Набор реагентов для выявления возбудителей бактериальных кишечных инфекций методом ПЦР АмплиСенс® ОКИ бакто-скрин-FL — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2020/9813 от 30.03.2020 · класс риска 2б

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

Вид изделия: Множественные желудочно-кишечные патогены нуклеиновые кислоты ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 103 контракта, медианная цена за единицу 25 556 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного 
учреждения науки «Центральный 
научно-исследовательский институт 
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты 
прав потребителей и благополучия
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для выявления возбудителей 
бактериальных кишечных инфекций методом ПЦР
АмплиСенс® ОКИ бакто-скрин-FL
АмплиСенс ©
ш 1
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
город Москва, улица Новогиреевская, дом ЗА IVD


--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.............................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ.................................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА..................................................................................................................... 4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ.........................................................................................................6
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ...................................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ............................................................................12
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ.................................13
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ .................................................16
ВЗЯТИЕ. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА... 18
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ ДНК .............................20
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА ..............................................................................................21
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ.................................................................................21
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ........................................................22
ФОРМА 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F)...................................................................24
СОСТАВ........................................................................................................................................24
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ..................24
A. Подготовка проб для амплификации............................................................................25
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени».......26
B. Анализ и интерпретация результатов .........................................................................27
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L) ........................................................................32
СОСТАВ.........................................................................................................................................32
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ..................32
A. Подготовка проб для амплификации............................................................................32
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени».......33
B. Анализ и интерпретация результатов .........................................................................35
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ.......................39
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ.......................................................40
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ............................................41
ПРИЛОЖЕНИЕ 1..........................................................................................................................42
стр. 2 из 42


--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ГЭ - геномные эквиваленты
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеозидтрифосфат
К+ - положительный контроль ПЦР
К- - отрицательный контроль ПЦР
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
ПО - программное обеспечение
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
РУ - регистрационное удостоверение
УДГ - урацил-ДНК-гликозилаза
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный 
научно-исследовательский институт эпидемиологии» 
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав 
потребителей и благополучия человека
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
Е Н Е С - энтерогеморрагические Е. с о И
E IE C - энтероинвазивные Е . с о И
PBS - фосфатно-солевой буфер
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для выявления возбудителей 
бактериальных кишечных инфекций методом ПЦР 
АмплиСенс® ОКИ бакто-скрин-FL, далее -  набор реагентов, 
предназначен для качественного определения ДНК 
микроорганизмов:
- комплекса шигелла {Shigella spp.) / энтероинвазивных Е. соН 
(Е/ЕС) (без дифференцировки),
- рода сальмонелла {Salmonella spp.),
- комплекса энтерогеморрагических Е. соН (ЕНЕС) / 
S. dysenteriae I типа,
- термофильных кампилобактерий {Campylobacter spp.),
в биологическом материале (фекалии) и объектах 
окружающей среды (концентраты образцов воды) методом ПЦР 
с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов 
амплификации.
Набор реагентов не позволяет дифференцировать 
S. dysenteriae I типа от присутствия в исследуемом образце 
сочетания Shigella spp. / Е/ЕС и ЕНЕС. Для дифференциации
стр. 3 из 42


--- стр. 5 ---
микроорганизмов при помощи специфичных к этим участкам 
праймеров и фермента Taq-полимеразы. В составе 
реакционной смеси присутствуют флуоресцентно-меченые 
олигонуклеотиды, которые гибридизуются с комплементарными 
участками амплифицируемых ДНК-мишеней, в результате чего 
происходит нарастание интенсивности флуоресценции. Это 
позволяет регистрировать накопление специфических 
продуктов амплификации путем измерения интенсивности 
флуоресцентного сигнала с помощью амплификатора с 
системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме 
«реального времени».
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации 
ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК- 
гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата. Фермент УДГ 
распознает и катализирует разрушение цепей ДНК, содержащих 
дезоксиуридин, но не ДНК, содержащей дезокситимидин. 
Дезоксиуридин отсутствует в природной ДНК, но всегда 
присутствует в ампликонах, поскольку дезоксиуридинтрифосфат 
входит в состав смеси дНТФ в реагентах для амплификации. 
Дезоксиуридин делает контаминирующие ампликоны 
восприимчивыми к разрушению ферментом УДГ до начала 
амплификации ДНК-мишени, и, следовательно, они не могут 
быть в дальнейшем амплифицированы.
Фермент УДГ термолабилен и инактивируется при нагревании 
выше 50°С и поэтому не разрушает ампликоны мишени, 
нарабатываемые в процессе ПЦР.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке 
проводятся пять реакций - амплификация ДНК комплекса 
шигелл {Shigella spp.) / энтероинвазивных Е. соН (EIEC) (без 
дифференцировки), сальмонелл {Salmonella spp.), 
термофильных кампилобактерий {Campylobacter spp.), 
комплекса энтерогеморрагических Е. соН {ЕНЕС)! S. dysenteriae 
I типа, а также амплификация последовательности BKO-FL. 
Результаты амплификации ДНК выявляемых микроорганизмов, 
а также ДНК BKO-FL регистрируются по пяти различным 
каналам флуоресцентной детекции;
стр. 5 из 42


--- стр. 6 ---
Таблица 1
Канал для 
флуорофора FAM JOE ROX Су5 Су5.5
ДНК-мишень
ДНК комплекса 
ш иге л л
{S h ig e lla spp.) / 
энтероинвазив- 
ных Е . соН  
{ В Е С )
ДНК
энтерогемор- 
рагических 
Е . соН  {Е Н Е С ) /  
S. d y s e n te ria e  
I типа*
ДНК
сальмонелл
{S a lm o n e lla
spp.)
ДНК BKO-FL
ДНК
термофильных
кампило-
бактерий
{C a m p y lo b a c te r
spp.)
Область
амплификации
1раН
(инвазионный
плазмидный
антиген)
sfxl и stx2
(ген
Шигаподобого 
токсина-1 и ген 
Шигаподобного 
токсина-2)
Ttr (ген 
тиоционат 
редуктазы)
искусственная
нуклеотидная
последова­
тельность
23SrRNA
* При наличии в исследуемом образце ДНК S. dysenteriae i типа 
будет получен положительный сигнал по каналам для 
флуорофоров РАМ и JOE одновременно. Набор реагентов не 
позволяет дифференцировать S. dysenteriae I типа от 
присутствия в исследуемом образце сочетания патогенов 
Shigella spp. / EIEC и ЕНЕС.
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F
Форма 2: «ПЦР-комплект» вариант FRT-L
Формы 1  и 2 предназначены для проведения амплификации 
ДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме 
«реального времени» и позволяют выявлять ДНК в 
качественном формате. Для проведения полного ПЦР- 
исследования необходимо использовать комплекты реагентов 
для экстракции ДНК.
Форма 1  рассчитана на проведение 55 реакций 
амплификации, включая контроли. Форма 2 рассчитана на 
проведение 96 реакций амплификации, включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие 
характеристики:
стр. 6 из 42


--- стр. 7 ---
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Таблица 2
Микроорганизм
Вид
исследуемого
материала
Комплект для 
экстракции 
ДНК
Комплект для 
амплификации
Аналитическая
чувстви­
тельность
(предел
обнаружения),
ГЭ/мл^
Шигеллы { S h ig e lla  
spp.) / энтероин- 
вазивные Е . с о И  
{ В Е С )
концентраты 
образцов воды, 
фекалии
«РИБО-преп»,
«ДНК-сорб-В»
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-50 F, 
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-L
1x10^
Сальмонеллы 
{S a lm o n e lla  spp.)
концентраты 
образцов воды, 
фекалии
«РИБО-преп»,
«ДНК-сорб-В»
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-50 F, 
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-L
1x10^
Термофильные
кампилобактерии
{ C a m p y lo b a c te r
spp.)
концентраты 
образцов воды
«РИБО-преп»,
«ДНК-сорб-В»
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-50 F, 
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-L
1x10^
фекалии «РИБО-преп»,
«ДНК-сорб-В»
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-50 F, 
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-L
5x10^
Энтерогемор- 
рагические Е . с о Н  
{Е Н Е С ) 1  
S . d y s e n te h a e 
1  типа
концентраты 
образцов воды, 
фекалии
«РИБО-преп»,
«ДНК-сорб-В»
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-50 F, 
«ПЦР-комплект» 
вариант FRT-L
1x10^
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении 
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и 
хранение исследуемого материала» и «Подготовка 
исследуемого материала к экстракции ДНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает участки ДНК заявленных 
микроорганизмов при исследовании штаммов следующих 
микроорганизмов:
- штаммы из коллекции АТСС (American Туре Culture 
Collection, США) в концентрации не менее 1x10® ГЭ/мл: 
Salmonella entehca  subsp. enterica serovar Typhimurium 
ATCC® 14028™, Salmonella enterica subsp. enterica serovar 
Braenderup ATCC® BAA-664™, Campylobacter jejuni  subsp. 
jejuni ATCC® 43435™, Campylobacter jejuni  subsp. jejuni
^  Количество геномных эквивалентов микроорганизма (ГЭ) в 1 мл образца исследуемого 
материала.
стр. 7 из 42


--- стр. 11 ---
Повторяемость, воспроизводимость
Повторяемость и воспроизводимость были определены 
путем тестирования положительных и отрицательных 
модельных образцов. Положительные образцы представляли 
собой стандартные образцы предприятия содержащие 
ДНК Shigella species,  ДНК Campylobacter species,  
ДНК 5а/шопе//а species, ДНК ЕНЕС 1, ДНК ЕНЕС 2 с 
концентрациями 1x10^ ГЭ/мл каждого, в качестве 
отрицательного образца был использован реагент ОКО. 
Условия повторяемости включали в себя тестирование в одной 
и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с 
использованием одного и того же оборудования в пределах 
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости - 
тестирование в разных лабораториях, разными операторами, с 
использованием различного оборудования и разных серий 
набора реагентов.
Результаты для повторяемости, внутрисерийной 
воспроизводимости и межсерийной (межлабораторной) 
воспроизводимости представлены в табл. 3.
Таблица 3
АмплиСенс® 
ОКИ бакто- 
скрин-FL
Образцы
Повторяемость Внутрисерийная
воспроизводимость
Межсерийная
(межлабораторная)
воспроизводимость
Совпадение 
результатов с 
ожидаемыми
Совпадение
результатов,
%
Совпадение 
результатов с 
ожидаемыми
Совпадение
результатов,
%
Совпадение 
результатов с 
ожидаемыми
Совпадение
результатов,
%
Форма 1
Shigella
spp/ElEC 1 0 /1 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0
Campylo­
bacter spp 1 0 /1 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0
Salmonella
spp 1 0 /1 0 10 0 2 0 /2 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0
EHEC 1 0 /1 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0
Отрицате­
льные 1 0 /1 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0
Форма 2
Shigella
spp/ElEC 1 0 /1 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0
Campylo­
bacter spp 1 0 /1 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0
Salmonella
spp 1 0 /1 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0
EHEC 1 0 /1 0 10 0 2 0 /2 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0
Отрицате­
льные 1 0 /1 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0 2 0 /2 0 1 0 0
стр.11 из 42


--- стр. 12 ---
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Таблица 4
Результаты тест^ования набора реагентов  
АмплиСенс® ОКИ бакто-скрин-FL
Тип
образцов
Результаты применения 
АмплиСенс® ОКИ бакто-скрин-FL
Результаты применения 
референтного метода^
положительных отрицательных
Фекалии
Всего
исследовано 
1134 образца
Shigella  spp. /Е1ЕС
положительных 205 0
отрицательных 1 928
ЕНЕС/
S. dysenteriae  
1  типа
положительных 176 1
отрицательных 2 955
Salmonella  spp.
положительных 166 0
отрицательных 0 968
Campylobacter  spp.
положительных 268 2
отрицательных 7 857
Концентраты
образцов
воды
Всего
исследовано 
652 образца
Shigella  spp. /Е1ЕС
положительных 209 0
отрицательных 1 442
EHECI  
S. dysenteriae  
1  типа
положительных 211 0
отрицательных 1 440
Salmonella  spp.
положительных 208 0
отрицательных 0 444
Campylobacter  spp.
положительных 211 0
отрицательных 2 439
Были использованы:
- 986 образцов фекалий от пациентов из очагов групповой
и спорадической заболеваемости шигеллезом, 
сальмонеллезом, кампилобактериозом и
энтерогеморрагическим эшерихиозом. Отрицательные по 
содержанию бактериальных патогенов образцы фекалий 
получены от пациентов контрольной группы без диареи в 
анамнезе (100 образцов).
- 44 модельных образца фекалий, контаминированных 
ДНК S. c/yseп^eг/ae I типа в концентрации от 1x10® до 
1x10® ГЭ/мл.
- 4 модельных образца фекалий, контаминированных ДНК 
Shigella spp. в концентрации от 1x10® до 1x10® ГЭ/мл.
^ в качестве референтного метода использовались наборы реагентов «АмплиСенс® ОКИ- 
скрин-FL» (РУ № ФСР 2008/02265), «АмплиСенс® Эшерихиозы-FL» (РУ № ФСР 2010/07977).
стр. 12 из 42


--- стр. 13 ---
234 пробы концентратов образцов воды, полученных ФБУН 
ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора в период 2015- 
2019 гг.
418 модельных образцов концентратов воды,
контаминированных бактериальными патогенами в
концентрации 1x10^ ГЭ/мл.
Таблица 5
Диагностические характеристики набора реагентов
А____________® Г \1 Г 1 Л ЙГ______________г-1
Выявляемый
патоген Тип образцов
Диагностическая 
чувствительность^ 
(с доверительной 
вероятностью 95 % 
в интервале), %
Диагностическая
специфичность'*
(с доверительной 
вероятностью 95 % в 
интервале), %
S h ig e lla  spp. / 
E IE C
Фекалии 99,5 % (98,5- 100) 100% (99,7- 100)
Концентраты образцов 
воды 99,5% (98,6- 100) 100% (99,3- 100)
Е Н Е С /
S . d y s e n te r ia e 
I типа
Фекалии 98,8% (98,3- 100) 99,9% (99,7- 100)
Концентраты образцов 
воды 99,5% (98,6- 100) 100% (99,3- 100)
S a lm o n e lla
spp.
Фекалии 100% (98,2- 100) 99,9% (99,7- 100)
Концентраты образцов 
воды 100% (98,6- 100) 100% (99,3- 100)
C a m p y lo b a c te r
spp.
Фекалии 97,5% (98,9- 100) 99,8% (99,7- 100)
Концентраты образцов 
воды 99,1% (98,6-100) 100% (99,3- 100)
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ 
УТИЛИЗАЦИИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей 
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования
биологического материала на наличие возбудителей 
инфекционных болезней, с соблюдением санитарно- 
эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность 
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности 
(опасности) и возбудителями паразитарных болезней», 
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и
^ Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом. 
''Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
стр. 13 из 42


--- стр. 14 ---
i
методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы 
лабораторий, использующих методы амплификации 
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим 
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе необходимо всегда выполнять следующие 
требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С, 
относительная влажность от 15 до 75%.
- Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно­
опасные, организовывать работу и хранение в соответствии 
с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и 
возбудителями паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя 
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322- 
08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп 
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных 
болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. 
Анализ проводится в отдельных помещениях (зонах). Работу 
следует начинать в Зоне Экстракции, продолжать в Зоне 
Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы, 
оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена 
предыдущая стадия процесса.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком 
годности, а также использованные реагенты, упаковку^, 
биологический материал, включая материалы, инструменты 
и предметы, загрязненные биологическим материалом, 
следует удалять в соответствии с требованиями 
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические 
требования к обращению с медицинскими отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации 
(пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо 
открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, 
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР 
лабораторной зоны, оборудования и реагентов.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые
^ Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные 
реагенты, упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г.
стр. 14 из 42


--- стр. 30 ---
ФОРМА 1
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,  
если получены правильные результаты для контролей  
этапов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с  
табл. 11 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 11
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Конт­
роль
Контроли­
руемый 
этап ПЦР- 
исследо- 
вания
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора {Ct)
FAM JOE ROX Су5 Су5.5
ОК Экстракция
ДНК
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
К- ПЦР
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
К+ ПЦР
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
м.
►  ф
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение 
порогового цикла {Ct) по любому из указанных каналов для 
флуорофоров (см. табл. 11) отсутствует или лревышает 
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию 
и детекцию для всех образцов, в которых не обнаружена 
специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам 
для флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Суб.5 
определено значение порогового цикла (Ct) менее 
граничного. Вероятна контаминация лаборатории 
продуктами амплификации или контаминация реагентов, 
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР- 
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению 
и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР- 
исследование для всех образцов, в которых обнаружена 
специфическая ДНК, начиная с этапа экстракции ДНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для 
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Суб.5
стр. 30 из 42


--- стр. 31 ---
определено значение порогового цикла (Ct) менее 
граничного. Вероятна контаминация лаборатории 
продуктами амплификации или контаминация реагентов, 
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР- 
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению 
и ликвидации источника контаминации и повторить 
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых 
обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового 
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует 
участок характерного экспоненциального подъема (график 
представляет собой приблизительно прямую линию). 
Необходимо проверить правильность выбранного уровня 
пороговой линии или параметров расчета базовой линии. 
Если результат получен при правильном уровне пороговой 
линии (базовой линии), требуется повторно провести 
амплификацию и детекцию для этого образца.
ФОРМА 1 _________________________________________________________________
стр. 31 из 42


--- стр. 32 ---
ФОРМА 2
ФОРМА 2 («ПЦР-комплект» вариант FRT-L)
СОСТАВ
«ПЦР-комплект» вариант FRT-L - комплект реагентов для 
амплификации участков ДНК микроорганизмов комплекса 
шигелла {Shigella spp.) / энтероинвазивных Е. СоН (Е/ЕС) (без 
дифференцировки), рода сальмонелла {Salmonella spp.), 
термофильных кампилобактерий {Campylobacter spp.), 
комплекса энтерогеморрагических Е. СоН {ЕНЕС)  / S. 
Dysenteriae I типа, с гибридизационно-флуоресцентной 
детекцией в режиме «реального времени» - позволяет 
проводить ПЦР-исследование в качественном формате.
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь ОКИ бакто-скрин- 
Lyo Порошок белого цвета - 96 пробирок 
объемом 0,2 мл
К+ ОКИ бакто-скрин Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,5 1 пробирка
к- Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,5 1  пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная 
жидкость 1.0 1  пробирка
ОКО Прозрачная бесцветная 
жидкость 1,2 1  пробирка
Буфер для элюции Прозрачная бесцветная 
жидкость 5,0 3 пробирки
Комплект реагентов рассчитан на проведение 96 реакций 
амплификации, включая контроли.
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО 
ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и  
контрольных образцов используются одноразовые  
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для амплификации
Общий объем реакционной смеси -  25 мкл, включая объем
пробы ДНК -  25 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок с готовой 
лиофилизированной реакционной ПЦР-смесью ОКИ бакто-
1 1Реагент используется взамен реагента для элюции, входящего в состав комплекта для 
экстракции «РИБО-преп».
стр. 32 из 42


--- стр. 37 ---
ФОРМА 2
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше, 
прилагаемом к набору реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,  
если получены правильные результаты для контролей  
этапов экстракции и амплификации ДНК в соответствии с  
табл. 16 и вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 16
Результаты для контролей различных этапов
ПЦР-исследования
Конт­
роль
Контроли­
руемый 
эта л ПЦР- 
исследо- 
вания
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора {Ct)
FAM JOE ROX Су5 Су5.5
ОК Экстракция
ДНК
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
к- ПЦР
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
олределено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
к+ ПЦР
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение 
порогового цикла {Ct) по любому из указанных каналов для 
флуорофоров (см. табл. 16) отсутствует или превышает 
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию 
и детекцию для всех образцов, в которых не обнаружена 
специфическая ДНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам 
для флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Суб.5 
определено значение порогового цикла (Ct) менее 
граничного. Вероятна контаминация лаборатории 
продуктами амплификации или контаминация реагентов, 
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР- 
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению 
и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР- 
исследование для всех образцов, в которых обнаружена 
специфическая ДНК, начиная с этапа экстракции ДНК.
стр. 37 из 42


--- стр. 38 ---
ФОРМА 2
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для 
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Су5.5 
определено значение порогового цикла (Cf) менее 
граничного. Вероятна контаминация лаборатории 
продуктами амплификации или контаминация реагентов, 
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР- 
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению 
и ликвидации источника контаминации и повторить 
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых 
обнаружена специфическая ДНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового 
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует 
участок характерного экспоненциального подъема (график 
представляет собой приблизительно прямую линию). 
Необходимо проверить правильность выбранного уровня 
пороговой линии или параметров расчета базовой линии. 
Если результат получен при правильном уровне пороговой 
линии (базовой линии), требуется повторно провести 
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 38 из 42


--- стр. 39 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и 
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 15 мес. Набор реагентов с истекшим сроком 
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых 
реагентов соответствует сроку годности, указанному на 
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не 
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при 
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах, 
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых 
транспортных средств.
«ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F при получении 
разукомплектовать в соответствии с указанными 
температурами хранения. Допускается хранение «ПЦР- 
комплекта» вариант FRT-50 F без разукомплектации при 
температуре от 2 до 8 °С не более 3 месяцев от даты 
изготовления.
Хранение.
Форма 1. «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F хранить в 
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР- 
буфера-В, полимеразы (TaqF) и ПЦР-смеси-FL ОКИ бакто- 
скрин. ПЦР-буфер-В, полимеразу (TaqF) и ПЦР-смесь-FL ОКИ 
бакто-скрин хранить в морозильной камере при температуре от 
минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL ОКИ бакто-скрин 
хранить в защищенном от света месте.
Форма 2. «ПЦР-комплект» вариант FRT-L хранить в 
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С.
Лиофилизированные реагенты (ПЦР-смесь ОКИ бакто-скрин- 
Lyo) хранить в пакетах с влагопоглотителем. ПЦР-смесь ОКИ 
бакто-скрин-Lyo хранить в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать 
регламентированный температурный режим.
стр. 39 из 42


--- стр. 40 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных 
параметров и характеристик набора реагентов требованиям, 
указанным в технической и эксплуатационной документации, в 
течение указанного срока годности при соблюдении всех 
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и 
ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по 
адресу 111123, г.Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail: 
obtk@pcr.ru^^.
При выявлении побочных действий, не указанных в 
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных 
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств, 
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских 
работников при применении и эксплуатации набора реагентов, 
рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному 
выше, и в уполномоченную государственную регулирующую 
организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере 
здравоохранения) в соответствии с действующим 
законодательством.
Заведующий НПЛ ОМДиЭ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии (/ ^
Роспотребнадзора
Е.Н. Родионова
15
Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету 
потребителя на сайте: www.amplisens.ru.
стр. 40 из 42


--- стр. 41 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
%
REF Номер по каталогу
А
LOT Код партии
V
IVD Медицинское изделие для 
диагностики in vitro
VER Дата изменения С И
1
Температурный диапазон
ш 1
Изготовитель d]
f
Беречь от влаги
Осторожно! Обратитесь к 
инструкции по применению
Содержимого достаточно для 
проведения п-количества 
тестов
Использовать до
Обратитесь к инструкции по 
применению
Не допускать воздействия 
солнечного света
Дата изготовления
стр. 41 из 42