Набор реагентов для одновременного выявления РНК вируса гепатита С (HCV), ДНК вируса гепатита В (HBV) и РНК вируса иммунодефицита человека (HIV) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией «АмплиСенс® HCV/HBV/HIV-FL» по ТУ 9398-069-01897593-2012 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2009/06187 от 07.12.2009 · класс риска 3

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

Вид изделия: ВИЧ 1/Вирус гепатита С/Вирус гепатита В нуклеиновые кислоты ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 162 контракта, медианная цена за единицу 67 090 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 8 ---
- Набор реагентов предназначен для одноразового применения для проведения 
ПЦР-исследования указанного количества проб (см. раздел «Состав»),
- Набор реагентов готов к применению согласно данной инструкции. Применять 
набор реагентов строго по назначению.
- К работе с набором реагентов допускается только персонал, обученный методам 
молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической 
лаборатории в установленном порядке (СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III— IV групп патогенности (опасности) и возбудителями 
паразитарных болезней»),
- Не использовать набор реагентов, если нарушена внутренняя упаковка или 
внешний вид реагента не соответствует описанию.
Не использовать набор реагентов, если не соблюдались условия 
транспортирования и хранения согласно инструкции.
- Не использовать набор по истечении срока годности.
Использовать одноразовые неопудренные перчатки, лабораторные халаты, 
защищать глаза во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть 
руки по окончании работы. Все операции проводятся только в перчатках для 
исключения контакта с организмом человека.
- Избегать вдыхания паров, контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. 
Вреден при проглатывании. При контакте немедленно промыть пораженное 
место водой и обратиться за медицинской помощью.
- При соблюдении условий транспортировки, эксплуатации и хранения риски 
взрыва и возгорания отсутствуют.
- Листы безопасности реагентов (SDS -safety data sheet) доступны по запросу.
- Информационное письмо о безопасности набора реагентов доступно по запросу.
Оценка вероятных событий, в результате наступления которых могут произойти 
отрицательные последствия для организма человека
При использовании по назначению и соблюдении вышеперечисленных мер 
предосторожности набор безопасен.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ 
ЗОНА 1. Экстракция ДНК/РНК из клинического материала
1. Ламинарный бокс (например, «БАВп-01-«Ламинар-С»-1,2», «Ламинарные 
системы», Россия, класс биологической безопасности II тип А).
2. Вортекс (например, BioSan, Латвия).
Стр. 8 из 39


--- стр. 9 ---
3. Набор электронных или механических дозаторов переменного объема с 
возможностью дозирования от 1  до 1000 мкл (например, «Ленпипет», Россия).
4. Штативы для пробирок (например, «ИнтерЛабСервис», Россия) и наконечников 
(например, Axygen, США).
5. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до 
200 мкл и до 1000 мкл (например, Axygen, США).
6. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 16 °С для 
выделенных проб РНК/ДНК.
7. Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.2569-09.
8. Емкость для сброса наконечников.
При использовании автоматической станции QIAsvmphonv SP:
1. Автоматическая станция для экстракции РНК/ДНК QIAsymphony SP (Qiagen, 
Германия).
2. Набор реактивов QIAsymphony Virus/Bacteria Midi Kit (Qiagen, Германия).
3. Расходные материалы к автоматической станции QIAsymphony SP производства 
Qiagen, Германия:
- Одноразовые наконечники для магнитных стержней (144 шт/уп)
- Вспомогательные ванночки (10 шт/уп)
-Ящик для отработанных наконечников (15 шт/упак)
- Держатель картриджа для реагентов
- 8 -луночный картридж для пробоподготовки (336 шт/упак)
- Наконечники с фильтром объемом 1500 мкл (32 наконечника/штатив)
- Наконечники с фильтром объемом 200 мкл (32 наконечника/штатив)
4. Полистиреновые круглодонные пробирки 17 х 100 мм, объемом 14 мл 
производства Becton, Dickinson and Company (США, каталожный номер 352051).
При использовании комплекта реагентов «МАГНО-сооб» (ТУ 9398-106-01897593- 
2012 ):
1. Термостат для пробирок объемом 5 мл, диаметром 12 мм от 25 до 100 °С 
(например, BioSan, Латвия).
2. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С (например, BioSan, 
Латвия).
3. Магнитный штатив для пробирок типа «Эппендорф» на 1,5 мл (например, 
Promega, США).
4. Магнитный штатив для пробирок на 5 мл, диаметр 12 мм (например, Promega, 
США).
Стр. 9 из 39


--- стр. 10 ---
5. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления 
надосадочной жидкости (например, «ОМ-1», г. Ульяновск, Россия).
6. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся 
пробирки объемом 1,5 мл (например, Ахудеп, США).
7. Одноразовые полипропиленовые или полистирольные пробирки объемом до 
5 мл диаметром 12 мм, круглодонные (например, Ахудеп, США).
8. Одноразовые полипропиленовые крышки для пробирок объемом до 5 мл 
диаметром 12 мм (например, Ахудеп, США).
9. Электронный или механический дозатор переменного объема с возможностью 
дозирования от 1000 до 5000 мкл (например, «Ленпипет», Россия).
10. Одноразовые наконечники с фильтром для дозаторов переменного объема до 
5000 мкл (например, Ахудеп, США).
11. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема фильтра до 
200 мкл и до 1000 мкл (например, Ахудеп, США).
При использовании автоматической станции NucliSENS easvMAG:
1. Автоматическая станция для экстракции РНК/ДНК NucliSENS easyMAG 
(поставщик «ИнтерЛабСервис», Россия).
2. Набор реактивов и расходных материалов к автоматической станции NucliSENS 
easyMAG (буфер для экстракции 1, буфер для экстракции 2, буфер для 
экстракции 3, буфер для лизиса, магнитная силика, комплект расходных 
материалов) (bioMerieux, Франция).
При использовании комплекта реагентов «РИБО-сорб» (ТУ 9398-004-01897593-
2008) или «РИБО-поеп» (ТУ 9398-071-01897593-2008):
1. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С (например, BioSan, 
Латвия).
2. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» до 12 тыс g (например, 
MiniSpin, Eppendorf, Германия).
3. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления 
надосадочной жидкости (например, «ОМ-1», г. Ульяновск, Россия).
4. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся 
пробирки объемом 1,5 мл (например, Ахудеп, США).
5. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл 
(например, Ахудеп, США).
ЗОНА 2. Проведение реакции обратной транскрипции, ПЦР и гибридизационно-
флуоресцентной детекции продуктов амплификации
Стр. 10 из 39


--- стр. 11 ---
1. Для форм комплектации 1, 3, 4, 5 необходим амплификатор роторного типа, 
например, Rotor-Gene 3000 или 6000 (Corbett Research, Австралия) или 
амплификатор планшетного типа, например, «ДТ-96» («ДНК-Технология», 
Россия), либо амплификаторы, рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора в методических рекомендациях по применению данного 
набора реагентов, с возможностью одновременной детекции флуоресценции 
по пяти независимым каналам, соответствующим флуоресцентным красителем 
FAM, JOE, ROX, Суб, Суб.5.
Для формы комплектации 6 необходим амплификатор роторного типа, 
например, Rotor-Gene 3000 или 6000 (Corbett Research, Австралия) или 
амплификатор планшетного типа, например, «ДТ-96» («ДНК-Технология», 
Россия, либо амплификаторы, рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора в методических рекомендациях по применению данного 
набора реагентов, с возможностью одновременной детекции флуоресценции по 
четырем или более независимым каналам, соответствующим флуоресцентным 
красителем FAM, JOE, ROX, Суб.
2. ПЦР-бокс (например, «БАВ-ПЦР-«Ламинар-С», «Ламинарные системы», Россия).
3. Вортекс (например, BioSan, Латвия).
4. Набор электронных или механических дозаторов переменного объема (например, 
«Ленпипет», Россия).
5. Для приборов для ПЦР в режиме «реального времени» с детекцией через дно 
пробирки (например, Rotor-Gene). Одноразовые полипропиленовые пробирки для 
ПЦР объемом 0,2 мл (плоская крышка, нестрипованные) (например, Axygen, 
США) для постановки в ротор на 36 пробирок либо одноразовые 
полипропиленовые пробирки для ПЦР объемом 0,1 мл (Corbett Research, 
Австралия) для постановки в ротор на 72 пробирки.
Для приборов для ПЦР в режиме «реального времени» с детекцией через крышку 
(например, «ДТ-96»), Одноразовые полипропиленовые пробирки или стрипы для 
ПЦР объемом 0,2 мл (куполообразная крышка) (например, Axygen, США).
6. Одноразовые наконечники с фильтром до 100 мкл и 200 мкл (например, Axygen, 
США).
7. Штативы для наконечников (например, Axygen, США) и пробирок объемом 0,2 мл 
(например, «ИнтерЛабСервис», Россия).
8. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 16 °С для 
выделенных проб РНК/ДНК.
Стр. 11 из 39


--- стр. 15 ---
ФОРМАТ FRT
ОТ-ПЦР-смесь-1 -FRT H C V /H B V / 
Н М /H IV2
Прозрачная жидкость от 
бесцветного до светло- 
лилового цвета
0,35 4 пробирки
ОТ-ПЦР-смесь-2-FL Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,35 4 пробирки
Полимераза (TaqF) Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,07 4 пробирки
ТМ-Ревертаза (MMIv) Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,055 4 пробирки
Буфер для элюции Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 4 пробирки
ПКО кДНК H C V /H B V /H IV Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,1 4 пробирки
Комплект реагентов рассчитан на проведение 100 реакций обратной транскрипции и 
амплификации, включая контроли. Входит в состав форм комплектации 1,4.
К комплекту реагентов прилагаются контрольные образцы этапа экстракции:
Реактив Описание Объем, мл Кол-во
ОКО Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 4 пробирки
ПКО H CV/ H B V / HIV-rec Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 4 пробирки
ВКО STI-87-rec Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,5 4 пробирки
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-4x -  комплект реагентов для 
проведения реакции обратной транскрипции РНК и амплификации кДНК вируса 
гепатита С ( HCV), кДНК вируса иммунодефицита человека типа 1  (HIV-1), ДНК 
вируса гепатита В ( HBV) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме 
«реального времени -  включает:
Реактив Описание Объем, мл Кол-во
RT-G-mix-2 Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,015 4 пробирки
ОТ-ПЦР-смесь-1-FRT H C V /H B V / 
HIV
Прозрачная жидкость от 
бесцветного до светло- 
лилового цвета
0,3 4 пробирки
ОТ-ПЦР-смесь-2-FL Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,3 4 пробирки
Полимераза (TaqF) Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,03 4 пробирки
ТМ-Ревертаза (MMIv) Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,015 4 пробирки
Буфер для элюции Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 4 пробирки
ПКО кДНК H C V /H B V /H IV Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,1 4 пробирки
Комплект реагентов рассчитан на проведение 100 реакций обратной транскрипции и
Стр. 15 из 39


--- стр. 16 ---
ФОРМАТ FRT
амплификации, включая контроли.
К комплекту реагентов прилагаются контрольные образцы этапа экстракции:
Реактив Описание Объем (мл) Кол-во
ОКО
Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,5 4 пробирки
ПКО H C V /H B V /H IV -re c
Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 4 пробирки
ВКО STI-87-rec
Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,5 4 пробирки
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- Экстракция РНК/ДНК из исследуемых образцов.
- Проведение обратной транскрипции и амплификации с гибридизационно- 
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
- Анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК/ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! Для работы с РНК/ДНК необходимо использовать только одноразовые 
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку 
RNase-free, DNase-free.
Для экстракции РНК используются комплекты реагентов, рекомендованные ФБУН 
ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора:
- при использовании комплекта реагентов QIAsymphony Virus/Bacteria Midi Kit для 
автоматической станции экстракции нуклеиновых кислот QIAsymphony SP 
порядок работы см. в приложении 1 «Экстракция РНК/ДНК с использованием 
автоматической станции экстракции нуклеиновых кислот QIAsymphony SP».
- при использовании автоматической станций для экстракции нуклеиновых кислот 
NucliSENS easyMAG порядок работы см. в приложении 2 («Экстракция РНК/ДНК с 
использованием автоматической станций для экстракции нуклеиновых кислот 
NucliSENS easyMAG»).
при использовании комплекта реагентов «МАГНО-сорб» порядок работы для 
экстракции РНК/ДНК из 1000 мкл и 200 мкл плазмы крови см. в приложении 3 
(«Экстракция РНК/ДНК с использованием комплекта реагентов «МАГНО-сорб»), 
При использовании комплектов реагентов для экстракции, не входящих в состав 
данного набора реагентов, порядок работы см. в приложении 4 («Экстракция 
РНК/ДНК с использованием комплектов, не входящих в состав данного набора
Стр. 16 из 39


--- стр. 17 ---
ФОРМАТ FRT
реагентов»).
Также см. методические рекомендации ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора по применению набора реагентов «АмплиСенс® HCV / HBV / HIV- 
FL».
ПРОВЕДЕНИЕ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ И АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В 
РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
Общий объем реакции - 50 мкл, включая объем пробы РНК/ДНК - 30 мкл.
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК/ДНК необходимо использовать только одноразовые 
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку 
RNase-free, DNase-free.
А1. Подготовка пробирок для амплификации при использовании «ПЦР- 
комплекта» вариант FRT
Выбор пробирок для амплификации зависит от используемого амплификатора.
Для внесения в пробирки реагентов, проб РНК/ДНК и контрольных образцов 
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно 
перед проведением ПЦР-исследования.
1. До начала работы разморозить, тщательно перемешать на вортексе все реагенты 
набора и осадить капли с крышек пробирок.
2. Отобрать необходимое количество пробирок для амплификации с учетом 
количества исследуемых и контрольных образцов (два контроля этапа экстракции 
и два контрольных образца этапа ПЦР). Тип пробирок, стрипов или плашек 
выбрать в зависимости от используемого прибора.
3. Для приготовления реакционной смеси смешать реагенты на необходимое 
число реакций, включающее тестирование исследуемых и контрольных образцов, 
в соответствии с расчетной таблицей (см. табл. 1).
4. При проведении тестирования 22 клинических образцов (24 образца после этапа 
экстракции) рекомендуется следующий способ смешивания: в пробирку с ОТ- 
ПЦР-смесью-1 -FRT HCV I HBV I Н/\Л / HIV2 (0,3 мл) добавить все содержимое 
пробирки с ОТ-ПЦР-смесью-2-FL (0,3 мл), все содержимое пробирки с 
полимеразой (TaqF) (0,03 мл), все содержимое пробирки с ТМ-Ревертазой 
(MMIv) (0,015 мл) и 0,015 мл RT-G-mix-2. Тщательно перемешать на вортексе и 
осадить капли с крышки пробирки.
Стр. 17 из 39


--- стр. 18 ---
ФОРМАТ FRT
5. Внести в пробирки по 20 мкл готовой реакционной смеси. Неиспользованные 
остатки реакционных смесей выбросить.
6. Используя наконечник с фильтром, добавить по 30 мкл каждой пробы РНК/ДНК 
в пробирку с реакционной смесью. Пробирки необходимо тщательно  
перемешать пипетированием, не допуская появления пузырьков воздуха.
7. Поставить контрольные реакции:
а) положительный контроль ПЦР (К+) -  в пробирку с реакционной смесью 
внести 30 мкл ПКО кДНК HCVI HBVI HIV\
б) отрицательный контроль ПЦР (К-) -  в пробирку с реакционной смесью 
внести 30 мкл буфера для элюции.
ВНИМАНИЕ! Пробирки с добавленными контрольными образцами необходимо 
тщательно перемешать пипетированием, не допуская появления пузырьков воздуха. 
Перед постановкой в амплификатор планшетного типа рекомендуется осадить капли 
со стенок пробирок кратким центрифугированием на вортексе (1-3 с).
Таблица 1
Схема приготовления реакционных смесей
Объем реактивов на указанное количество исследуемых
точек с запасом
Объем реагента на одну  
реакцию, мкл 10,00 10,00 1,00 0,50 0,50
Число
клинических
образцов
Число
исследуемых  
точек в ПЦР5
ОТ-ПЦР- 
смесь-1-FRT  
HCVIHBVI  
Нт  1HIV2
ОТ-ПЦР-
смесь-2-FL
Полимераза
(TaqF) RT-G-mix-2 ТМ-Ревертаза
(MMIv)
6 10 110 110 11 5 5
8 12 130 130 13 6 6
10 14 150 150 15 7 7
12 16 170 170 17 8 8
14 18 190 190 19 9 9
16 20 210 210 21 10 10
18 22 230 230 23 11 11
20 24 250 250 25 12 12
226 26
Все
содержимое
пробирки
Все
содержимое
пробирки
Все
содержимое
пробирки
15
Все
содержимое
пробирки
А2. Подготовка пробирок для амплификации при использовании «ПЦР- 
комплекта» вариант FRT-A
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-А адаптирован для 
автоматического модуля приготовления реакционных смесей QIAsymphony AS.
5  Число клинических образцов + 2 контроля этапа экстракции РНК + 2 контроля ОТ-ПЦР, (N+4, N -  
количество клинических образцов).
6 Стандартная экстракция из 24 образцов на приборе NucliSENS easyMAG или с помощью комплекта 
реагентов «МАГНО-сорб».
Стр. 18 из 39


--- стр. 26 ---
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ 
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению 
не подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, 
указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано 
иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 
8 °С не более 5 сут. При получении разукомплектовать в соответствии с указанными 
температурами хранения.
Хранение. Комплект реагентов QIAsymphony Virus/Bacteria Midi Kit для 
автоматической станции экстракции нуклеиновых кислот QIAsymphony SP хранить в 
соответствии с инструкцией производителя. Комплект реагентов «МАГНО-сорб» 
хранить при температуре от 2 до 25 °С. Комплект реагентов «ПЦР-комплект» 
вариант FRT, вариант FRT-A и вариант FRT-4x, включая контрольные образцы этапа 
экстракции, хранить при температуре не выше минус 16 °С. ОТ-ПЦР-смесь-1-FRT HCV 
/  HBV /  HIV1  / HIV2 и ОТ-ПЦР-смесь-1-FRT HCV /  HBV /  HIV хранить в защищенном от 
света месте.
Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических 
учреждений.


--- стр. 27 ---
ФОРМАТ FRT
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
Производитель гарантирует соответствие основных параметров и характеристик 
набора реагентов, требованиям, указанным в технической и эксплуатационной 
документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий 
транспортирования, хранения и применения.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по адресу: 111123, 
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА, e-mail: cs@pcr.ru11.
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по применению 
набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и 
обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских 
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется 
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную 
государственную регулирующую организацию (в РФ -  Федеральная служба по 
надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим 
законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора Е.Н. Родионова
i
Главный врач ФГБУ «Поликлиника №1» 
Управления делами Президента 
Российской Федерации
Е.В. Ржевская
1 1  Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету 
потребителя на сайте: www.amplisens.ru .
Стр. 27 из 39


--- стр. 28 ---
ЭКСТРАКЦИЯ РНК/ДНК
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Экстракция РНК/ДНК с использованием автоматической станций QIAsymphony
SP
Порядок работы
1. Заполнить штатив QIASymphony пробирками с исследуемыми образцами и 
контролями (положительным и отрицательным), затем штатив установить в 
позицию 1  загрузочного шлюза станции. При наличии штрих-кода на пробирке 
происходит его автоматическое считывание во время загрузки штатива. При 
отсутствии штрих-кода на пробирке необходимо вручную присвоить данному 
образцу виртуальный штрих-код.
2. Пробирку с внутренним контролем установить в другой штатив QIASymphony, 
затем штатив установить в позицию «А» загрузочного шлюза станции.
3. Закрыть дверцу загрузочного шлюза.
4. Установить картридж с реагентами и расходные материалы (производства 
Qiagen, Германия) в строгом соответствии с инструкцией производителя.
5. Запустить протокол экстракции в соответствии с инструкцией к прибору 
QIASymphony SP.
Также см. методические рекомендации ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора по применению набора реагентов «АмплиСенс® HCV / HBV / HIV-
FL».
Стр. 28 из 39


--- стр. 29 ---
ЭКСТРАКЦИЯ РНК/ДНК
ПРИЛОЖЕНИЕ 2
Экстракция РНК/ДНК с использованием автоматической станций для
экстракции нуклеиновых кислот NucliSENS easyMAG
Порядок работы.
А. Экстракция РНК/ДНК автоматическим лизисом образца в приборе
1. Поставить флакон с буфером для лизиса NucliSens в прибор.
2. Для повышения чувствительности метода, особенно в случаях исследования 
мини-пулов, рекомендуется исследовать 1  мл. В каждую ячейку картриджа, 
предназначенного для экстракции РНК/ДНК в приборе NucliSENS easyMAG, 
необходимо добавить от 100 мкл до 1  мл исследуемой плазмы отдельным 
наконечником с фильтром.
3. Для каждой панели необходимо поставить положительный контроль (ПК). Для 
этого в ячейку, предназначенную для ПК, добавить 100 мкл ПКО HCVI HBVI HIV-  
гес.
4. Для каждой панели необходимо поставить отрицательный контроль (ОК). Для 
этого в ячейку, предназначенную для ОК, добавить 100 мкл ОКО.
5. Включить прибор NucliSENS easyMAG и подготовить его к экстракции РНК/ДНК, 
следуя инструкции к прибору.
6. В окне для ввода исследуемых образцов ввести для каждого образца следующие 
параметры: название образца, материал (Matrix) для экстракции РНК - плазма 
(Plasma)] объем образца (Volume) -  от 100 mkl до 1 ml, в зависимости от объема 
используемого клинического материала; объем элюции ( Eluate) -  55 mkl; тип 
образца (Г/'ре) - Primary, очередность экстракции РНК в образцах (Priority) -  
Normal.
7. Создать новый протокол экстракции РНК/ДНК и сохранить его. В протоколе 
указать, что лизис и инкубация образцов происходит в приборе: On-board Lysis 
Buffer Dispensing - Yes, On-board Lysis Incubation - Yes.
8. Перенести запрограммированные образцы в созданный протокол.
9. Загрузить картридж с образцами в прибор, установить наконечники, запустить 
программу экстракции РНК с лизисом образцов в приборе (On board).
10. В отдельной стерильной пробирке на 1,5 мл смешать магнитную силику  
NucliSens и ВКО STI-87-rec стерильными наконечниками с фильтрами в 
следующем соотношении:
Стр. 29 из 39


--- стр. 30 ---
ЭКСТРАКЦИЯ РНК/ДНК
Количество образцов 
для экстракции РНК/ДНК
Количество магнитной 
силики NucliSens, мкл
Количество 
ВКО STI-87-rec, мкл
1 20 10
8 180 90
16 340 170
24
(полная загрузка прибора)
500
(с запасом на одну пробирку) 250
11 .Дождаться, пока автоматическая станция NucliSENS easyMAG остановит работу в 
положении Instrument State  -  Idle (приблизительно через 15 мин).
12.Открыть крышку прибора и добавить в каждую ячейку отдельным наконечником 
по 30 мкл смеси магнитной силики NucliSens и ВКО STI-87-rec. Тщательно 
перемешать пипетированием, используя дозатор и наконечник объемом до 1  мл.
13.Продолжить программу экстракции РНК/ДНК на приборе.
После окончания экстракции РНК/ДНК извлечь картридж с образцами из прибора 
и не позднее 30 мин после окончания процедуры экстракции РНК/ДНК провести 
реакцию ОТ-ПЦР. Для длительного хранения препарата необходимо, не 
захватывая сорбент, перенести надосадочную жидкость в стерильную пробирку и 
хранить при температуре от минус 24 °С до минус 16 °С в течение 1  мес или не 
выше минус 68 °С в течение года.
А
Стр. 30 из 39


--- стр. 34 ---
ЭКСТРАКЦИЯ РНК/ДНК
9
9
11. Осторожно, по внутренней стенке пробирки отобрать надосадочную жидкость, 
используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы. 
Перенести пробирки в обычный штатив.
12. Добавить в пробирки по 700 мкл раствора для отмывки 5.
13. Смыть магнетизированную силику вортексированием, а затем осадить капли 
кратким центрифугированием.
14. Поставить пробирки в обычный штатив, открыть крышки и переставить в 
магнитный штатив. Инкубировать 2 мин.
15. Отобрать надосадочную жидкость и перенести пробирки в обычный штатив.
16. Повторить отмывку раствором для отмывки 5 (пп. 12-15).
17. Аналогично провести одну отмывку 700 мкл раствора для отмывки 6.
18. Добавить 200 мкл раствора для отмывки 7, перемешать, а затем осадить капли 
на вортексе. Поставить пробирки в обычный штатив и открыть крышки.
19. Переставить пробирки в магнитный штатив на 1 мин, затем отобрать 
надосадочную жидкость.
20. Высушить сорбент, оставив пробирки с открытыми крышками на магнитном 
штативе в течение 10 мин.
21. Добавить 70 мкл буфера для элюции и перемешать на вортексе.
22. Поместить пробирки в термостат при температуре 60 °С на 5 мин, через 2 мин 
перемешать на вортексе.
23. Коротко осадить капли на вортексе и переставить пробирки в магнитный штатив. 
Инкубировать 2 мин. Надосадочная жидкость содержит очищенные РНК и ДНК.
ВНИМАНИЕ! Отбор очищенных ДНК/РНК для проведения ОТ-ПЦР  
осуществляется без снятия пробирок с магнитного штатива.
Очищенная РНК/ДНК может храниться до 4 ч при температуре от 2 до 8 °С. Для 
длительного хранения препарата необходимо, не захватывая сорбент, перенести 
надосадочную жидкость в стерильную пробирку и хранить при температуре не выше 
минус 16 °С в течение 1  мес, или не выше минус 68 °С в течение года.
Стр. 34 из 39


--- стр. 35 ---
ЭКСТРАКЦИЯ РНК/ДНК
ПРИЛОЖЕНИЕ 4
Экстракция РНК/ДНК с использованием комплектов реагентов, не входящих в 
состав данного набора реагентов
Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с 
формой 4 гарантируются только в случае экстракции РНК/ДНК при помощи 
комплектов реагентов, рекомендованных ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора.
Также см. методические рекомендации ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора по применению набора реагентов «АмплиСенс® HCV / HBV / HIV- 
FL».
Экстракция РНК/ДНК с использованием комплекта реагентов «РИБО-преп» 
Порядок работы.
1. Раствор для лизиса (если он хранился при температуре от 2 до 8 °С) прогреть 
при температуре до 65 °С до полного растворения кристаллов.
2. Отобрать необходимое количество одноразовых пробирок на 1,5 мл (включая 
отрицательный и положительный контроли экстракции). Промаркировать 
пробирки.
3. На дно каждой пробирки внести по 10 мкл ВКО STI-87-rec.
4. В пробирки внести по 300 мкл раствора для лизиса. Промаркировать пробирки. 
Примечание -  При большом объеме образцов для облегчения процедуры 
экстракции допускается смешивание в отдельном стерильном флаконе раствора 
для лизиса и ВКО STI-87-rec (из расчета на один образец 300 мкл раствора для 
лизиса и 10 мкл ВКО STI-87-rec) с последующим разнесением по 300 мкл смеси в 
заранее приготовленные пробирки на 1,5 мл.
5. В пробирки внести по 100 мкл исследуемых образцов, используя одноразовые 
наконечники с фильтрами. Закрыть крышки и перемешать на вортексе. Осадить 
на центрифуге для сброса капель жидкости с крышки.
6. Для каждой панели необходимо поставить положительный контроль (ПК). Для 
этого в приготовленную пробирку ПК с раствором для лизиса добавить 100 мкл 
ПКО HCV I HBV I HIV- гее, перемешать пробирки на вортексе и осадить капли 
жидкости с крышки.
7. Для каждой панели необходимо поставить отрицательный контроль (ОК). Для 
этого в пробирку с раствором для лизиса добавить 100 мкл ОКО, перемешать на 
вортексе и осадить капли жидкости с крышки.
8. Содержимое пробирок прогреть 5 мин при 65 °С в термостате, перемешать на
Стр. 35 из 39


--- стр. 36 ---
ЭКСТРАКЦИЯ РНК/ДНК
вортексе и осадить капли жидкости с крышки.
9. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора для преципитации, перемешать на 
вортексе.
10. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге при 12 тыс g (например, 
13 400 об/мин для центрифуги MiniSpin, Eppendorf) в течение 5 мин.
11. Аккуратно отобрать надосадочную жидкость, не задевая осадок, используя 
вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
12. Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3, плотно закрыть 
крышки, осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
13. Центрифугировать при 13 тыс g в течение 1-2 мин на микроцентрифуге.
14. Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную жидкость, используя 
вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
15. Добавить в пробирки по 200 мкл раствора для отмывки 4, плотно закрыть 
крышки и осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
16. Центрифугировать при 13 тыс g в течение 2 мин на микроцентрифуге.
17. Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную жидкость, используя 
вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
18. Поместить пробирки в термостат при температуре 65 °С на 5 мин для 
подсушивания осадка (при этом крышки пробирок должны быть открыты).
19. Добавить в пробирки по 50 мкл РНК-буфера. Перемешать на вортексе. 
Поместить в термостат при температуре 65 °С на 5 мин, периодически 
встряхивая на вортексе.
20. Центрифугировать пробирки при 13 тыс g в течение 1 мин на микроцентрифуге. 
Надосадочная жидкость содержит очищенные РНК и ДНК. Пробы готовы к 
постановке реакции обратной транскрипции и ПЦР.
Очищенная РНК/ДНК может храниться до 4 ч при температуре от 2 до 8 °С, при
температуре не выше минус 16 °С в течение 1  мес и не выше минус 68 °С в течение
года.
Экстракция РНК/ДНК с использованием комплекта реагентов «РИБО-сорб»
Порядок работы.
1. Лизирующий раствор и раствор для отмывки 1 (если они хранились при 
температуре от 2 до 8 °С) прогреть при температуре 60 °С до полного 
растворения кристаллов.
2. Отобрать необходимое количество одноразовых пробирок на 1,5 мл (включая 
отрицательный и положительный контроли экстракции). Промаркировать