Набор реагентов для выявления и дифференциации генотипов (1, 2, 3) вируса гепатита С (HCV) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® HCV-1/2/3-FL" по ТУ 9398-091-01897593-2009 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2009/05823 от 06.10.2009 · класс риска 3

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита С генотипирование ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 119 контрактов, медианная цена за единицу 34 219 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 4 ---
р
I
I
О г л а в л е н и е
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ......................................................................................................................3
СОСТАВ............................................................................................  4
НАЗНАЧЕНИЕ...............................................................................................................................................5
ВЗЯТИЕ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА. ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ
ПРОБ.................................................................................................................................................................7
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ...............................................................................................................8
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, ТРЕБУЕМЫЕ ДЛЯ
ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АНАЛИЗ А...............................................................................................................8
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АНАЛИЗА.............................................................................................................10
Вариант FEP..................................................................................................................................................13
Вариант FRT..................................................................................................................................................17
АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ.........................................................................................................................18
ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЕ..............................................................................................................................20
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНР1Я..............................20
Приложение 1..............................................................................................................................................23
СХЕМА ПРИГОТОВЛЕНИЯ РЕАКЦИОННЫХ СМЕСЕЙ ДЛЯ ВАРИАНТА FEP .................23
Приложение 2...............................................................................................................................................24
СХЕМА ПРИГОТОВЛЕНИЯ РЕАКЦИОННЫХ СМЕСЕЙ ДЛЯ ВАРИАНТА FRT .................24
/


--- стр. 5 ---
Набор реагентов выпускается в 2 вариантах.
Вариант FEP.
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ.
Набор реагентов выпускается в 3 формах комплектации:
Форма 1 включает комплекты реагентов «РИБО-сорб» вариант 50, «ПЦР-комплект» вариант  
FEP.
Форма 2 включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 50, «ПЦР-комплект» вариант  
FEP.
Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP.
ВНИМАНИЕ! Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с  
формой 3 гарантируются только в случае применения дополнительного комплекта реагентов  
«РИБО-сорб» или «РИБО-преп» производства ФГУП ЦНИИЭ Роспотребнадзора, или в  
случае выделения РНК при помощи автоматической станции «NucliSENS® easyMAG™»  
(«bioMerieux», Франция) с использованием реагентов «NucliSENS® easyMAG™»  
(«bioMerieux», Франция) совместно с комплектом реагентов «ЕМ-плюс» производства  
ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора.
Вариант FRT,
ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ. >
Набор реагентов выпускается в 3 формах комплектации:
Форма 1 включает комплекты реагентов «РИБО-сорб» вариант 50, «ПЦР-комплёкт» вариант  
FRT.
Форма 2 включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 50, «ПЦР-комплект» вариант  
FRT.
Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT.
ВНИМАНИЕ! Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с  
формой 3 гарантируется только в случае применения дополнительного комплекта реагентов  
«РИБО-сорб» или «РИБО-преп» производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора или в  
случае выделения РНК при помощи автоматической станции «NucliSENS® easyMAG™»  
(«bioMerieux», Франция) с использованием реагентов «NucliSENS® easyMAG™»  
(«bioMerieux», Франция) совместно с комплектом реагентов «ЕМ-плюс» производства  
ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора.


--- стр. 6 ---
9 9
СОСТАВ.
Комплект реагентов «РИБО-сорб» вариант 50 (ТУ 9398-004-01897593-2008) - комплект  
реагентов для выделения РНК/ДНК из клинического материала включает:
Реакт ив О писание Объем (мл) Кол-во
Лизирующий раствор Прозрачная бесцветная 
жидкость’ 22,5 1 флакон
Раствор для отмывки 1 прозрачная бесцветная 
жидкость! 20 1 флакон
Раствор для отмывки 3 Прозрачная бесцветная 
жидкость 50 1 флакон
Раствор для отмывки 4 Прозрачная бесцветная 
жидкость 20 1 флакон
Сорбент Суспензия белого цвета 1,25 1 пробирки
РНК-буфер Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,5 5 пробирок
Комплект реагентов рассчитан на выделение РНК из 50 проб, включая контроли.
Комплект реагентов «РИБО-преп» вариант 50 (ТУ 9398-071-01897593-2008) - комплект  
реагентов для выделения РНК/ДНК из клинического материала включает:
Реакт ив О писание Объем (мл) Кол-во
Раствор для лизиса Прозрачная бесцветная 
жидкость 1 15 1 флакон
Раствор для преципитации Прозрачная бесцветная 
жидкость 20 1 флакон
Раствор для отмывки 3 Прозрачная бесцветная 
жидкость 22,5 1 флакон
Раствор для отмывки 4 Прозрачная бесцветная 
жидкость 10 1 флакон
РНК-буфер прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 4 пробирки
Комплект реагентов рассчитан на выделение РНК из 50 проб, включая контроли.
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP - комплект реагентов для проведения  
реакции обратной транскрипции РНК, совмещенной с ПЦР-амплификацией и  
дифференциации кДНК генотипов (1, 2, 3) вируса гепатита С {HCV)  с гибридизационно-  
флуоресцентной детекцией по «конечной точке» включает:
Реакт ив О писание Объем (мл) Кол-во
RT-G-mix-2 Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,015 1 пробирка
ОТ-ПЦР-смесь-1-FEP/FRT
ЯСК-1/2/3
Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,6 1 пробирка
ОТ-ПЦР-смесь-2-FEP/FRT прозрачная бесцветная 
жидкость 0,3 1 пробирка
* При хранении лизирующего раствора, раствора для лизиса и раствора для отмывки 1 при температуре от 2  
до 8 °С возможно образование осадка в виде кристаллов
/


--- стр. 11 ---
1,5 мл (например, «ИнтерЛабСервис», Россия).
7. Холодильник от 2 до 8 °С.
8. Отдельный халат и одноразовые перчатки.
9. Емкость с дезинфицирующим раствором.
При использовании комплекта реагентов «РИБО-сорб» или «РИБО-преп»:
1. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С (например, «ТЕРМО 24-15»,  
«Биоком», Россия).
2. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» до 12 тыс g (например, «MiniSpin»,  
«Eppendorf», Германия).
3. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной  
жидкости (например, «ОМ-1», г. Ульяновск, Россия).
4. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл (например,  
«Axygen», США).
5. Одноразовый флакон на 10-20 мл (например, «Zinsser», Германия).
При использовании автоматической станции «NucliSENS® easvMAG^^»:
1. Автоматическая станция для выделения РНК/ДНК «NucliSENS® easyMAG™» (поставщик  
«ИнтерЛабСервис», Россия).
2. Набор реактивов и расходных материалов к автоматической станции «NucliSENS  
easyMAG^*^» (NucliSens буфер для экстракции 1, NucliSens буфер для экстракции ^2,  
NucliSens буфер для экстракции 3, NucliSens буфер для лизиса, NucliSens  
магнетизированная силика) («bioMerieux», Франция).
3. Дополнительный комплект реагентов «ЕМ-плюс» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора,  
Россия).
ЮНА 2.
Для проведения реакции обратной транскрипции, ПЦР-амплификации и  
гибридизационно-флуоресцентной детекции продуктов ПЦР-амплификации требуются:  
Вариант FEP: амплификатор, адаптированный для ПЦР-пробирок 0,5 мл, например,  
«Терцик» («ДНК-Технология», Россия) или амплификатор, адаптированный для ПЦР-  
пробирок 0,2 мл, например, «Gradient Palm Cycler» («Corbett Research», Австралия),  
«GeneAmp PCR System 2700» («Applied Biosystems», США) «MAXYGENE» («Axygen»,  
США) или эквивалентные. Флуоресцентный ПЦР-детектор, например, «АЛА-1/4» («BioSan»,  
Латвия), «Джин-4» («ДНК-Технология», Россия) или эквивалентный.
Вариант FRT: амплификатор роторного типа, например, «Rotor-Gene» 3000 или 6000  
(«Corbett Research», Австралия) или амплификатор планшетного типа, например, «iQ5»  
(«BioRad», США), «МхЗОООР» («Stratagene», США) или эквивалентные.
1. ПЦР-бокс (например, «БАВ-ПЦР-«Ламинар-С», «Ламинарные системы», Россия).


--- стр. 12 ---
10
1. ПЦР-бокс (например, «БАВ-ПЦР-«Ламинар-С», «Ламинарные системы», Россия).
2. Для приборов для ПЦР в реальном времени с детекцией через дно пробирки (например.
/0?
«Rotor-Gene»). Одноразовые полипропиленовые микропробирки для ПЦР на 0,2 мл  
(плоская крышка, нестрипованные), (например, «Axygen», США) для постановки в ротор  
на 36 пробирок.
Для приборов для ПЦР в реальном времени с детекцией через крышку (например, «Ю5».
«МхЗОООР»). Одноразовые полипропиленовые микропробирки для ПЦР на 0,2 мл  
(куполообразная крышка) (например, «Axygen», США).
Для амплификаторов. адаптированных для ПЦР-пробирок 0.2 мл («Gradient Palm Cycler»,  
«GeneAmp PCR System 2700», «MAXYGENE» и др.). Одноразовые полипропиленовые  
микропробирки для ПЦР на 0,2 мл (плоская крышка, нестрипованные) (например,  
«Axygen», США).
Для амплификаторов, адаптированных для ПЦР-пробирок 0,5 мл («Терцик» и др.).  
Одноразовые полипропиленовые микропробирки для ПЦР на 0,5 мл (плоская крышка,  
нестрипованные) (например, «Axygen», США).
3. Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия).
4. Набор электронных или автоматических дозаторов переменного объема (например,  
«Ленпипет», Россия).
5. Одноразовые наконечники с аэрозольным барьером до 200 мкл (например, «Axygen»,  
США).
6. Штативы для наконечников (например, «Axygen», США) и микропробирок на 0,5 (0,2) мл  
(например, «ИнтерЛабСервис», Россия).
7. Холодильник от 2 до 8 °С.
8. Отдельный халат и одноразовые перчатки.
9. Емкость с крышкой для дезинфицирующего раствора.
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АНАЛИЗА.
ЭТАП 1. ВЫДЕЛЕНИЕ РНК ИЗ ПРОБ.
(проводится в ЗОНЕ 1 - помещении для обработки исследуемого материала).  
Объем исследуемого материала для выделения РНК - 0,1 мл.
ВНИМАНИЕ! Для работы с РНК (этап постановки ОТ-ПЦР) необходимо использовать  
только одноразовые стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие  
специальную маркировку «RNase-free», «DNase-free».
А. При использовании комплекта реагентов «РИБО-сорб».  
Порядок работы.


--- стр. 13 ---
1. Лизирующий раствор и раствор для отмывки 1 (если они хранились при температуре  
от 2 до 8 °С) прогреть при температуре от 60 °С до полного растворения кристаллов.
2. Отобрать необходимое количество одноразовых пробирок на 1,5 мл (включая  
отрицательный и положительный контроли выделения). Промаркировать пробирки.
3. В пробирки раскапать по 450 мкл лизирующего раствора.
4. В пробирки внести по 100 мкл исследуемых образцов, используя наконечники с  
аэрозольными барьерами. Закрыть крышки и перемешать на вортексе. Осадить на  
центрифуге для сброса капель жидкости с крышки.
5. Для каждой панели необходимо поставить положительный контрольный образец  
(ПКО). Для этого в пробирку с лизирующим раствором добавить 90 мкл ОКО и 10 мкл  
ПКО-1-/ГСК, перемешать на вортексе и осадить капли жидкости с крышки.
6. Для каждой панели необходимо поставить отрицательный контрольный образец  
(ОКО). Для этого в пробирку с лизирующим раствором добавить 100 мкл ОКО,  
перемешать на вортексе и осадить капли жидкости с крышки.
7. Ресуспендировать сорбент, интенсивно перемешивая на вортексе. Добавить в каждую  
пробирку отдельным наконечником по 25 мкл ресуспендированного сорбента.
8. Перемешать содержимое пробирок на вортексе, поставить в штатив на 1 мин, еще раз  
перемешать и оставить на 5 мин.
9. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге при 10 тыс g (например, для  
центрифуги Eppendorf MiniSpin- 10 тыс об/мин) в течение 1 мин.
10. Отобрать надосадочную жидкость из каждой пробирки отдельным наконечником,  
используя вакуумный отсасыватель.
11. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора для отмывки 1. Перемешать на вортексе до  
полного ресуспендирования сорбента. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге  
при 10 тыс g в течение 1 мин. Отобрать надосадочную жидкость из каждой пробирки  
отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель.
12. Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3. Перемешать на вортексе до  
полного ресуспендирования сорбента. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге  
при 10 тыс g в течение 1 мин. Отобрать раствор для отмывки 3 из каждой пробирки  
отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель.
13. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора для отмывки 4. Перемешать на вортексе до  
полного ресуспендирования сорбента. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге  
при 10 тыс g в течение 1 мин. Полностью отобрать раствор для отмывки 4 из каждой  
пробирки отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель,
14. Высушить сорбент, поместив пробирки с открытыми крышками в термостат при  
температуре 60 °С на 15 мин.
V 0 G


--- стр. 14 ---
12
15. Ресуспендировать сорбент в 50 мкл РНК-буфера. Прогреть в термостате при  
температуре 60 °С 5 мин, перемешать на вортексе и процентрифугировать пробирки на  
максимальных оборотах микроцентрифуги ('-12 тыс g) в течение 2 мин.
Очищенная РНК может храниться до 4 ч при температуре от 2 до 8 °С. Для длительного  
хранения препарата, необходимо, не захватывая сорбент, перенести надосадочную  
жидкость в стерильную пробирку и хранить при температуре не выше минус 16 °С в  
течение 1 мес, или не выше минус 68 °С в течение года.
Б. При использовании комплекта реагентов «РИБО-преп».
Порядок работы.
1. Раствор для лизиса (если он хранился при температуре от 2 до 8 °С) прогреть при  
температуре от 65 °С до полного растворения кристаллов.
2. Отобрать необходимое количество одноразовых пробирок на 1,5 мл (включая  
отрицательный и положительный контроли выделения). Промаркировать пробирки.
3. В пробирки раскапать по 300 мкл раствора для лизиса.
4. В пробирки внести по 100 мкл исследуемых образцов, используя наконечники с  
аэрозольными барьерами. Закрыть крышки и перемешать на вортексе. Осадить на  
центрифуге для сброса капель жидкости с крышки.
5. Для каждой панели необходимо поставить положительный контрольный образец  
(ПКО). Для этого в пробирку с раствором для лизиса добавить 90 мкл ОКО и 10 1Йкл 
IiK O -1-H C V, перемешать на вортексе и осадить капли жидкости с крышки,
6. Для каждой панели необходимо поставить отрицательный контрольный образец  
(ОКО). Для этого в пробирку с лизирующим раствором добавить 100 мкл ОКО,  
перемешать на вортексе и осадить капли жидкости с крышки.
7. Содержимое пробирок прогреть 5 мин при 65 °С в термостате, перемешать на вортексе и  
осадить капли жидкости с крышки.
8. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора для преципитации, перемешать на вортексе.
9. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 5 мин при 13 тыс g.
10. Аккуратно отобрать надосадочную жидкость, не задевая осадок, используя вакуумный  
отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
11. Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3, плотно закрыть крышки,  
осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
12. Центрифугировать при 13 тыс g в течение 1-2 мин на микроцентрифуге.
13. Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную жидкость, используя  
вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
14. Добавить в пробирки по 200 мкл раствора для отмывки 4, плотно закрыть крышки и  
осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
jjjM


--- стр. 15 ---
15. Центрифугировать при 13 тыс g в течение 2 мин на микроцентрифуге.
16. Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную жидкость, используя  
вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы.
17. Поместить пробирки в термостат при температуре 65 °С на 5 мин для подсушивания  
осадка (при этом крышки пробирок должны быть открыты).
18. Добавить в пробирки по 50 мкл РНК-буфера. Перемешать на вортексе. Поместить в  
термостат при температуре 65 °С на 5 мин, периодически встряхивая на вортексе.
19. Центрифугировать пробирки при 13 тыс g в течение 1 мин на микроцентрифуге.  
Надосадочная жидкость содержит очищенные РНК и ДНК. Пробы готовы к постановке  
реакции обратной транскрипции и ПЦР.
Очищенная РНК может храниться до 4 ч при температуре от 2 до 8 °С. Для длительного  
хранения препарата, необходимо, не захватывая сорбент, перенести надосадочную  
жидкость в стерильную пробирку и хранить при температуре не выше минус 16 °С в  
течение 1 мес, или не выше минус 68 °С в течение года.
В. При использовании автоматической станции «NucliSENS® easyMAG™».
При использовании автоматической станции «NucliSENS® easyMAG™» и комплекта  
реагентов «ЕМ-плюс» совместно с набором реагентов возможно использование протоколов,  
позволяющих проводить выделение РНК из объемов образцов от 0,1 мл до 1 мл.
Процедура выделения проводится в соответствие с инструкцией к автоматической станции  
«NucliSENS® easyMAG™». Допускается использование режимов лизиса на борту прибора  
(«On-board») и вне прибора («Off-board»). Программируемый объем элюции - 55 мкл.
После окончания выделения РНК, извлечь пробирки из прибора и не позднее 30 мин  
после окончания процедуры выделения РНК провести реакцию ОТ-ПЦР.
Порядок работы также см. в методических рекомендациях по применению набора  
реагентов для выявления и дифференциации генотипов (1, 2, 3) вируса гепатита С {HCV)  в 
клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-  
флуоресцентной детекцией «АмплиСенс® ЯСК-1/2/3-ЕЕ» (производства ФГУН ЦНИИЭ  
Роспотребнадзора).
ЭТАП 2. ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ, ПЦР-  
АМПЛИФИКАЦИИ И ДЕТЕКЦИИ ПРОДУКТОВ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ,  
(проводится в ЗОНЕ 2 - помещении для проведения реакции обратной транскрипции и  
ПЦР-амплификации).
Общий объем реакции - 25 мкл, объем РНК-пробы -10 мкл.
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые  
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку  
«RNase-free», «DNase-free».
13/т
У'
V


--- стр. 16 ---
14/6 ^
Вариант FEP.
Порядок работы.
А. Подготовка реакционной смеси для проведения ПЦР.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно перед  
проведением анализа. Смешивать реагенты из расчета на необходимое число реакций,  
включающее тестирование исследуемых и контрольных образцов, необходимо согласно  
расчетной таблице (см. приложение 1).
1. До начала работы разморозить, тщательно перемешать на вортексе все реагенты набора и  
осадить капли с крышек пробирок.
2. Отобрать необходимое количество пробирок для амплификации на 0,2 мл или на 0,5 мл с  
учетом количества исследуемых, контрольных образцов (два контроля выделения, один  
контроль амплификации) и пробирок «Фон». Тип пробирок выбрать в зависимости от  
используемого прибора.
3. Для приготовления реакционной смеси в случае необходимости подготовки  
пробирок «Фон» необходимо в отдельной стерильной пробирке смешать из расчета на 1  
реакцию: 10 мкл ОТ-ПЦР-смеси-1-ЕЕР/ЕКТ-/]ГСК-1/2/3, 5 мкл ОТ-ПЦР-смеси-2-  
FEP/FRT и 0,25 мкл RT-G-mix-2 (см. также приложение 1, пункт А). Тщательно  
перемешать смесь на вортексе и осадить капли с крышки пробирки.
4. Добавить в две пробирки «Фон» по 15 мкл приготовленной смеси (без полимеразы  
(TaqF) и ТМ-Ревертазы (MMlv)) и по 10 мкл РНК-буфера, перемешать пипетированием.  
Сверху раскапать по 1 капле минерального масла для ПЦР.
ВНИМАНИЕ! После проведения амплификации образцы «Фон» можно хранить в течение  
1 мес при температуре от 2 до 20 °С и использовать многократно. Многократное  
использование пробирок «Фон» допускается при условии их использования с набором  
реагентов той же серии, того же типа выделительных реагентов и того же типа ПЦР-  
пробирок
5. В оставшуюся часть реакционной смеси добавить из расчета на 1 пробу 0,5 мкл  
полимеразы (TaqF) и 0,25 мкл ТМ-Ревертазы (MMIv) (см. также приложение 1,  
пункт А). Тщательно перемешать смесь на вортексе и осадить капли с крышки пробирки.  
Количество добавляемых в реакционную смесь ферментов полимеразы (TaqF) и ТМ-  
Ревертазы (MMlv), указанное в таблице в прилож ении  7, пункт  А, приведено с учетом  
уж е отобранных 30 мкл реакционной смеси для двух пробирок «Фон».
6. В случае повторного использования образцов «Фон» необходимо в отдельной  
стерильной пробирке смешать из расчета на 1 реакцию: 10 мкл ОТ-ПЦР-смеси-!-  
FEP/FRT-^^CF-l/2/3, 5 мкл ОТ-ПЦР-смеси-2-FEP/FRT, 0,25 мкл RT-G-mix-2, 0,5 мкл  
полимеразы (TaqF) и 0,25 мкл ТМ-Ревертазы (MMlv) (см. также приложение 1,
/