконеч­


--- стр. 17 ---
ники для пипеток следует пром ы вать проточной водой, тщ ательн о и м ногократно опо­
ласки вая д и сти лли рован н ой  водой.
-  Д ля работы  с раствором  Т М Б  реком ендуется вы делить отдельную  посуду 
(пласти ковы е ван ночки) и наконечники для пипеток. В случае повторн ого использова­
ния сразу после работы  их необходи м о пром ы ть 50 %  раствором  этилового спирта, а 
затем  - д и сти лли рован н ой  водой.
-  П ипетки и рабочие поверхности л аб ораторн ы х столов и приборов следует об­
рабаты вать 70 %  раствором  этилового спирта. Н ельзя использовать перекись водоро­
да, хлорам ин и т.д.
1. П Р И Г О Т О В Л Е Н И Е  РЕ А ГЕ Н Т О В
1.1 П ромы вочны й раствор
В зболтать содерж и м ое ф лакона с Ф С Б -Т х25. П ри вы падении осадка солей в 
конц ентрате прогреть его перед разведением  при тем пературе (35-37) °С до полного 
растворения осадка.
О тобрать необходи м ое количество (в соответствии с числом  используем ы х стри- 
пов) Ф С Б -Т х25 и развести его д и сти лли рован н ой  водой до соответствую щ его объём а 
(см. таблицу расход а ком понентов) или содерж и м ое 1  ф лакона -  до 700 мл.
Х р а н е н и е: до 72 ч при т ем перат уре (2-8) °С.
1.2 К онтрольны е образцы
Р астворить контрольны е образцы  добавлени ем  во ф лакон с К+ 200 мкл РПР, а 
во ф лакон с К -  400 мкл РПР. Т щ ательно перем еш ать.
Х р а н е н и е: до 1 м есяц а  при т ем перат уре (2-8) °С.
1.3 Растворы  конъюгата
Внимание! Д л я  р а б о т ы  с конъ ю гат ом  р еко м ендуем  использоват ь одноразовы е 
на ко н ечни ки  для пипет ок.
П риготовить конц ентри рованн ы й раствор конъю гата путём растворения содер­
ж им ого ф лакона с конъю гатом  в 1  мл РПР.
Х р а н е н и е: ко нцент рированны й р а ст во р  конъю гат а -  до 1 м еся ц а  при т ем пе­
р а т ур е (2-8) °С.


--- стр. 18 ---
Внимание! Р аст вор конъ ю гат а в р а б о ч ем  р а звед ен и и  гот овит ь непосредст ­
венно перед использованием !
Т щ ательно взболтать содерж и м ое ф лакона с раствором  для разведения конъю ­
гата (РК ).
Затем  в пластиковую  ем кость отобрать необходим ое количество (см. таблицу) 
конц ентри рованн ого раствора конъю гата, добавить соответствую щ ее количество РК, 
тщ ательн о перем еш ать пипетированием .
1.4 Раствор ТМБ в рабочем разведении  
Внимание! Раствор ТМ Б готовить непосредственно перед использованием. Рекоменду­
ем выделить наконечники для пипеток, которые использовать только для работ ы  с ТМБ.
В пластиковую  ем кость отобрать необходи м ое количество Т М Б  (см. таблицу), д о ­
бавить соответствую щ ее количество С БР, тщ ательн о перем еш ать. П ри приготовлении 
раствора ТМ Б следует исклю чить воздей ствие света.
Х р а н е н и е: до 3 ч в защ ищ енн ом  от  свет а м ест е при ком нат ной т ем перат уре (18
-25)
Т абли ца расхода реагентов
К оличество используем ы х стрипов
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
П риготовлени е пром ы вочн ого раствора
Ф С Б -Т х25,
мл 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Д и стилли-
Q  1 1I I  о Г 1 до до до до до до до до до до до доpUBdHHclM
вода, мл 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600
П риготовлени е раство за кон ъ ю гата в рабочем  разведении
К он ц ен три ­
рован ны й
раствор а * 2 х а З х а4 х а 5 х а б х а 7 х а 8 х а 9 х а Ю х а 1 1 х а1 2 х а
конъю гата.
мкл
РК, мл 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0
П риготовлени е раствора Т М Б  в рабочем зазведении
ТМ Б, мкл 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600
С БР, мл 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0
а Н е  — мкл


--- стр. 19 ---
2.1. П одготовить необходи м ое количество стрипов к работе. О ставш иеся -  сразу 
упаковать во избеж ание губительного воздей ствия влаги. Д ля этого стрипы  необходи­
мо снять с рам ки, пом естить в цеф леновы й пакет с влагоп оглоти телем , тщ ательно за­
кры ть пакет пластиковой застёж кой. У пакованны е таким  образом  стрипы  хранить при 
(2-8) °С до 1  м есяца.
П риготовить пром ы вочны й раствор (п. 1.1), контрольны е образцы  (п. 1.2), кон­
ц ентрирован ны й раствор конъю гата (п. 1.3). В се растворы  долж ны  бы ть комнатной 
тем пературы  (1 8 -2 5 )°С .
2.2. В о все лунки стрип ов внести по 90 мкл раствора для разведения сы вороток
(PC).
В 1  лунку внести 10 мкл полож и тельн ого контрольного образц а (К +), в 2 лунки
-  по 10 мкл отриц ательн ого кон трольного образца (К ), в 1  лунку -  10 мкл PC (кон­
троль конъю гата), в остальны е лунки -  по 10 мкл цельны х испы туем ы х сы вороток. 
В несение сы ворот ок долж но сопровож дат ься т щ ат ельны м  перем еш иван ием  (пипе-  
т ирование не м ен ее 4 раз).
С трипы  заклеи ть липкой пленкой и инкубировать 30 мин при тем пературе 
(37±1)°С .
За 5-10 м инут до окончания инкубации при готовить раствор конъ ю гата в рабочем 
разведении (п. 1.З.).
2.3. П о окончан ии инкубации содерж и м ое лунок собрать в сосуд с дезин ф иц и­
рую щ им  раствором , пром ы ть лунки стрип ов 5 раз пром ы вочны м  раствором  с пом о­
щ ью  вош ера или вручную  (используя м ногоканальную  пипетку). П ри этом каждую  
лунку необходи м о зап олн ять полн остью  (не м енее 300 мкл п ром ы вочн ого раствора).
Н еобходим о добиваться полного опорож н ени я лунок после каж дого их заполне­
ния. В рем я м еж ду заполнением  и опорож н ени ем  лунок долж но бы ть не м енее 30 сек.
П о окончании пром ы вки из лунок стрип ов необходим о тщ ательн о удалить вла­
гу, постукивая перевернуты м и стрипам и по слож енной в несколько слоев ф ильтро­
вальной бум аге.
2.4. В каж дую  лунку внести по 100 мкл раствора конъю гата в рабочем  разведе­
нии. С трипы  заклеи ть плёнкой и инкубировать 30 мин при тем пературе (37±1) °С.
2. ПРОВЕДЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
7


--- стр. 20 ---
2.5. П о окончан ии инкубации п ром ы ть лунки стринов 5 раз пром ы вочны м  рас­
твором  и удалить влагу из лунок как опи сан о вы ш е (п. 2.3).
2.6. П риготовить раствор ТМ Б в рабочем  разведении (п. 1.4).
В нести в каж дую  лунку стрип ов по 100 мкл раствора ТМ Б. С трипы  пом естить 
на 30 м ин в защ и щ ен н ое от света м есто при тем пературе от (18-25) °С.
2.7. О станови ть реакцию  добавлени ем  в лунки по 100 мкл стоп-реагента и через 
2-3 м инуты  изм ерить оптическую  плотность (О П ).
С ледует  избегат ь попадания ст оп-реагент а на одеж ду и от кры т ы е уча ст ки  
тела. П ри попа да ни и  -  пром ы т ь больш им  количест вом  воды.
УЧЁТ РЕЗУ Л ЬТАТО В
Р езультаты  И Ф А  реги стрировать с пом ощ ью  сп ектроф отом етра, изм еряя опти­
ческую  плотность (О П ) в двухволновом  реж им е: основной ф ильтр -  450 нм, реф еренс- 
ф ильтр -  в д и ап азон е 620-650 нм. Д оп усти м а регистрация результатов только с ф ильт­
ром 450 нм. В ы ведение сп ектроф отом етра на нулевой уровень («бланк») осущ ествлять 
по воздуху.
Результаты  исследований учиты вать только в том случае, если значения ОП в 
лунках с контролем  конъю гата и К ” не более 0,2, а в лунке с не м енее 0,8.
И сследуем ую  сы воротку расц ен и вать как полож ительную , если соответствую ­
щ ее ей зн ачен и е О П  превы ш ает или равно величине ОП^-ру^,, которую  вы числяю т по 
ф орм уле:
Ои^рит  =  О П ер(К ) + 0,2
где ОПср(К ) —  среднее значен ие О П  для отриц ательн ого контрольного образца.
О П РЕДЕЛ ЕН И Е ТИ ТРА А Н ТИ ТЕЛ В ВЫ ЯВЛЕННОМ 
П О Л О Ж И ТЕЛ ЬН О М  ОБРАЗЦЕ
Е сли необходи м о определи ть титр антител в вы явленном  полож ительном  об­
разце, проводят его титрован ие. П араллельн о на отдельном  стрип е (контрольны й 
стрип) ставят К^, К “ в разведении 1:10 и контроль конъю гата (п. 2.2).
В верхню ю  лунку стрипа внести 180 мкл PC, в остальны е лунки стрипа —  по 
100 мкл PC. Затем  в верхню ю  лунку стрип а внести 20 мкл цельной сы воротки или 
плазм ы . Т щ ательно перем еш ать раствор пипетированием , после чего перенести
100 мкл во вторую  лунку, перем еш ать пи пети ровани ем  и перенести 100 мкл в третью


--- стр. 21 ---
лунку и т.д. до последней лунки стрипа. И з последней лунки отобрать 100 мкл раство­
ра и слить его в д езин ф иц ирую щ ий раствор.
Таким  образом , получаю т последовательн ы е 2-кратны е разведения образца от 
1:10 до 1:1280. П ри каж дом  титрован ии для контроля качества проведения анализа и 
расчёта необходим о вы полнять постановку контролей (п. 2.2). Закры ть стрипы
и инкубировать 30 мин при тем пературе (37+1) °С. Д алее проведение ан али за осущ ест­
влять в соответстви и с настоящ ей инструкцией, как описано вы ш е.
За титр антител к Treponem a p a llid u m в образце при ни м аю т м аксим альное раз- 
ведение образца, при котором  реги стрируется полож и тельн ы й результат, т.е. ОП об­
р азц а п ревы ш ает или равна = ОПер(К“) + 0,2).
И С С Л ЕДО ВА Н И Е ЛИКВО РА
И сследован ие ли квора м ож но осущ ествлять одноврем енно с исследованием  сы ­
вороток. П ри этом использую т разведен и е 1:1 образца ли квора в PC (в лунку вносят 
50 мкл исследуем ого образц а ли кво р а и д о б авл яю т 50 мкл PC), а при проведении вто­
рой ф азы  реакции конъю гат необходи м о использовать в концентрации, в 4 раза более 
вы сокой, чем при исследовании сы воротки или плазм ы  (п. 1.3).
Н априм ер: если для ан али за сы вороток требуется взять а  мкл конц ентри рован­
ного р аствора конъю гата и см еш ать с 1  мл РК (см. п. 1.З.), то для ан али за ликвора сле­
дует взять 4 X  а  мкл конц ентри рованн ого раство р а конъю гата и см еш ать с 1,0 мл РК.
П роведени е ан али за осущ ествлять в соответстви и с настоящ ей инструкцией, как 
опи сан о вы ш е. Д ля контроля качества проведения ан ализа и расчета ОТХ^рит использо­
вать контрольны е сы воротки, входящ и е в состав набора.
У чёт результатов осущ ествлять в соответстви и с настоящ ей инструкцией, как 
опи сан о вы ш е.
Т и тровани е ликвора проводят ан алогично титрован ию  сы вороток, только в 
верхню ю  лунку вертикального ряда следует внести 100 мкл PC и 100 мкл образца ли к­
вора. К он ъ ю гат использую т в той ж е конц ентрац ии , что и для качествен ного исследо­
вания л и кво р а (см. вы ш е). У чёт результатов осущ ествляю т, как опи сан о выш е.
Ф О РМ А  ВЫ ПУСКА
К ом плект 2 набора «Р еком биБ ест антипаллидум  -  IgG » состои т из 11 ком понен­
тов, упакованн ы х в коробку:
9


--- стр. 22 ---
-  П лан ш ет разборны й с и м м обили зованн ы м и реком бин антны м и антигенам и 
Treponem a p a llid u m —  1  шт;
-  П олож ительн ы й контрольны й образец  (К^), инактиви рованн ы й —  1  фл;
-  О три цательны й контрольны й образец  (К ), ин активи рованн ы й —  1  фл;
-  К о н ъ ю г а т —  1  фл. или 2 фл;
-  Раствор для п редварительного р азведения (РП Р) -  1  фл., 3,0 мл;
-  Р аствор для разведения сы вороток (PC ) —  1  фл., 13,0 мл;
-  Р аствор для разведения конъю гата (РК ) —  1  фл., 13,0 мл;
-  Т етрам ети лбен зи д и н  (ТМ Б), к о н ц е н т р а т —  1  фл., 1,5 мл;
-  25-кратны й концентрат ф осф атн о-солевого буф ерного раствора с твином  
(Ф С Б -Т х 2 5 ) —  1  фл., 28,0 мл;
-  С убстратны й буф ерны й раствор (С Б Р) —  1  фл., 13,0 мл;
-  С т о н -р е а ге н т —  1  фл., 12,0 мл.
С Р О К  г о д н о с т и .  У С Л О В И Я  Х Р А Н Е Н И Я  и  Т Р А Н С П О Р Т И Р О В А Н И Я
С рок годности набора -  12 м есяцев.
Н аборы  хранить и тр ан сп орти ровать при тем пературе (2-8) °С. Д опускается 
тр ан сп о р ти р о ван и е при тем пературе до 25 °С не более 10 суток. Зам ораж иван ие не 
допускается.
Реклам ации на качество набора направлять:
В Ф едеральное Г осударственн ое У чреж дение « Ц е н т р а л ь н ы й  кож - 
н о -в е н е р о л о г и ч е с к и й  и н с т и т у т  (Ф Г У  « Ц Н И К В И  Р о сзд р ав а» ) (107076, г. М осква,  
ул. К ороленко, д. 3, ст роение 6, тел. (495)-9б4-39-17);
и в адрес предп риятия-и зготовителя З А О  « В е к т о р -Б е с т »  (630559, Н овосибир­
ская обл., Н о восибирский район, п. К ольцово, АБК, тел. (383)-336-73-46, т ел./ф акс  
(383) -332-67-49).
Г енеральны й ди
ff «
ЗА О  «Вектор-БекЖ» М .Д. Х усаинов
1 0