Набор реагентов для качественного иммуноферментного определения антител к вирусу гепатита С в сыворотке и плазме крови человека ("ГепатитИФА-анти-HCV") по ТУ 9398-240-98539446-2011 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2012/13238 от 19.03.2012 · класс риска 3

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита С общие антитела ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 91 контракт, медианная цена за единицу 7 381 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«У Т ВЕРЖ Д ЕН А » «УТВЕРЖ ДАЮ »
л _0
Приказом Росздравнадзора Генеральный директор
от« » 20 г.№ __________ ООО «Ком^ния Алкор Био»
^ Швырев М.В.
« 27 » июля 2011 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ 
НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО
О П РЕД ЕЛ ЕН И Я 
АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ГЕПАТИТА С  
В С Ы ВО РО Т КЕ И П Л АЗМ Е КРО ВИ  Ч ЕЛ О В ЕК А  
(«Г епатитИФА-анти-HCV»)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ГепатитИФА-анти-HCV» предназначен для качественного 
определения антител (IgG и IgM ) к вирусу гепатита С (В Г С ) в сыворотке и плазме крови 
человека методом твердофазного иммуноферментного анализа.
1.2. Гепатит С - вирусное заболевание, возбудитель которого представляет собой 
РНК-содержащий вирус сферической формы размером 30-60 нм, относящийся к семейст­
ву Flaviviridae. В геноме вируса гепатита С закодированы структурные (core, E l и Е2) и 
неструктурные белки (NS2, NS3, NS4 и NS5). Для ВГС  характерна значительная вариа­
бельность генома. Выделяют 6 генотипов и более 100 субтипов вируса.
Источник инфекции - больные люди. В основном вирус передается парентеральным 
путем. Однако возможны вертикальный путь передачи и заражение при половых контак­
тах.
Инкубационный период 6-12  недель. ВГС  характеризуется малосимптомным тече­
нием и высокой степенью хронизации процесса. Лабораторная диагностика заболевания 
основана на определении антител к В ГС  методом И Ф А  и РН К В ГС  методом ПЦР.
1.3. Набор «ГепатитИФА-анти-HCV» выпускается в двух вариантах комплектации.
Комплектация на 96 определений рассчитана на проведение анализа в дубликатах (ре­
комендуется производителем) 45 неизвестных проб или в монопликатах 90 неизвестных 
проб при использовании всего комплекта стрипов одновременно.
Комплектация на 192 определения рассчитана на проведение анализа в дубликатах 
(рекомендуется производителем) 90 неизвестных проб или в монопликатах 180 неизвест­
ных проб при использовании всего комплекта стрипов одновременно.
Обратите внимание, что определение оптических плотностей (ОП) контрольных 
проб и раствора ТМ Б в соотвестствии со схемой маркировки лунок (п. 7.2.1.) обязательно 
при каждой постановке анализа.
Примечание: в случае дробного применения набор м о ж е т бы ть использован только в 
течение месяца после вскрытия компонентов набора.


--- стр. 2 ---
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1.Принцип действия
В наборе «ГепатитИФА-анти-HCV» использован вариант двустадийного твердофазно­
го иммуноферментного анализа. Если в образце присутствуют антитела к ВГС, то во вре­
мя первой инкубации они связываются с рекомбинантными антигенами ВГС , адсорбиро­
ванными на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок).
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. На следующей стадии анализа ан­
титела к иммуноглобулинам G и М человека, меченные пероксидазой хрена, взаимодейст­
вуют с образовавшимся на первой стадии комплексом антиген В ГС  - антитело. Количест­
во связанного с твердой фазой конъюгата прямо пропорционально количеству специфиче­
ских иммуноглобулинов в исследуемом образце (Рисунок 1).
анти-1дО-пероксидаза
Рисунок 1. Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМ Б происходит окрашивание раствора в лунках. 
Степень окраски прямо пропорциональна количеству антител к ВГС  в анализируемых 
пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках наличие специфиче­
ских антител к В ГС  оценивают относительно значения ОПкрит.
2.2. Состав набора
•  комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными 
на внутренней поверхности лунок рекомбинантными антигенами В ГС  (core, NS3, NS4 и 
NS5), маркирован «Стрипы с рекомбинантными антигенами вируса гепатита С» -
1  упаковка или 2 упаковки, в зависимости от варианта комплектации (Таблица 1);
•  отрицательная контрольная проба (К ‘), не содержащая антитела к ВГС. Флакон 
маркирован «Отрицательная контрольная проба» - 1  флакон или 2 флакона, в зависимости 
от варианта комплектации (лиофилизованный препарат или жидкость, 0,8 мл) (Таблица 1);
•  положительная контрольная проба (К ” ^), содержащая антитела к ВГС . Флакон мар­
кирован «Положительная контрольная проба» - 1  флакон или 2 флакона, в зависимости от 
варианта комплектации (лиофилизованный препарат или жидкость, 0,5 мл) (Таблица 1);
2


--- стр. 3 ---
•  конъюгат aHTH-hlgGIgM-nepOKCHAaaa, маркирован «Конъюгат Е» —  1  флакон или
2 флакона, в зависимости от варианта комплектации (14 мл) (Таблица 1);
• аналитический водно-солевой раствор, маркирован «Буфер А» -  1  флакон или 2 
флакона, в зависимости от варианта комплектации (10 мл) (Таблица 1);
•  концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован «Бу­
фер Н» —  2 флакона или 4 флакона, в зависимости от варианта комплектации (14 мл) 
(Таблица 1);
• раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМ Б» —  1  флакон или 2 фла­
кона, в зависимости от варианта комплектации (14 мл) (Таблица 1);
• стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» —  1  флакон или 2 
флакона, в зависимости от варианта комплектации (14 мл) (Таблица 1);
•  прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2-  
слойного полиэтилена) - 1  шт. или 2 шт., в зависимости от варианта комплектации (Таб­
лица 1).
Таблица 1  Варианты комплектации
Название
компонента
96 определений 192 определения
Комплект стрипов в рамке 1 шт. 2 шт.
Отрицательная контрольная проба 1 фл. 2 фл.
Положительная контрольная проба 1 фл. 2 фл.
Конъюгат Е 1 фл. 2 фл.
Буфер А 1 фл. 2 фл.
Буфер Н 2 фл. 4 фл.
Раствор ТМ Б 1 фл. 2 фл.
Стоп-реагент 1 фл. 2 фл.
Пакет полиэтиленовый 
закрывающийся
1 шт. 2 шт.


--- стр. 4 ---
г
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Диагностическая специфичность. Определяется как доля полученных отрица­
тельных результатов в исследуемых образцах, не содержащих антитела к ВГС . Диагно­
стическая специфичность набора «ГепатитИФА-анти-HCV» по ОСО 42-28-310-02П со­
ставляет 100%. Дополнительно были исследованы образцы от пациентов с другими ин­
фекционными заболеваниями и невирусными гепатитами, от беременных женщин, а так­
же образцы с гемолизом и липемией, специфичность составила 100% .
3.2. Диагностическая чувствительность. Определяется как доля полученных поло­
жительных результатов в исследуемых образцах, содержащих антитела к ВГС . Диагно­
стическая чувствительность набора «ГепатитИФА-анти-HCV» по ОСО 42-28-310-02П со­
ставляет 100%.
3.3. Коэффициент вариации оптической плотности в одном и том же образце при 
определении антител к В ГС  с использованием набора «ГепатитИФА-анти-HCV» не пре­
вышает 8% .
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1.
4.2.
ными.
Потенциальный риск применения набора —  класс 3.
Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксич-
4.3. При работе с набором следует соблюдать ГО СТ Р 52905-2007 «Лаборатории 
медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1  Н раствор соляной кислоты. Избегать раз­
брызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на кожу 
и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством проточной 
воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пласти­
ковые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые образ­
цы являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время 
сохранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набо­
ром, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
1
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
•  Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптиче­
скую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм или 450 и 600-630 нм;
•  прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый щейкер), позво­
ляющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре +37°С;
•  пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с из­
меняемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на 
1000-5000 мкл;
•  пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, по­
зволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
4


--- стр. 5 ---
цилиндр мерный, позволяющий отмерять объемы 50-500 мл; 
стакан стеклянный подходящего объема; 
вода дистиллированная; 
бумага фильтровальная; 
перчатки резиновые или пластиковые;
1%  раствор гипохлорита натрия или 6%  раствор перекиси водорода;
•  контейнер для дезинфекции;
•  ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После 
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. Забор крови для 
получения плазмы осуществляют в пробирку, содержащую антикоагулянт. После центри­
фугирования сыворотку или плазму переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную или мут­
ную сыворотку и плазму, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.3. Образцы сыворотки и плазмы крови разрещается хранить при температуре 
+2...8°С не более 2-х суток; при необходимости более длительного хранения рекомендует­
ся аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С и ни­
же. Не допускается повторное замораживание образца.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо выдержать при 
комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на 
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие контрольные пробы готовы к использованию.
Для восстановления лиофилизованных контрольных проб перед вскрытием флаконов 
легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипщие к стенкам флаконов или к крыш­
кам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми на сухую поверхность. Во фла­
кон с лиофилизовапиой отрицательной контрольной пробой внести 0.8 мл дистиллиро­
ванной воды, во флакон с лиофилизованной ноложительной контрольной пробой -  
0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Выдержать флаконы в течение 
10 минут при комнатной температуре без перемешивания. Затем, аккуратно наклоняя и 
вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворения, избегая пенообразо- 
вания. В течение следующих 10 минут вьщержать флаконы при комнатной температуре 
(+18...25°С), периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат готов к использованию. Расход конъюгата на один стрип состав­
ляет 1,15 мл.
7.1.4. Буфер А  готов к использованию. Расход буфера А на один стрип составляет
0,83 мл.
7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Н развести дистил­
лированной водой в 20 раз.
Например:


--- стр. 6 ---
5 мл буфера Н +  95 мл дистиллированной воды.
Тщательно перемешать, избегая пенообразования.
7.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМ Б) готов к использованию. Расход ТМБ на 
один стрин составляет 1,15 мл.
7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип 
составляет 1,15 мл.
7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно переме­
шаны и доведены до комнатной температуры (+18...25°С).
В Приложении 1  приведена схема проведения анализа.
7.2. Постановка анализа
7.2.1. Составить протокол маркировки лунок.
ВНИМАНИЕ; Отрицательная контрольная проба обязательно раскапывается в  
трипликатах!
Лунки промаркировать следующим образом:
^ А 1  - №  1  - для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
А2, В 1, В2 - №2 - для измерения величины оптической плотности К'
С 1, С2 -  №3 - для измерения величины оптической плотности К"^ .
7.2.2. Во все лунки, кроме лунки А1, внести по 80 мкл буфера А.
7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 40 мкл контрольных проб, в остав­
шиеся лунки -  по 40 мкл исследуемых образцов в дубликатах.
Примечание: общее время внесения контрольных проб и исследуемых образцов не 
должно превышать 15 минут, иначе время инкубации различных образцов будет значи­
тельно отличаться, что в конечном итоге м о ж ет привести к получению неправильного 
результата.
7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 30 минут при встряхивании в термостати- 
руемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 500-700 об/мин.
7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезин­
фицирующим раствором (1%  раствором гипохлорита натрия или 6%  раствором перекиси
. водорода) и промыть лунки 4 раза. При каждой промывке во все лунки добавить по
"  300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5, встряхнуть рамку на шейке­
ре в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После последнего декантиро­
вания тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в 
перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройства.
7.2.6. Во все лунки, кроме лунки А1, внести по 100 мкл конъюгата.
7.2.7. Инкубировать стрипы в течение 30 минут при встряхивании в термоста- 
тируемом шейкере при температуре -1-37°С со скоростью 500-700 об/мин.
7.2.8. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезин­
фицирующим раствором и промыть лунки согласно п.7.2.5.
7.2.9. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать 
стрипы в темноте в течение 10 минут при встряхивании в термостатируемом шейкере  
при температуре -1-37°С со скоростью 500-700 об/мин.


--- стр. 7 ---
7.2.10. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, 
как и раствор ТМ Б, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, пере­
мешать на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре (+18...25°С).
7.2.11. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо­
средственно после выполнения п. 7.2.Ю., то следует иметь в виду, что окраска в лунках 
планшета стабильна не более 20 минут при комнатной температуре.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в лун­
ках при длине волны 450 нм или, если возможно использование референсного фильтра, 
при 450 и 600-630 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической плот­
ности в лунке Л1 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
Примечание: 
значение оптической плотности в лунке А1 не должно превышать
0,09 ед.ОП.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Оценить оптическую плотность в лунках, содержащих К ', для каждой лунки в 
отдельности. ОП должна быть не более 0,2 ед.опт.пл. Если значение ОП в одной из лу­
нок не удовлетворяет этому критерию, то это значение можно исключить из расчета 
среднего арифметического значения ОП К'. Исключить можно только одно зиаче 1П1с 
ОП из трех. В случае если критерию не удовлетворяют ОП в двух или более лунках,  
результаты анализа считают недостоверными и анализ повторяют.
9.2. По трем или двум значениям, в зависимости от выполнения условий, описы­
ваемых в п. 9.1., определить среднее арифметическое значение ОП в лунках, содержащих 
К.
9.3. Определить среднее арифметическое значение ОП в лунках, содержащих К"". 
Полученное значение ОП должно быть не менее 0,5 ед.опт.плот. Если полученное значе­
ние ОП менее 0,5 ед.опт.плот., результаты анализа считают недостоверными и анализ по­
вторяют.
9.4. Определить значение ОПкрит., для чего к среднему значению ОП К ' прибавить
Ккрит.
ОПкрит. = ОПсрК'+ Ккрит
Примечание: Ккрит. -  коэффициент, определяемый на предприятии-
изготовителе и указанный в аналитическом паспорте.
9.5. Интерпретация результатов по значению коэффициента позитивности. Разде­
лить средние значения ОП каждого исследуемого образца на получившееся значение ОП­
крит.
Киоз. =ОПиссл.обр./ОП Крит.
Если полученное значение меньше 1, то считают, что исследуемый образец не со­
держит антитела к ВГС .