Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения тироксина в сыворотке крови человека ("ТироидИФА-тироксин") по ТУ 9398-232-98539446-2011 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/12293 от 18.11.2011 · класс риска 1

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Общий тироксин (ТТ4) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 50 контрактов, медианная цена за единицу 152 604 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДЕНА» \\ J  X  1 _У I  j х . y x v .
Приказом Росздравнадзора 
о т__________20 г. № ____
Г енеральный директор 
ООО «Компания Алкор Био»
___Швырев М.В.
«13» апреля 2011г.
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ 
КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ТИРОКСИНА
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА 
(«Т ироидИФ А-тироксин»)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ТироидИФА-тироксин» предназначен для количественного 
определения тироксина (далее ТД в сыворотке крови человека методом твердофазного 
иммуноферментного анализа.
1.2. Тироксин —  тироидный гормон с молекулярной массой 777 Да. Тироксин 
является одним из гормонов, синтезируемых щитовидной железой. Количественное 
определение уровня тироксина в крови имеет диагностическое значение при оценке 
функционального состояния щитовидной железы.
1.3. Набор «ТироидИФА-тироксин» рассчитан на проведение анализа в 
дубликатах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и 
одной пробы для определения оптической плотности раствора ТМБ при использовании всех 
стрипов одновременно (всего 96 определений).
П р и м е ч а н и е :  в случае дробного применения набор может быть использован  
только в течение месяца после вскрытия компонентов набора.
2 . ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2Л. Принцип действия
В наборе «ТироидИФА-тироксин» использован вариант конкурентного 
твердофазного иммуноферментного анализа. В лунках, при добавлении раствора АНС-Т4, 
исследуемого образца и конъюгата Т4-пероксидаза, во время инкубации устанавливается 
равновесие между конъюгатом и эндогенным Т4  сыворотки крови в процессе связывания с 
антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связанного 
антителами конъюгата обратно пропорционально количеству Т4  в исследуемом образце.
(Рисунок 1).


--- стр. 2 ---
Конъюгат Т4-пероксидаза
Планшет с 
антителами к Т4
О Эндогенный Т4 
конкурирует с конъюгатом за 
связывание с антителами
Рисунок 1. Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. 
Степень окраски прямо пропорциональна количеству связанного антителами конъюгата. 
После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного 
графика рассчитывается концентрация Т4  в исследуемых образцах.
2.2. Состав набора
- комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с 
иммобилизованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к 
тироксину, маркирован «Стрипы с моноклональными антителами к тироксину» —  1  
упаковка;
- калибровочные пробы (КП), содержащие известные количества Т4. Флаконы 
маркированы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», «Калибровочная 
проба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Калибровочная 
проба №6»; точные значения концентраций Т4  в калибровочных пробах указаны на этикетках 
флаконов, ориентировочные -  0; 15; 30; 60; 150; 400 нмоль/л- 6 флаконов (лиофилизованные 
'препараты или жидкости по 0,5 мл);
- конъюгат Т4-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» -  1  флакон (14 мл);
- раствор 6-анилинонафтил-1-сульфокислоты, маркирован «АНС-Т4» -  1  флакон 
(14 мл);
- концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован 
«Буфер Р» -  1  флакон (14 мл);
- раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» -  1  флакон (14 мл);
- стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» -  1  флакон (14 мл);
- контрольная сыворотка с известным содержанием Т4, маркирована 
«Контрольная сыворотка» -  1  флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл);
- прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2- 
слойного полиэтилена).
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Специфичность. Перекрестная реакция антител к Т4  с другими тироидами 
приведена в Таблице 1.


--- стр. 3 ---
Таблица 1
Тироид Перекрестная реакция, %
L-Тироксин 100,0
L-T рийодтиронин 8,0
L-Дийодтирозин 0,001
3.2. Коэффициент вариации результатов определения Т4  в одном и том же образце 
сыворотки крови человека с использованием набора «ТироидИФА-тироксин» не превышает 
8%.
3.3. Линейность. Зависимость концентрации Т4  в образцах сыворотки крови при 
разведении их калибровочной пробой №1 имеет линейный характер в диапазоне концентраций 
калибровочных проб №2 - №6 и составляет 90-110 %.
3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» 
тироксина —  проверка соответствия значения определяемой концентрации Т4  расчетной 
величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и 
калибровочной пробы №3. Процент открытия составляет 90-110 %.
3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором 
концентрация Т4  в сыворотке крови человека не превышает 10,0 нмоль/л.
3.6. Диапазон ожидаемых значений. Содержание Т4  измеряли в сыворотке крови, 
взятой с 9 до 11 часов у 40 здоровых лиц в возрасте 21-45 лет. Диапазон измеренных 
концентраций составил 53,0- 158 нмоль/л.
Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности метода, 
особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории. По этой 
причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленные изготовителем 
значения только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будут определены 
диапазоны ожидаемых значений, характерных для конкретной популяции в месте 
расположения лаборатории.
П р и м е ч а н и е :  в наборе «ТироидИФА-тироксин» значения концентраций  
1калибровочных проб выражены в нмоль/л. Для пересчета концентраций тироксина в  
мкг/дл необходимо значение концентрации в нмоль/л умножить на 0,0776.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора —  класс 1 .
4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются 
нетоксичными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 
«Лаборатории медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1 Н раствор соляной кислоты. Избегать 
разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на кожу и 
слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством проточной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые 
перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые образцы являются 
потенциально инфицированным материалом, способным длительное время сохранять и 
передавать возбудителей различных вирусных инфекций.


--- стр. 4 ---
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набором, 
должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение 
в помещениях, предназначенных для работы с наборами.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
• Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять 
оптическую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
• прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер), 
позволяющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре 
+37°С;
• пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с 
изменяемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на 
1000-5000 мкл;
• пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, 
позволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
• цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл;
• стакан стеклянный подходящего объема;
• вода дистиллированная;
• бумага фильтровальная;
• перчатки резиновые или пластиковые;
• 1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;
• контейнер для дезинфекции;
• ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После 
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После 
центрифугирования сыворотку переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не разрешается использовать плазму крови, 
гемолизированную или мутную сыворотку, а также образцы сыворотки, содержащие азид 
натрия.
6.3. Образцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2.. ,8°С не 
более 2-х суток; при необходимости более длительного хранения рекомендуется 
аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С и ниже. 
Не допускается повторное замораживание образца.


--- стр. 5 ---
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7Л. Подготовка реагентов
7ЛЛ. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо выдержать при 
комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на 
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7Л.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к 
использованию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной 
сыворотки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, 
прилипшие к стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки 
перевернутыми на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и 
контрольной сывороткой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. 
Выдержать флаконы в течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. 
Затем, аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного 
растворения, избегая пенообразования. В течение следующих 10 минут выдержать 
флаконы при комнатной температуре, периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат готов к использованию. Расход конъюгата на один стрип 
составляет 1,15 мл.
7.1.4. Раствор АНС-Т4  г о т о в  к  использованию. Расход раствора АНС-Т4  на один 
стрип составляет 1,15 мл.
7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Р развести 
дистиллированной водой в 20 раз.
Например:
5 мл буфера Р + 95 мл дистиллированной воды.
Тщательно перемешать, избегая пенообразования.
7.1.6.  Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на 
один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.7.  Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип 
составляет 1,15 мл.
7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно 
перемешаны и доведены до комнатной температуры.
В Приложении 1  приведена схема проведения анализа.
7.2. Постановка анализа
7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим 
образом:
A l, А2 -  № 1  -  для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
B l, В2 -  № 2 -  для измерения величины оптической плотности КП №1;
С 1, С2 -  № 3 -  для измерения величины оптической плотности КП №2;
D l, D2 -  № 4 -  для измерения величины оптической плотности КП №3;
E l, Е2 -  № 5 -  для измерения величины оптической плотности КП №4;
FI, F2 -  № 6 -  для измерения величины оптической плотности КП №5;
G l, G2 -  № 7 -  для измерения величины оптической плотности КП № 6;
H I, Н2 -  № 8  -  для измерения величины оптической плотности контрольной 
сыворотки.


--- стр. 6 ---
7.2.2. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 100 мкл раствора АНС-Т4.
7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 20 мкл калибровочных проб и 
контрольной сыворотки, в оставшиеся лунки -  по 20 мкл исследуемой сыворотки крови в 
дубликатах.
П р и м е ч а н и е :  общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки  
и исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации  
разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным  
результатам.
7.2.4. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 100 мкл конъюгата.
7.2.5.  Инкубировать стрипы в течение 60 минут при встряхивании в 
термостатируемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 500-800 об/мин.
7.2.6. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с 
дезинфицирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором 
перекиси водорода) и промыть лунки четыре раза. При каждой промывке во все лунки 
добавить по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5., встряхнуть рамку 
на шейкере в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После последнего 
декантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со 
стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройства.
7.2.7. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать 
стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15-30 минут в 
зависимости от степени развития окраски.
7.2.8. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, 
как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, 
перемешать на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре.
7.2.9. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета 
непосредственно после выполнения п. 7.2.8., то следует иметь в виду, что окраска в 
лунках планшета стабильна не более 20 минут при комнатной температуре.
П р и м е ч а н и е :  максимальная оптическая плотность не должна превышать  
пределов линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра  
необходимо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая  
плотность не более 2,5 ед. ОП.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в лунках 
при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической плотности в 
лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
П р и м е ч а н и е :  среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках  
А1 иА2 не должно превышать 0,09 ед.ОП