Набор реагентов для дифференциального выявления ДНК вирусов папилломы человека 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РеалБест ДНК ВПЧ ВКР генотип) по ТУ 9398-313-23548172-2011 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2012/13151 от 12.03.2012 · класс риска 1

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Папилломавирус человека нуклеиновая кислота ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 33 контракта, медианная цена за единицу 51 638 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
' f
У1БЕРЖ ДЕНЛ 
Приказом Росздравнадзора 
от 20 г. №
«УТВЕРЖДАЮ »
Генеральный директор 
^;^Вектор-Бест»
_М.Д. Хусаинов 
2011 г.
и и с т р:
по применению набора*р13гентов 
для дифференциального выявления ДНК вирусов папилломы человека 16, 18, 31, 33, 35, 39, 
45, 51, 52, 56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска методом полимеразной цепной
реакции в режиме реального времени 
«РсалБест ДНК ВПЧ ВКР генотип»
(комплект 1)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «РеалБест ДНК ВНЧ ВКР генотип» предназначен для дифференци­
ального выявления ДНК вирусов папилломы человека (ВНЧ) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 
56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска (ВКР) методом полимеразной цепной ре­
акции в режиме реального времени (НЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией 
продуктов НЦР в режиме реального времени.
Выделение ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов: «РсалБест 
ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 3» и «РеалБест 
экстракция 100».
Комплект 1  предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами 
планшетного типа «iQ iCycler», «iQ5 iCycler», «СРХ96» (фирма Bio-Rad, США), «ДТ-96» 
(ООО «ННО ДНК-Технология», Россия) или их ана;югами.
Комплект 1  рассчитан на проведение анализа 96 образцов, включая контрольные 
образцы.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Нринцип метода.
11рипцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фраг­
мента ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах; температурная денатурация, отжиг 
праймеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных по-
Ипструщия составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором
по производству Ткачевым В. К. и иач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А. В .
У .


--- стр. 2 ---
следовательностей с этих праймеров Taq ДИК-полимеразой.
В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресцен­
ции в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря ис­
пользованию специфичных для данных участков ДНК вирусов папилломы человека 16, 18, 
31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска гибридизационных 
ДНК-зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей ДНК, обеспечивая также 
дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’  конце флуоресцентный 
краситель, а на 3’  конце -  гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность 
флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5’-3’  нук- 
леазной активности Taq ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’  конца и происходит ра­
зобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрас­
танию сигнала флуоресценции.
При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образо­
вавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется 
исходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце.
Достоверность анализа контролируется по наличию положительного результата в об­
разце ПКО, который подвергается процедуре выделения ДНК вместе с анализируемыми 
биопробами.
Для анализа содержания ДНК ВПЧ ВКР в одном образце используется четыре про­
бирки, содержащие ГРС (PC) 1, 2, 3, 4 в каждой из которых осуществляется амплификация 
ДНК трёх из 12 типов ВПЧ (см. таблицу 1).
Таблица 1 .
Пробирка Тииы ВПЧ
ГРС 1 16, 18,39
ГРС 2 33,45,56
ГРСЗ 31,35,58
ГРС 4 52,51,59
Учет эффективности выделения ДНК ВПЧ ВКР из образцов обеспечивается выделе­
нием ДНК из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним кон­
трольным образцом (ВКО) -  ГРС (PC) 1, 2, 3.
В анализируемых образцах дополнительно оценивается содержание ДНК гена 1 3 -  
актина человека с целью валидации качества забора материала и повьппения достоверности 
результатов определения ДНК ВПЧ ВКР -  ГРС (PC) 4.
2.2. Состав набора:
-  положительный контрольный образец (ПКО) -  на основе плазмидной ДНК со 
встройкой фрагментов ДНК ряда вирусов папилломы человека, в том числе ДНК ВПЧ 16, 18,


--- стр. 3 ---
31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска -  2 пробирки (по
1,0 мл);
-  готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС ВПЧ ВКР генотип), лиофилизированная -  
4 планшета по 96 пробирок (каждый планшет состоит из 24 стрипов по 4 пробирки).
Набор дополнительно комплектуется:
-  стрипированными крышками для пробирок (48 стрипов по 8 штук) или оптической 
плёнкой -  5 листов.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Чувствительность выявления 100 копий ДНК ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 
56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска в стандартных образцах предприятия -  
100%.
3.2. Специфичность выявления ДНК ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59 
типов высокого канцерогенного риска (по образцам, не содержащим ДНК данного типа 
ВПЧ, но содержащим ДНК восьми других типов ВПЧ) -  100 %.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к ис­
кажению результатов ПЦР.
4.1. Потенциальный риск применения набора -  класс 1  (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами I11-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных 
болезней»,
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы 
выделения ДНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора­
торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, 
содержащим микроорганизмы 1-IV групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе­
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За­
прещается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре­
ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для 
пипеток.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз­
ных образцов.
У


--- стр. 4 ---
4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности 
ламинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных 
УФ ламп в течение 1  часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами 
дезинфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»;
0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»),
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици­
рующими средствами с последующей утилизацией.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
-  амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени:
«iQ iCycler», «iQ5 iCycler», «CFX96» (фирма Bio-Rad, США), «ДТ-96» (ООО «НПО 
ДНК-Технология», Россия) или их аналог;
-  П1ДР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой (например, «ЦиклоТемп» 
фирмы СП «РТС», Россия);
-  холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С;
-  пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с перемен­
ным объёмом, со сменными наконечниками (фирма Ленпипет, Россия; фирма Biohit, Фин­
ляндия);
-  перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные латексные или не- 
опреновые (перчатки «NeoTouch», фирма Ansell Healthcare, Германия);
-  одноразовые наконечники для пипеток с защитным фильтром /аэрозольным барье­
ром/ (фирма FinnTip, Финляндия);
-  штативы для микропробирок вместимостью 0,2 мл (фирма Хеликон, Россия);
-  контейнер для сброса отходов (например, «Контейнер для сброса острого инстру­
ментария -  ЕК-01», фирма КМ-11Р0ЕКТ, или аналогичный);
-  нож канцелярский.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Для анализа используются пробы выделенной ДНК, полученные из клинического ма­
териала с помощью наборов: «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «Ре- 
алБест ДНК-экстракция 3», «РеалБест экстракция 100» согласно инструкциям по примене­
нию соответствующих наборов.
Каждая группа образцов, проходящая через процедуру выделения ДНК, должна со­
держать положительный контрольный образец (ПКО) и отрицательный контрольный образец 
(ОКО), который является компонентом набора для выделения ДНК.
Если до проведения анализа образцы выделенной ДНК хранились в замороженном


--- стр. 11 ---


--- стр. 12 ---
УТВЕРЖДЕНА 
Приказом Росздравнадзора
от 20 г. №
«УТВЕРЖДАЮ » 
Генеральный директор 
« ^ ктор-Бест»
М.Д. Хусаинов 
2011 г.
ИПСТ1
по применению наЬора~реагентов 
для дифференциального выявления ДНК вирусов папилломы человека 16, 18, 31, 33, 35, 39, 
45, 51, 52, 56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска методом полимераз)юй цепной
реакции в режиме peajH ,noro времени 
«РеалБест ДНК ВПЧ ВКР гспотип»
(комплект 2)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «РеалБест ДНК ВНЧ ВКР генотип» предназначен для дифферепци- 
агп,ного выявления ДНК вирусов папилломы человека (ВНЧ) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 
56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска (ВКР) методом полимеразной цепной ре­
акции в режиме реального времени (НЦР) с гибридизационно-флуоресцентпой детекцией 
продуктов НЦР в режиме реального времени.
Выделение ДНК из клинических проб проводится с помощью наборов; «РеалБест 
ДНК-экснресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 3» и «РеалБест 
экстракция 100».
Комплект 2 предназначен для применения с регистрирующими амплификаторами ро­
торного типа: «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия), 
«Rotor-Gene Q» (фирма Qiagen, Г ’ ермания).
Комплект 2 рассчитан на проведение анализа 99 образцов, включая контрольные 
образцы.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Нринцип метода.
Принцип анализа основан па регистрации процесса амплификации выбранного фраг­
мента ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг 
праймеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных по­
следовательностей с этих праймеров I'aq ДНК-полимеразой.
В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигпа:юв флуоресцен-
Инструкция составлена сотрудниками ЗАО «Вектор-Бест»: Директором
по производству Ткачевым В.К. и иач. отделения производства ПЦР наборов Трухииой А. В .
Л


--- стр. 13 ---
ции в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря ис­
пользованию специфичных для данных участков ДНК вирусов папилломы человека 16, 18, 
31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска гибридизационных 
ДНК-зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей ДНК, обеспечивая также 
дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’  конце флуоресцентный 
краситель, а на 3’  конце -  гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность 
флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5’-3’  нук- 
леазной активности Taq ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’  конца и происходит ра­
зобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрас­
танию сигнала флуоресценции.
При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образо­
вавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется 
исходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце.
Достоверность анализа контролируется по наличию положительного результата в об­
разце ПКО, который подвергается процедуре выделения ДНК вместе с анализируемыми 
биопробами.
Для анализа содержания ДНК ВПЧ ВКР в одном образце используется четыре про­
бирки, содержащие PC 1,2, 3, 4, в каждой из которых осуществляется амплификация ДНК 
трёх из 12 типов ВПЧ (см. таблицу 1).
Таблица 1 .
Пробирка Типы ВПЧ
PC 1 16, 18,39
PC 2 33,45,56
РСЗ 31,35,58
PC 4 52,51,59
Учет эффективности выделения ДНК ВПЧ ВКР из образцов обеспечивается выделе­
нием ДНК из клинических проб совместно с предварительно внесенным внутренним кон­
трольным образцом (ВКО) -  PC 1, 2, 3.
В анализируемых образцах дополнительно оценивается содержание ДНК гена Р- 
актина человека с целью валидации качества забора материала и повышения достоверности 
результатов определения ДНК ВПЧ ВКР -  PC 4.
2.2. Состав набора:
-  положительный контрольный образец (ПКО) -  на основе плазмидной ДНК со 
встройкой фрагментов ДНК ряда вирусов папилломы человека, в том числе ДНК ВПЧ 16, 18, 
31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска -  2 пробирки (по
1,0 мл);


--- стр. 14 ---
-  реакционная смесь для ПЦР (PC 1, 2, 3, 4), лиофилизированная -  44 пробирки (по 1 1  
пробирок каждой PC, 1  пробирка на 9 определений);
-  раствор для восстановления (РВ) -  6 флаконов (по 2,0 мл).
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Чувствительность выявления 100 копий ДНК ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 
56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска в стандартных образцах предприятия -  
100 %.
3.2. Специфичность выявления ДНК ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59 
типов высокого канцерогенного риска (по образцам, не содержащим ДНК данного типа 
ВПЧ, но содержащим ДНК восьми других типов ВПЧ) -  100 %.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Внимание! Несоблюдение приведённых ниже требований может привести к  
искажению результатов ПЦР.
4.1. Потенциальный риск применения набора -  класс 1  (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами 11I-1V  групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных 
болезней».
4.3. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы 
выделения ДНК и постановки ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабора­
торий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, 
содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
4.4. При работе с набором следует надевать одноразовые медицинские перчатки.
4.5. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором пипеток пе­
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. За­
прещается их перемещение между рабочими местами.
4.6. Для проведения реакции амплификации с детекцией продуктов ПЦР в режиме ре­
ального времени необходимо использовать только одноразовые наконечники с фильтром для 
пипеток.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз­
ных образцов.
4.8. После окончания работ для предотвращения контаминации рабочие поверхности 
ламинарных боксов и лабораторных столов следует подвергнуть действию бактерицидных 
УФ ламп в течение 1  часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами 
дезинфицирующими средствами (такими, как: 0,2% раствор ДП-2Т; 1-3% раствор «Диабак»;
0,5% раствор «Лизафин»; 0,5-1% раствор «Мистраль»).
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфици­
рующими средствами с последуюп 1сй утилизацией.


--- стр. 15 ---
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
-  амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени роторного 
типа: «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия), «Rotor- 
Gene Q» (фирма Qiagen, Германия);
-  ПЦР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой (например, «ЦиклоТемп» 
фирмы СП «РТС», Россия);
-  холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 до 8 °С;
-  микроцентрифуга типа «Eppendorf MiniSpin» (фирма Eppendorf, Германия);
-  пипетки полуавтоматические (дозаторы механические) одноканальные с перемен­
ным объемом, со сменными наконечниками (фирма Ленпипет, Россия; фирма Biohit, Фин­
ляндия);
-  перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные латексные или не- 
опреновые (перчатки «NeoTouch», фирма Ansell Healthcare, Германия);
-  одноразовые наконечники для пипеток с защитным фильтром /аэрозольным барье­
ром/ (фирма FinnTip, Финляндия);
-  штативы для микропробирок вместимостью 1,5 мл, 2,0 мл и 0,2 мл (фирма Хеликон, 
Россия);
-  пробирки для ПЦР вместимостью 0,2 мл (фирма Axygen, США) или аналогичные;
-  контейнер для сброса отходов (например, «Контейнер для сброса острого инстру­
ментария -  ЕК-01», фирма КМ-ПРОЕКТ, или аналогичный).
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Для анализа используются пробы выделенной ДНК, полученные из клинического ма­
териала с помощью наборов: «РеалБест ДИК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «Ре- 
алБест ДНК-экстракция 3», «РеалБест экстракция 100» согласно инструкциям по примене­
нию соответствующих наборов.
Каждая группа образцов, проходящая через процедуру выделения ДНК, должна со­
держать положительный контрольный образец (НКО) и отрицательный контрольный образец 
(ОКО), который является компонентом набора для выделения ДНК.
Если до проведения анализа образцы выделенной ДНК хранились в замороженном 
виде, разморозить их и выдержать не менее 30 минут при температуре от 18 до 25 °С.
Выделенную ДНК хранить при температуре от 2 до 8 °С не более 2 суток.
Положительный контрольный образец (НКО) после вскрытия флакона хранить при 
температуре от 2 до 8 °С не более 1  мес.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка компонентов набора
Перед началом работы извлечь набор из холодильника, отобрать необходимое 
количество (по числу подготовленных проб, включая контроли: 1  ОКО и 1  ПКО) пробирок с