Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения тиреоглобулина в сыворотке крови человека («ТироидИФА-ТГ») по ТУ 9398-222-98539446-2010 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/11315 от 13.07.2011 · класс риска 1

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Тиреоглобулин ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 89 контрактов, медианная цена за единицу 10 187 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 2 ---
1.3. Набор «ТироидИФА-ТГ» рассчитан на проведение анализа в дубликатах 
40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной 
пробы для определения оптической плотности раствора ТМБ при использовании всех 
стрипов одновременно (всего 96 определений).
П р и м е ч а н и е :  в случае дробного применения набор может быть использован только в  
течение месяца после вскрытия компонентов набора.
2. Х А Р А К Т Е Р И С Т И К И  Н А Б О Р А
2.1.П р и н ц и п  действия
В наборе «ТироидИФА-ТГ» использован «сэндвич»-вариант твердофазного иммуно- 
ферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моноклональных 
антитела с различной эпитопной специфичностью к ТГ. Одно из них иммобилизовано на 
твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с пероксидазой хре­
на. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата анти-ТГ-пероксидаза, во 
время инкубации одновременно происходит иммобилизация ТГ, содержащегося в иссле­
дуемом образце, и связывание образовавшегося комплекса с конъюгатом.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связавшегося конъю­
гата прямо пропорционально количеству ТГ в исследуемом образце (Рисунок 1).
« » «
ТГ анти-ТГ-пероксидаза
Планшет 
с антителами к ТГ
Р и сун о к 1. С хем а анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. 
Степень окраски прямо пропорциональна концентрации ТГ в анализируемых пробах, По­
сле измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного 
графика рассчитывается концентрация ТГ в исследуемых образцах.
2.2. С о ста в  набора
• комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными 
на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к ТГ, маркирован 
«Стрипы с моноклональными антителами к ТГ» — 1  упаковка;
• калибровочные пробы (КП), аттестованные по сертифицированному референсно- 
му материалу ТГ BCR CRM 457, содержащие известные количества ТГ. Флаконы марки­
рованы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», «Калибровочная проба 
№3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Калибровочная проба 
№6»; точные значения концентраций ТГ в калибровочных пробах указаны на этикетках 
флаконов, ориентировочные - 0; 3; 10; 30; 100; 300 нг/мл - 6 флаконов (лиофилизованные 
препараты или жидкости по 0,5 мл);
• конъюгат анти-ТГ-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» — 1  флакон (14 мл);
2


--- стр. 3 ---
• водно-солевой раствор для разведения образцов сыворотки крови, маркирован 
«Буфер Д» — 1  флакон (3,0 мл);
• концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован 
«Буфер Р» — 1  флакон (14 мл);
• раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» — 1  флакон (14 мл);
• стоП‘реагент (1 Н соляная кислота), м аркирован «С топ-реагент» — 1  флакон 
(14 мл);
• контрольная сыворотка с известным содержанием ТГ, маркирована «Контрольная 
сыворотка» — 1  флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл);
• прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2- 
слойного полиэтилена).
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Специфичность. Не обнаружено перекрестной реакции обоих моноклональных 
антител с альфа-фетопротеином, фолликулостимулирующим гормоном (ФСГ), ти- 
роксинсвязывающим глобулином (ТСГ), дийодтиронином (Т2), трийодтиронином (ТЗ), 
тироксином (Т4).
3.2. Коэффициент вариации результатов определения ТГ в одном и том же образце 
сыворотки крови человека с использованием набора «ТироидИФА-ТГ» не превышает 8%.
3.3. Линейность. Зависимость концентрации ТГ в образцах сыворотки крови при 
разведении их буфером Д имеет линейный характер в диапазоне концентраций калибро­
вочных проб №2 - №6 и составляет 90-110%.
3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» 
ТГ — проверка соответствия значения определяемой концентрации ТГ расчетной величи­
не, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и калибро­
вочной пробы №3. Процент открытия составляет 90-110%.
3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концен­
трация ТГ в сыворотке крови человека не превышает 1  нг/мл.
3.6. Хук-эффект высоких концентраций. В наборах реагентов, основанных на 
«сэндвич»-принципе анализа, при высоких концентрациях аналита зависимость величины 
оптической плотности от концентрации становится обратно пропорциональной (так назы­
ваемый хук-эффект высоких концентраций). При использовании набора «ТироидИФА- 
ТГ » хук-эффект не обнаружен вплоть до концентрации ТГ 30 О О О  нг/мл,
3.7. Диапазон ожидаемых значений. Содержание ТГ измеряли у 223 здоровых лиц 
в возрасте 2 1 ^ 5  лет. Измеренная концентрация ТГ не превышала 55 нг/мл в 99,1% случа­
ев.
Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности метода, 
особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории. По 
этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленные изгото­
вителем значения только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будут определе­
ны диапазоны ожидаемых значений, характерных для конкретной популяции в месте рас­
положения лаборатории.


--- стр. 4 ---
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора — класс 1.
4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксич­
ными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 «Ла­
боратории медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1  Н раствор соляной кислоты. Избегать раз­
брызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на ко­
жу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством про­
точной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластико­
вые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые образцы 
являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время со­
хранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набо­
ром, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
• Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптиче­
скую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
• прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер), позво­
ляющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре +37°С;
• пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с из­
меняемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; 40-200 мкл; 200-1000 мкл; 1000- 
5000 мкл;
• пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, по­
зволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
• цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл;
• стакан стеклянный подходящего объема;
• вода дистиллированная;
• бумага фильтровальная;
• перчатки резиновые или пластиковые;
• 1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;
• контейнер для дезинфекции;
• ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.


--- стр. 5 ---
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор Крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После 
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После центрифу­
гирования сыворотку переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не следует использовать плазму крови, гемолизиро- 
ванную или мутную сыворотку, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.3. Образцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2...8°С не 
более 2-х суток; при необходимости более длительного хранения (до 3-х месяцев) рекомен­
дуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20° С и 
ниже. Не допускается повторное замораживание образца.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо выдержать при 
комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на 
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к исполь­
зованию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыворотки 
перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стен­
кам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми на 
сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сыворот­
кой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Вьщержать флаконы в 
течение 10 минут при комнатной температуре (+18...25°С) без перемешивания. Затем, ак­
куратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворения, 
избегая пенообразования. В течение следующих 10 минут выдержать флаконы при ком­
натной температуре, периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат анти-ТГ-пероксидаза готов к использованию. Расход конъюгата Е 
на один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.4. Буфер Д готов к использованию.
7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Р развести дис­
тиллированной водой в 20 раз.
Например:
5 мл буфера Р + 95 мл дистиллированной воды.
Тщательно перемешать, избегая пенообразования.
7.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ 
на один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип 
составляет 1,15 мл.
7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно пере­
мешаны и доведены до комнатной температуры (+18...25°С).
В Приложении 1  приведена схема проведения анализа.
7.1.9. Разведение исследуемых образцов сывороток крови. Если по предваритель­
ным данным или по результатам анализа (см. п. 9.3.) значения концентрации ТГ в иссле­
дуемых образцах выше КП №6, образцы следует развести буфером Д в 50 раз. Пример 
подготовки образца к анализу:
490 мкл буфера Д + 10 мкл исследуемого образца.
При каждом разведении необходимо тщательное перемешивание.


--- стр. 6 ---
7.2. П о стан о в к а  анализа
7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим 
образом:
А1, А2 -  № 1  - для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
В1, В2 -  № 2 ' для измерения величины оптической плотности КП №1;
С1, С2 -  № 3 - для измерения величины оптической плотности КП №2;
D1, D2 -  № 4 - для измерения величины оптической плотности КП №3;
Е1, Е2 -  № 5 - для измерения величины оптической плотности КП №4;
F1,F2 -  № 6 - для измерения величины оптической плотности КП №5;
G1, G2 -  № 7 - для измерения величины оптической плотности КП №6;
Н1, Н2 ~ № 8 - для измерения величины оптической плотности контрольной сыво­
ротки.
7.2.2. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 100 мкл раствора конъюгата Е.
7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 50 мкл калибровочных проб и контроль­
ной сыворотки, в оставшиеся лунки по 50 мкл исследуемой сыворотки крови в дублика­
тах.
П р и м е ч а н и е :  общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и  
исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации  
разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным резуль­
татам.
7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 60 минут при встряхивании в терм остати- 
руемом ш ейкере п р и  тем пературе + 3 7 ° С  со скоростью  500-800 об/мин.
7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи­
цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси во­
дорода) и промыть лунки пять раз. При каждой промывке во все лунки добавить 
по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5., встряхнуть рамку на 
шейкере в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После последнего де­
кантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со 
Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройст­
ва.
7.2.6. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать 
стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15-30 минут в зави­
симости от степени развития окраски.
П р и м е ч а н и е :  максимальная оптическая плотность не должна превышать пределов  
линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра необхо­
димо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая плотность  
не более 2,5 ед. ОП.
7.2.7. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как 
и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, перемешать 
на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре (+18.. .25°С).
7.2.8. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо­
средственно после выполнения п. 7.2.7., то следует иметь в виду, что окраска в лунках 
планшета стабильна не более 20 минут при температуре +18.. .25°С.


--- стр. 7 ---
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность раствора 
в лунках при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо в ы ч и т а т ь  величину оптической плотности 
в лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
П р и м е ч а н и е :  среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках А1 и  
А2 не должно превышать 0,09 ед.ОП.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей от 
концентрации ТГ (нг/мл) в калибровочных пробах (Рисунок 2). Внешний вид графика за­
висит от способа преобразования осей.
П р и м е ч а н и е  1 : для построения калибровочных графиков рекомендуется использо­
вать Программное обеспечение «ИФЛ Мастер».
П р и м е ч а н и е  2 :  для построения калибровочного графика на масштабной бумаге необ­
ходимо использовать данные оптических плотностей после вычитания из них средней вели­
чины оптической плотности лунок с ТМБ.
Если программа фотометра не позволяет вычитать величину оптической плотности  
лунок А1 и А2, то необходимо пользоваться формулой:
В— В т ,
где В -  среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках, содержа­
щих калибровочные или исследуемые пробы;
Вт-среднее арифметическое значение оптической плотности лунок А1 и А2.
9.2. Определить содержание ТГ в пробах по калибровочному графику. В случае до­
полнительного разведения образцов необходимо измеренную концентрацию ТГ умножить 
на фактор разведения.
9.3. Экстраполяция калибровочного графика для значений концентрации ТГ, пре­
вышающих номинал КП №6, не допускается. Для точного определения концентрации ТГ 
в таких образцах необходимо выполнить их разведение в соответствии с п. 7.1.9.