Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения ракового антигена СА 19-9 в сыворотке крови человека («ОнкоИФА-СА 19-9») по ТУ 9398-242-98539446-2011 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2012/13263 от 26.03.2012 · класс риска 1

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Раковый антиген 19-9 (СА19-9) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 115 контрактов, медианная цена за единицу 15 601 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«У Т В Е Р Ж Д Е Н А » «У Т В Е РЖ Д А Ю »
Приказом Росздравнадзора Генеральный директор
от« __»______20__г.№ ____________ ООО «Компания Алкор Био»
^  Швырев М .В.
< 4 JS > > октября 2011 г.
И И С ТРУ К Ц И Я  ПО П РИ М ЕН ЕН И Ю 
Н А БО РА  РЕ А Г Е Н Т О В  Д Л Я  К О Л И Ч ЕС ТВЕН Н О ГО  И М М У Н 0Ф Е Р М Е 1Г Г Н 0Г 0 
О П РЕД ЕЛ ЕН И Я  Р А К О Н О Г О А Н Т И Г Е И А  СА 19-9 
В С Ы ВО РО ТК Е К РО ВИ  Ч ЕЛ О ВЕК А 
(«О нк оИ Ф А -С А  19-9»)
1. Н А ЗН А Ч Е Н И Е
I
;  1.1. Н абор реагентов «О нкоИ Ф А -С А  19-9» предназначен для количественного он-
1 ределения ракового антигена С А  19-9 в сы воротке крови человека м етодом  твердоф азного
i  им м уноф ерм ентного анализа.
;  1.2. Раковый антиген С А  19-9 относится к группе м уц ин оп одобн ы х гликонротеи-
i  нов, т.н. Sialyl L ew is A ntigens (SL A ). Повы ш енная концентрация С А  19-9 часто наблю да-
j  ется у пациентов со злокачественны ми новообразованиям и ж елудочно-киш ечного тракта.
I  в частности, карциномами подж елудоч н ой  ж елезы , прямой кишки, ж елудка и печени. Г1о-
*  выш ение концентрации С А  19-9, наряду с повы ш ением концентрации РЭА, позволяет
:  предполож ить патологию  ж елчного пузыря. О бнаруж ен ие этого опухолеспециф ичного ан-
\ тигена м ож ет также быть связано с некоторы ми другим и новообразованиям и.
1  О пределени е концентрации С А  19-9 в сы воротке крови м ож ет быть использовано при
м ониторинге пациентов, у которы х диагностированы  вы ш еперечисленны е опухоли.
*  С клинической точки зрения значение концентрации С А  19-9 само по себе не и.меет
^  диагностической ценн ости при тестировании на наличие злокачественны х новообразова-
;  ний. Этот результат сл едует использовать только в сочетании с иными клиническими про­
явлениями, результатами наблю дений и диагностическим и параметрами.
I  П овы ш енную  концентрацию  С А  19-9 в сы воротке крови отм ечаю т у 1% нормальных
:  здоровы х ж енщ ин, у 3% ж енщ ин с незлокачественны ми патологиями яичников и у 6% на-
,  циентов с различны ми незлокачественны ми состояниям и (в том числе во время первого
триместра бер ем ен н ости , м енструации, при эн дом етри озе, ф и брозе матки, остром саль­
пингите, заболеваниях печени, воспалительны х проц ессах брю ш ины  и перикарда).
1.3. Н абор «О нк оИ Ф А -С А  19-9» рассчитан на проведение анализа в дубликатах  
40 неизвестны х, 6 ка 1ш бровочны х проб, одной пробы  контрольной сыворотки и одной  
пробы для определения оптической плотности раствора ТМ Б при использовании всех  
стринов одн оврем ен н о (всего 96 определений).
П р и м е ч а н и е :  в случае дробного применения набор молсет  быть использован только в  
течение 1,5 месяцев после вскрытия компонентов набора.


--- стр. 2 ---
2.1.П ринц ип действия
В наборе «О нкоИ Ф А -С А  19-9» использован двухстадийны й «сэндвич» - вариант твер­
доф азного им м ун оф ерм ен тн ого анализа (Рисунок 1). На первой стадии анализа в лунки,  
покрытые стрептавидином , вносятся калибровочны е пробы  с известным содерж анием  
СА 19-9, контрольная сы воротка и анализируем ы е образцы . Затем добавляется конъюгат  
моноклональны х антител к С А  19-9 с биотином  (на Рисунке 1: М А Т 1-биотин). В результа­
те реакции м еж ду м оноклональны м и антителами и молекулой С А  19-9 образуется ком­
плекс, который связывается со стрептавидином , им мобилизованны м на внутренней по­
верхности лунок. При удалении содерж и м ого из лунок и промывке прои сходи т разделение  
свободны х и связанны х антителами белков сы воротки крови.
На второй стадии в лунки добавляю тся конъю гированны е с пероксидазой антитела,  
специф ичны е к др угом у эп итоп у молекулы  С А  19-9 (на Рисунке 1: М А Т2-пероксидаза).  
М еченное ф ерм ентом  антитело связывается с молекулами С А  19-9, которые были и.ммо-  
билизованы  во время первой инкубации. Н есвязавш ийся конъю гат удаляется промывкой.  
Во время инкубации с раствором ТМ Б п р ои сходи т окраш ивание раствора в лунках. С те­
пень окраски прямо пропорциональна концентрации С А  19-9 в исследуем ы х пробах. П о­
сле измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного  
графика рассчиты вается концентрация С А  19-9 в и сследуем ы х образцах.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
МАЛ-биотин
МАТ2-пероксидаза
Планшет со 
стрептавидином
СА 19-9
Рисунок 1.С хема анализа
2.2 С остав набора
—  комплект из двенадцати восьм илуночны х стрипов в рамке с иммобилизованны м  
на внутренней поверхн ости лунок стрептавидином , маркирован «Стрипы с им м обилизо­
ванным стрептави дин ом » - 1  упаковка;
—  калибровочны е пробы  (К П ), содерж ащ ие известны е количества С А  19-9. Флаконы  
маркированы «К алибровочная проба № 1», «К алибровочная проба № 2», «Ка;шбровочная  
проба № 3», «К алибровочная проба № 4», «Калибровочная проба № 5», «Калибровочная  
проба № 6»; точны е значения концентраций С А  19-9 в калибровочны х пробах указаны на  
этикетках флаконов, ориентировочны е -  0; 10; 50; 100; 250; 500 Ед/мл -  6 флаконов (лио-  
филизованны е препараты или ж идкости по 1,0 мл);
—  конъю гат, содерж ащ ий моноклональны е антитела к С А  19-9 с биотином , марки­
рован «К онъю гат Е № 1 »  -  1  флакон (13 мл);
—  конъю гат, содерж ащ ий моноклональны е антитела к С А  19-9 с пероксидазой хрена,  
маркирован «К онъю гат Е № 2 » -  1  флакон (13 мл);
—  концентрированны й водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован  
«Буфер М » -  1  флакон (20 мл);


--- стр. 3 ---
—  раствор тетрам етилбен зидина, маркирован «Раствор ТМ Б» -  1  флакон (14 мл);
—  стоп-реагент (1Н  соляная кислота), маркирован «С топ-реагент» -  1  флакон (14
мл);
—  контрольная сы воротка с известны м содерж ан ием  С А  19-9, маркирована «К он­
трольная сы воротка» —  1  флакон (лиофилизованны й препарат или ж идкость 0,5 мл);
—  в одн о-солевой  раствор для разведения образцов сы воротки крови, маркирован  
«Буфер Д »  —  1  флакон (2 0 ,0  мл). П оставляется отдельно.
3. А Н А Л И Т И Ч Е С К И Е  И Д И А Г Н О С Т И Ч Е С К И Е  Х А Р А К Т Е РИ С Т И К И
3.1. С пециф ичность. П ерекрестная реакция антител к С А  19-9 с другим и аналитами и  
интерференция приведены  в Т аблице 1.
Таблица 1
В ещ ество И сследованная концен-  
_________трация__________
Перекрестная реакция
С А  19-9 100%
С А  125 10 О О О  Ед/мл 0 , 1%
С А  15-3 1  О О О  Ед/мл Не определяется
П СА 5 О О О  нг/мл Не определяется
АФ П 10 О О О  нг/мл Не определяется
РЭ А 10 О О О  нг/мл Не определяется
ХГч 10 О О О  мМ Е/мл Не определяется
Ревматоидны й фактор 1000 кМ Е/мл Не определяется
3.2.  К оэф ф ициент вариации результатов определения С А  19-9 в одн ом  и том ж е образ­
це сы воротки крови с использованием  набора «О нк оИ Ф А -С А  19-9» не превыш ает 8%.
3.3.  Л инейность. Зависим ость концентрации С А  19-9 в исследуем ы х образцах при раз­
ведении их буф ером  Д  (поставляется по запросу клиента) им еет линейны й характер в ди а­
пазоне концентраций калибровочны х проб № 2 - № 6 и составляет 90-110%
3.4.  Ч увствительность. М инимальная достоверн о определяем ая набором концентрация  
СА 19-9 в сы воротке крови человека не превы ш ает 1,0 Ед/мл.
3.5.  Точность. Д анны й аналитический параметр проверяется тестом  на «откры тие» СА  
19-9 —  проверка соответствия значения определяем ой концентрации С А  19-9 расчетной  
величине, полученной путем смеш ивания равных объем ов контрольной сыворотки и ка­
либровочной пробы  № 3. П роцент открытия составляет 9 0 -1 1 0 % .
3.6.  Х ук-эф ф ект вы соких концентраций. В наборах реагентов, основанны х на «сэн-  
двич»-принципе анализа, при вы соких концентрациях аналита зависим ость величины оп ­
тической плотности от концентрации становится обратно пропорциональной (так назы­
ваемый хук-эф ф ек т вы соких концентраций). При использовании набора «О нкоИ Ф А-  
СА 19-9» хук-эф ф ект не наблю дается.
3.7.  Д иапазон ож идаем ы х значений. У больш инства здоровы х лю дей концентрация СА  
19-9 < 40 Ед/мл.
Д иапазон ож идаем ы х значений зависит от м ногих факторов: специф ичности метода,  
особен н остей  и ссл едуем ой  гюпуляции, точности м етода в конкретной лаборатории. По  
этой причине каж дой лаборатории реком ендуется использовать предоставленны е изгото­
вителем значения только д о  тех пор, пока специалистам и лаборатории не будут определе­
ны диапазоны  ож идаем ы х значений, характерны х для конкретной популяции в м есте рас­
полож ения лаборатории.
4. М ЕРЫ  П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
4 .1. П отенциальны й риск применения набора -  класс 1.
4.2.  В се ком поненты  набора в используем ы х концентрациях являются нетоксичными.
4.3.  При работе с набором  сл едует соблю дать ГОСТ Р 5 2 9 0 5 -2 0 0 7  «Лаборатории м е­
дицинские. Т ребования безоп асн ости ».
3


--- стр. 4 ---
4.4.  С топ-реагент представляет собой  1  Н раствор соляной кислоты. Избегать раз­
брызгивания и попадания на кож у и слизисты е. В случае попадания стоп-реагента на кожу  
и слизисты е н ео б х о д и м о  промыть пораженны й участок больш им количеством проточной  
воды.
4.5.  При работе с набором  сл едует надевать одноразовы е резиновы е или пластиковые  
перчатки, т.к. производны е крови, входящ ие в состав набора, и исследуем ы е образцы  яв­
ляются потенциально инфицированны м материалом, способны м  длительное время сохра­
нять и передавать возбуди телей  различны х вирусны х инфекций.
4.6.  Х имическая п осуда и оборудован ие, которы е использую тся в работе с набором,  
должны  быть соответствую щ им  образом  маркированы и храниться отделы ю .
4.7.  Запрещ ается прием пищ и, использование косм етических средств и курение в по­
мещ ениях, предназначенны х для работы  с наборами.
5. О Б О Р У Д О В А Н И Е  И М А Т Е РИ А Л Ы
-  С пектроф отом етр вертикального сканирования, позволяю щ ий измерять оптиче­
скую  плотность раствора в лунках при длинах волн 4 5 0  нм и 620 нм (референтная длина  
волны). П рим енение длины  волны 620 нм не является обязательны м, по предпочтительнее,  
поскольку позволяет обнаруж ить интерф еренцию  пластика;
V  -  пипетки полуавтом атические одноканальны е со см енны м и наконечниками с изм е­
няемым объ ем ом  отбора ж идкостей: на 5 -5 0  мкл; на 4 0 -2 0 0  мкл; на 2 0 0 -1 0 0 0  мкл; на  
1 0 0 0 -5 0 0 0  мкл;
-  пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со см енны м и наконечниками, по­
зволяющая отбирать объем ы  ж идкости д о  300 мкл;
-  цилиндр мерны й, позволяю щ ий отмерять 5 0 -5 0 0  мл;
-  стакан стеклянны й п одходящ его объема;
-  вода дистиллированная;  
бум ага фильтровальная;
-  перчатки резиновы е или пластиковые;
-  1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;
-  контейнер для дезинф екции;
-  ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.
6. А Н А Л И ЗИ Р У Е М Ы Е  О Б РА ЗЦ Ы
^  6.1. Забор крови из вены осущ ествляю т с собл ю ден и ем  правил асептики. П осле ф ор­
мирования сгустка сы воротку отделяю т путем центрифугирования. П осле центрифуги­
рования сы воротку переносят в отдельную  пробирку.
6.2. Для проведения анализа не сл едует использовать плазму крови, гемолизирован-  
ную  или м утную  сы воротку, а также образцы  сы воротки, содерж ащ ие азид натрия.
6.3.  О бразцы  сы воротки крови разреш ается хранить при тем пературе +2...8°С  не б о ­
лее 5-ти суток; при н еобходи м ости  бол ее длительного хранения (до 3-х месяцев) реком ен­
дуется аликвотировать обр азец  и хранить в зам орож енном  виде при температуре -2 0 ° С  и  
ниже. Не допускается повторн ое зам ораж ивание образца.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И ЗА
7.1. П о д г о т о в к а  р еа ген т о в
7.1.1.  Стрипы. П ер ед вскрытием пакет со стрипами н еобходи м о выдержать при ком­
натной тем пературе (+ 1 8 ...2 5 ° С ) не м ен ее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на сво­
бодн ую  рамку н ео б х о д и м о е количество стрипов.
7.1.2. Ж идкие калибровочны е пробы  и контрольная сы воротка готовы к исгюльзова-  
нию.


--- стр. 5 ---
Для восстановления лиоф илизованны х калибровочны х проб и контрольной сы во­
ротки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипш ие к  
стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и полож ить крышки перевернутыми  
на сухую  поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой внести по 1  мл дистил­
лированной воды , во флакон с контрольной сы вороткой -  0,5 мл дистиллированной воды и  
закрыть крышками. Вы держ ать флаконы в течен ие 10 м инут при комнатной температуре  
без перемеш ивания. Затем, аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемеш ать их содер ­
ж им ое д о  полн ого растворения, избегая пенообразования. В течение следую щ их 10 минут  
выдержать флаконы при ком натной тем пературе, периодически перемеш ивая.
7.1.3.  К онъю гат Е № 1, конъю гат Е № 2 готовы к использованию . Расход конъюгатов  
на один стрип составляет по 1,08 мл.
7.1.4.  П ромы вочны й раствор. Н еобходи м ое количество буф ера М развести дистилли­
рованной водой в 50 раз. Например;
5 мл буф ера М  + 245 мл дистиллированной воды.
Тщ ательно перем еш ать, избегая пенообразования.
7.1.5.  Раствор ТМ Б готов к использованию . Р асход ТМ Б на один стрип составляет  
1,15 мл.
7.1.6. С топ-реагент готов к использованию . Р асход стоп-реагента на один стрип со­
ставляет 0,75 мл.
7.1.7. В се реагенты  п еред проведением  анализа долж ны  быть тщ ательно перемешаны  
и доведены  д о  ком натной температуры .
7.1.8.  Разведени е и ссл едуем ы х образцов сы воротки крови. Если концентрация С А 19-  
9 в образце по предварительны м данны м или по результатам анализа (см .п.9.3.) выше  
КП № 6, образец  сл ед у ет  развести в 10 и бол ее раз буф ером  Д  (дополнительно поставляется  
по запросу клиента). При разведении н еобходи м о тщ ательное перемеш ивание.
В П риложении 1  приведена схем а проведения анализа
7.2. П остановка анализа
7.2.1.  С оставить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следуюпш.м о б ­
разом:
А 1, А 2 - №  1  -  для изм ерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
В1, В2 -  №  2 -  для измерения величины оптической плотности КП № 1;
С 1, С2 -  №  3 -  для измерения величины оптической плотности КП № 2;
D 1, D2 -  №  4 -  для измерения величины оптической плот1Юсти КП № 3;
Е1, Е2 -  №  5 -  для измерения величины оптической плотности КП № 4;
F1, F2 - №  6 -  для измерения величины оптической плотности КП № 5;
G 1, G2 -  №  7 -  для изм ерения величины оптической плотности КП № 6;
Н1, Н2 -  №  8 -  для измерения величины оптической плотности контрольной сы ворот­
ки.
7.2.2.  В нести в дублик атах по 25 мкл калибровочны х проб, контрольной сыворотки и  
исследуем ы х образцов в соответствую щ ие лунки.
П р и м е ч а н и е :  общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и  
исследуемых o6pa3ifoe не долж но превышать 15 минут, иначе время инкубации разных об­
разцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным результатам.
7.2.3.  В нести во все лунки, кроме А1 и А 2, по 100 мкл конъюгата Е № 1.
П р и м е ч а н и е :  Чрезвычайно важ но вносить все реагенты как мож но ближе ко дну по­
крытой ст рептавидином лунки.
7.2.4.  П ерем еш ать реагенты  в лунках аккуратным постукиванием рамки со стрипами  
в течение 2 0 -3 0  секунд.
7.2.5.  И нкубировать стрипы  в тем н оте в течение 60 м инут при комнатной температу­
ре (+ 1 8 ...2 5 °С ) б ез ш ейкирования.


--- стр. 6 ---
7.2.6.  По окончании инкубации удалить содерж и м ое лунок в контейнер с дезин ф и ци­
рующ им раствором  (1%  раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси водо­
рода). Промыть лунки пять раз. При каж дой нромывке во все лунки добавлять по 300 мкл  
промы вочного раствора, приготовленного по п .7.1.6., встряхнуть рамку на шейкере в тече­
ние 5 -1 0  сек ун д с п оследую щ и м  декантированием . П осле последнего декантирования  
тщ ательно удалить остатки ж идкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в пере­
вернутом полож ен ии по фильтровальной бумаге.
Д опускается промывка лунок при пом ощ и автоматического промы вочного уст­
ройства.
7.2.7.  В нести во все лунки, кроме А1 и А 2, по 100 мкл конъюгата Е № 2.
7.2.8.  И нкубировать стрипы  в тем ноте при комнатной температуре (+ 1 8 ...2 5 °С )  
60 минут без щ ейкирования.
7.2.9.  По окончании второй инкубации удалить содерж и м ое лунок путем декантиро­
вания или аспирации и промыть лунки согласно п . 7.2.6.
7.2.10.  Н ем едл ен н о внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ.
7.2.11.  И нкубировать стрипы  в тем н оте при комнатной тем пературе в течение 15-30  
минут в зависим ости от степени развития окраски.
7.2.12.  Д обавить во все лунки с той ж е скоростью  и в той ж е последовательности, как и  
раствор ТМ Б, по 50 мкл стон-реагента для остановки ф ерм ентной реакции и осторож 1Ю 
перемеш ать реагенты  в лунках аккуратным постукиванием рамки со стрипами в течение  
15-20 секунд.
7.2.13.  Если н евозм ож н о измерить оптическую  плотность в лунках планшета непо­
средственно п осле вы полнения п. 7.2.12., то сл едует иметь в виду, что окраска в лунках  
планш ета стабильна не бол ее 20 м инут при комнатной тем пературе.
П рим ечание: максимальная оптическая плотность не долж на превышать пределов  
линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра необхо­
димо ут очнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая плотность  
не более 2,5 ед. ОП.
8. РЕ Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е ЗУ Л Ь Т А Т О В
Измерить на ф отом етре вертикального сканирования оптическую  плотность в лунках  
при длине волны 4 5 0  нм.
Если оптическая плотность калибровочной пробы  № 6 превы ш ает предел линейного  
измерения ф отом етра, н ео б х о д и м о  переизм ерить оптическую  плотность в лунках при дли­
не волны 405 нм.
При регистрации результатов н еобходи м о вычитать величину оптической плотности в  
лунках А1 и А 2 из значений оптических плотностей всех остальны х лунок.
П рим ечание: среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках А1 и  
А2 не долж но превышать 0,09 ед.ОП.
9. У Ч Е Т  Р Е ЗУ Л Ь Т А Т О В
9.1. П остроить калибровочны й график зависим ости оптических плотностей от кон­
центрации С А  19-9 (Е д/м л) в калибровочны х пробах (Р и су 1юк 2). Внеш ний вид графика  
зависит от сп о со б а  преобразования осей.
П рим ечание 1: при применении референт ной д.пины волны 620 нм оптическую  
плотность каж дой калибровочной пробы, полученную при 620 нм, вычитают из оптиче­
ской плотности, полученной при 450 нм, эти значения используют для построения калиб­
ровочного графика.