Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения аутоантител к тиреоглобулину в сыворотке крови человека ("ТироидИФА-атТГ") по ТУ 9398-214-98539446-2010 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/11316 от 13.07.2011 · класс риска 1

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Тиреоглобулин антитела ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 172 контракта, медианная цена за единицу 7 946 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
<<УТВЕРЖДЕНА»
Приказом Росздравнадзора //# / 'Т ён ер^ директор
от« » 20 г.№ (j ЙОЮ-Жомпа^ря Алкор Био»
Д Двырев М.В,
\  Ц < ‘^^'^преля 2010г.
ИНСТРУКЦИЯ п о  ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ 
ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО 
ОПРЕДЕЛЕНИЯ 
АУТОАНТИТЕЛ К ТИРЕОГЛОБУЛИНУ  
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА 
(«ТироидИФА-атТГ »)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ТироидИФА-атТГ» предназначен для количественного 
определения аутоантител (АТ) к тиреоглобулину (ТГ) в сыворотке крови человека мето­
дом твердофазного иммуноферментного анализа.
1.2. АТ к ТГ относятся в основном к иммуноглобулинам класса G и реже — к 
иммуноглобулинам классов А и М. В сыворотке крови здоровых лиц АТ к ТГ могут 
содержаться в концентрации до 65 Ед/мл. Превышение этого порога свидетельствует об 
аутоиммунном процессе, как правило, приводящем к нарушению функции щитовидной 
железы. Определение АТ к ТГ в сыворотке крови человека может быть использовано для 
диагностики аутоиммунных тиреоидных заболеваний (идиопатическая микседема, 
тиреоидит Хашимото, диффузный токсический зоб).
1.3. Набор «ТироидИФА-атТГ» рассчитан на проведение анализа в дубликатах 
40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной 
пробы для определения оптической плотности раствора ТМБ при использовании всех 
стрипов одновременно (всего 96 определений).
П р им ечани е: е случае дробного прим енения набор м ож ет  быть использован  
только в т ечение м есяца после вскры т ия ком понент ов набора.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип действия
Набор позволяет определять АТ к ТГ, принадлежащие к любому классу 
иммуноглобулинов. На первой стадии анализа АТ к ТГ, содержащиеся в калибровочных и 
исследуемых пробах, связываются с тиреоглобулином, иммобилизованным на внутренней 
поверхности лунок. На второй стадии анализа иммобилизованные АТ к ТГ 
взаимодействуют с конъюгатом ТГ-пероксидаза. Количество связавшегося конъюгата 
прямо пропорционально количеству АТ к ТГ в исследуемом образце.
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. 
Степень окраски прямо пропорциональна концентрации АТ к ТГ в анализируемых пробах. 
После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного 
графика рассчитывается концентрация АТ к ТГ в определяемых образцах (РисЛ).


--- стр. 2 ---
A T  К Т Г
планш ет с Т Г  Т Г-пероксидаза
Рисунок 1 . Схема анализа
2.2. Состав набора
- комплект из двенадцати восьмилуночных стринов в рамке с иммобилизованными 
на внутренней поверхности лунок ТГ, маркирован «Стрипы с иммобилизованньш 
тиреоглобулином» — 1  упаковка;
- калибровочные пробы (КП), аттестованные по Международному референсному 
препарату WHO 65/093, содержащие известные количества АТ к ТГ. Точные значения 
концентраций АТ к ТГ в калибровочных пробах указаны на этикетках флаконов, 
ориентировочные -  0; 50; 150; 300; 600; 1200 Ед/мл -  6 флаконов (лиофилизованные 
препараты или жидкости по 0,5 мл);
- конъюгат ТГ-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» ™ 1  флакон (14 мл);
- аналитический водно-солевой раствор, маркирован «Буфер А» — 1  флакон (14 мл);
- концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован 
«Буфер Р» — 2 флакона (14 мл);
- раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» — 1  флакон (14 мл);
- стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» — 1  флакон 
(14 мл);
- контрольная сыворотка с известным содержанием АТ к ТГ, маркирована 
«Контрольная сыворотка» — 1  флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл);
- прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2- 
слойного полиэтилена).
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
ЗЛ. Специфичность. Использование высокоочищенного ТГ для сенсибилизации 
стрипов и синтеза конъюгата ТГ-пероксидаза обеспечивает высокую специфичность 
анализа.
3.2. Коэффициент вариации результатов определения АТ к ТГ в одном и том же 
образце с использованием набора «ТироидИФА-атТГ» не превышает 8%.
3.3. Линейность. Зависимость концентрации АТ к ТГ в образцах сыворотки крови 
при разведении их калибровочной пробой №1 имеет линейный характер в диапазоне 
концентраций калибровочных проб №2 -  №6 и составляет 90-110%.
П рим ечани е: Так как содерж ащ иеся в сы ворот ке крови человека ант ит ела  
имею т гет ерогенную  природу, при разведении исследуем ы х образцов зависимост ь  
определяемой концент рации  АТ к ТГ от ст епени разведения в от дельны х случаях м ож ет  
носит ь нелинейны й характ ер.
3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на 
«открытие» АТ к ТГ — проверка соответствия значения определяемой концентрации АТ к 
ТГ расчетной величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольной 
сыворотки и КП №4. Процент открытия составляет 90-110%.
3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором 
концентрация АТ к ТГ в сыворотке крови человека не превышает 7,5 Ед/мл.
3.6. Хук-эффект высоких концентраций. В наборах реагентов, основанных на 
«сэндвич»-принципе анализа, при высоких концентрациях аналита зависимость величины


--- стр. 3 ---
оптической плотности от концентрации становится обратно пропорциональной (тщ с 
называемый хук-эффект высоких концентраций). При использовании набора 
«ТироидИФА-атТГ» хук-эффект не наблюдается.
3.7. Диапазон ожидаемых значений. Содержание АТ к ТГ измеряли в сыворотке 
крови, взятой с 9 до 1 1 часов у 120 здоровых лиц в возрасте 21-45 лет. Измеренная 
концентрация АТ к ТГ не превышала 65 Ед/мл.
Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности метода, 
особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории. По этой 
причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленные изготовителем 
значения только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будут определены 
диапазоны ожидаемых значений, характерных для конкретной популяции в месте 
расположения лаборатории.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора — класс 1 .
4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются 
нетоксичными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 
Лаборатории медицинские. Требования безопасности.
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1  Н раствор соляной кислоты. Избегать 
разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания раствора стоп- 
реагента на кожу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим 
количеством проточной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или 
пластиковые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые 
образцы являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное 
время сохранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с 
набором, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
- Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять 
оптическую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
- прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер), 
позволяющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре 
+37°С;
- пипетки полуавтоматические одноканальные с изменяемым объемом отбора 
жидкостей: на 5-50 мкл; 40-200 мкл; 200-1000 мкл; 1000-5000 мкл с наконечниками;
“  пипетка полуавтоматическая восьмиканальная, позволяющая отбирать объемы 
жидкости до 300 мкл, с наконечниками;
- цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл;
- стакан стеклянный подходящего объема;
- вода дистиллированная;
- бумага фильтровальная;
- перчатки резиновые или пластиковые;
- 1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;
- контейнер для дезинфекции;
- ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.


--- стр. 4 ---
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После 
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После 
центрифугирования сыворотку переносят в отдельную пробирку. Для проведения анализа 
не разрешается использовать плазму крови, гемолизированную или мутную сыворотку, а 
также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.2. Образцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2...8°С йе 
более 2 суток; при необходимости более длительного хранения рекомендуется 
аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С или 
ниже. Не допускается повторное замораживание образца.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо выдержать при 
комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на 
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к 
использованию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной 
сыворотки перед вскрьггием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, 
прилипшие к стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки 
перевернутыми на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой.  и 
контрольной сывороткой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. 
Выдержать флаконы в течение 10 минут при комнатной температуре (+18...25°С) без 
перемешивания. Затем, аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их 
содержимое до полного растворения, избегая ценообразования. В течение следующих 
.1 0 минут выдержать флаконы при комнатной температуре, периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат Е готов к использованию. Расход конъюгата Е на один стрип 
составляет 1,15 мл.
7.1.4. Буфер А готов к использованию. Расход буфера А на один стрип составляет 
1,15 мл.
7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Р развести 
дистиллированной водой в 20 раз.
Например:
5 мл буфера Р + 95 мл дистиллированной воды.
Тщательно перемешать, избегая ценообразования.
7.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на 
один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип 
составляет 1Д5 мл.
7.1.8. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно 
перемешаны и доведены до комнатной температуры (+18...25°С).
В приложении 1  приведена схема проведения анализа.
7.2. Постановка анализа
7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим 
образом:
А1, А2 — №1 для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
В1, В2 — №2 для измерения величины оптической плотности КП№1;
С1, С2 — №3 для измерения величины оптической плотности КП№2;
D1, D2 — №4 для измерения величины оптической плотности КП№3;
Е1, Е2 — №5 для измерения величины оптической плотности КП№4;


--- стр. 5 ---
FI, F2 — № 6 для измерения величины оптической плотности КП№5;
G1, G2 — № 7 для измерения величины оптической плотности КП№6;
Н1,Н2 — №8 для измерения величины оптической плотности контрольной
сыворотки.
7.2.2. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 100 мкл буфера А.
7.2.3. Внести в соответствующие лунки по 50 мкл калибровочных проб и 
контрольной сыворотки, в оставшиеся лунки по 50 мкл исследуемой сыворотки крови в 
дубликатах.
Примечание: общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки  
и исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации  
разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным  
результатам.
7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 30 минут при встряхивании в 
термостатируемом шейкере при температуре +37°С со скоростью 500-800 об/мин.
7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с 
дезинфицирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором 
перекиси водорода) и промыть лунки пять раз. При каждой промывке во все лунки 
добавлять по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7.1.5, встряхнуть 
рамку на шейкере в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После 
последнего декантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием 
рамки со Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного 
устройства.
7.2.6. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, немедленно внести по 120 мкл раствора 
конъюгата ТГ-пероксидаза.
7.2.7. Инкубировать стрипы согласно п. 7.2.4.
7.2.8. По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть лунки 
согласно п.7.2.5.
7.2.9. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ. Инкубировать 
стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15-30 минут в 
зависимости от степени развития окраски.
Примечание: максимальная оптическая плотность не должна превышать пределов 
линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра  
необходимо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая  
плотность не более 2,5 ед. ОП.
7.2.10. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, 
как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, 
встряхивать на шейкере в течение 1-2 минут.
7.2.11. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета 
непосредственно после выполнения п. 7.2.10., то следует иметь в виду, что окраска в 
лунках планшета стабильна не более 20 минут при температуре +18. ..25°С.
8. Р Е Г И С Т Р А Ц И Я  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность,  в 
лунках при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической 
плотности в лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
Примечание: среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках  
А1 и А2 не должно превышать 0,09 ед.ОП.