Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения антигена СА 125 в сыворотке крови человека ("ОнкоИФА-СА 125") по ТУ 9398-235-98539446-2011 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/12289 от 18.11.2011 · класс риска 1

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Раковый антиген 125 (СА125) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 25 контрактов, медианная цена за единицу 10 351 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 2 ---
Х А РА КТЕРИ СТИ КИ  НАБОРА
2.1.Принцип действия
В наборе «ОнкоИФА-СА 125» использован «сэндвич» - вариант твердофазного имму- 
ноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моноклональ­
ных антитела с различной эпитопной специфичностью к С А 125. Одно из них иммобили­
зовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с перок- 
сидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата анти-СА 125- 
пероксидаза, во время инкубации одновременно происходит иммобилизация С А 125, со­
держащегося в исследуемом образце, и связывание образовавшегося комплекса с конъю­
гатом.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связавшегося конъю­
гата прямо пропорционалъно количеству СА 125 в исследуемом образце (Рисунок 1).
Планшет с антителами  
к С А  125
Рисунок 1. Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. 
Степень окраски прямо пропорциональна концентрации С А 125 в анализируемых пробах. 
После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного 
графика рассчитывается концентрация С А 125 в исследуемых образцах.
2.2. Состав набора
• комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными 
на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к С А 125, маркирован 
«Стрипы с моноклональными антителами к С А 125» — 1  упаковка;
• калибровочные пробы (КП), содержащие известные количества С А 125. Флаконы 
маркированы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», «Калибровочная 
проба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Калибровочная 
проба №6»; точные значения концентраций С А 125 в калибровочных пробах указаны на 
этикетках флаконов, ориентировочные - 0; 15; 50; 100; 250; 500 Ед/мл - 6 флаконов (лио- 
филизованные препараты или жидкости по 0,5 мл);
• конъюгат анти-СА 125-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» — 1  флакон 
(18 мл);
• водно-солевой раствор для разведения образцов сыворотки крови, маркирован 
«Буфер Д» — 1  флакон (3,0 мл);
• концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован 
«Буфер Р» — 1  флакон (14 мл);
• раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» — 1  флакон (14 мл);


--- стр. 3 ---
• стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» — 1  флакон 
(14 мл);
• контрольная сыворотка с известным содержанием СА 125, маркирована «Кон­
трольная еыворотка» — 1  флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл);
• прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2- 
слойного полиэтилена).
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Специфичность. Не обнаружено перекреетной реакции обоих моноклональных 
антител е раковыми антигенами: РЭА, СА 19-9, СА 15-3, СА 72-4.
3.2. Коэффициент вариации результатов определения С А 125 в одном и том же об­
разце сыворотки крови человека с использованием набора «ОнкоИФА-СА 125» не пре­
вышает 8%.
3.3. Линейноеть. Зависимость концентрации СА 125 в образцах еыворотки крови 
при разведении их буфером Д имеет линейный характер в диапазоне концентраций калиб­
ровочных проб №2 - №6 и соетавляет 90-110%.
3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» 
С А 125 — проверка соответствия значения определяемой концентрации С А 125 расчетной 
величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и ка­
либровочной пробы №3. Процент открытия соетавляет 90-110%.
3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концен­
трация С А 125 в сыворотке крови человека не превышает 3 Ед/мл.
3.6. Хук-эффект высоких концентраций. В наборах реагентов, оенованных на 
«сэндвич» - принципе анализа, при высоких концентрациях аналита зависимость величи­
ны оптической плотности от концентрации становится обратно пропорциональной (так 
называемый хук-эффект выеоких концентраций). При иепользовании набора «ОнкоИФА- 
СА 125» хук-эффект не обнаружен вплоть до концентрации С А 125 20 000 Ед/мл.
3.7. Диапазон ожидаемых значений. Диапазон значений концентраций СА 125 до 
35 Ед/мл определяетея как нормальный. Концентрация С А 125 повышена у 50% женщин е 
первичным раком яичников и у 80% женщин с метастатическим раком яичников.
Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности метода, 
особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории. По 
этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленные изгото­
вителем значения только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будут определе­
ны диапазоны ожидаемых значений, характерных для конкретной популяции в меете рас­
положения лаборатории.
4.1.
4.2.
ными.
4.3.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора — клаее 1.
Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксич-
При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 «Ла­
боратории медицинекие. Требования безопаености».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1  Н раствор соляной кислоты. Избегать раз­
брызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на ко­
жу и елизиетые необходимо промыть пораженный участок большим количеством про­
точной воды.
4.5. При работе е набором следует надевать одноразовые резиновые или пластико­
вые перчатки, т.к. производные крови, входящие в еоетав набора, и исследуемые образцы 
являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время со­
хранять и передавать возбудителей различных вируеных инфекций.


--- стр. 4 ---
/ 9 ^
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набо­
ром, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
• Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптиче­
скую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
• прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер), позво­
ляющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре +37°С;
• пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с из­
меняемым объемом отбора жидкостей; на 5-50 мкл; 40-200 мкл; 200-1000 мкл; 1000- 
5000 мкл;
• пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, по­
зволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
• цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл;
• стакан стеклянный подходящего объема;
• вода дистиллированная;
• бумага филътровальная;
• перчатки резиновые или пластиковые;
• 1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;
• контейнер для дезинфекции;
• ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После 
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После центрифу­
гирования сыворотку переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не следует использовать плазму крови, гемолизиро­
ванную или мутную сыворотку, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.3. Образцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2...8°С не 
более 2-х суток; при необходимости более длительного хранения (до 3-х месяцев) рекомен­
дуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре-20°С и 
ниже. Не допускается повторное замораживание образца.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо вьщержать при 
комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на 
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к исполь­
зованию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыворотки 
перед векрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стен­
кам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми на 
сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сыворот­
кой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Вьщержать флаконы в 
течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. Затем, аккуратно на­
4


--- стр. 5 ---
и
клоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворения, избегая 
пенообразования. В течение следующих 10 минут выдержать флаконы при комнатной 
температуре (+18...25°С), периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат готов к использованию. Расход конъюгата на один стрип состав­
ляет 1,5 мл.
7.1.4. Буфер Д готов к исполъзованию.
7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Р развести дистил­
лированной водой в 20 раз.
Например:
5 мл буфера Р + 95 мл дистиллированной воды.
Тщателъно перемешать, избегая пенообразования.
7.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на 
один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип 
составляет 1,15 мл.
7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно переме­
шаны и доведены до комнатной температуры.
В Приложении 1  приведена схема проведения анализа.
7.1.9. Разведение исследуемых образцов сывороток крови. Если по предваритель­
ным данным или по результатам анализа (см. п. 9.3.) значения концентрации СА 125 в 
исследуемых образцах выше КП №6, образцы следует развести буфером Д в 30 раз и в 
900 раз. Пример подготовки образца к анализу:
Образец №1 (разведение в 30 раз): 290 мкл буфера Д + Юмкл исследуемого 
образца.
Образец №2 (разведение в 900 раз): 290 мкл буфера Д + 10 мкл Образца №1.
При каждом разведении необходимо тщательное перемешивание.
7.2. Постановка анализа
7.2.1.
образом: 
А1, А2 
В1,В2 
С1,С2 
D1,D2 
Е1,Е2 
F1,F2 
G1,G2 
Н1,Н2 
ротки.
7.2.2.
7.2.3.
Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим
№ 1  - для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
№ 2 - для измерения величины оптической плотности КП №1;
№ 3 - для измерения величины оптической плотности КП №2;
№ 4 - для измерения величины оптической плотности КП №3;
№ 5 - для измерения величины оптической плотности КП №4;
№ 6 - для измерения величины оптической плотности КП №5;
№ 7 - для измерения величины оптической плотности КП №6;
№ 8 - для измерения величины оптической плотности контрольной сыво-
Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 150 мкл раствора конъюгата. 
Внести в соответствующие лунки по 50 мкл калибровочных проб и контроль­
ной сыворотки, в оставшиеся лунки по 50 мкл исследуемой сыворотки крови в дублика­
тах.
П римечание: общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и  
исследуемых сыворот ок крови не долж но превышать 15 минут, иначе время инкубации  
разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным резуль­
татам.
7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 60 минут при встряхивании в термостати- 
руемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 500-800 об/мин.


--- стр. 6 ---
7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи­
цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси во­
дорода) и промыть лунки пять раз. При каждой промывке во все лунки добавить 
по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5., встряхнуть рамку на 
шейкере в течение 5-10 секунд с последуюпщм декантированием. После последнего де­
кантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со 
Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройст­
ва.
7.2.6. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать 
стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15-30 минут в зави­
симости от степени развития окраски.
7.2.7. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как 
и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, перемешать 
на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре.
7.2.8. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо­
средственно после выполнения п. 7.2.7., то следует иметь в виду, что окраска в лунках 
планшета стабильна не более 20 минут при комнатной температуре.
Примечание: максимальная оптическая плотность не должна превышать пределов 
линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра необхо­
димо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая плотность 
не более 2,5 ед. ОП.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность раствора 
в лунках при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической плотности 
в лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
Примечание: среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках А1 и 
А2 не должно превышать 0,09 ед.ОП.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей от 
концентрации СА 125 (Ед/мл) в калибровочных пробах (Рисунок 2). Внешний вид графика 
зависит от способа преобразования осей.
Примечание 1: для построения калибровочных графиков рекомендуется использо­
вать Программное обеспечение «ИФА Мастер».
Примечание 2: для построения калибровочного графика на масштабной бумаге необ­
ходимо использовать данные оптических плотностей после вычитания из них средней вели­
чины оптической плотности лунок с ТМБ.
Если программа фотометра не позволяет вычитать величину оптической плотности 
лунок А1 иА2, то необходимо пользоваться формулой:
В-Вт,
где В - среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках, содержа­
щих калибровочные или исследуемые пробы;
Вт- среднее арифметическое значение оптической плотности лунок А1 и А2.