Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита А в сыворотке (плазме) крови (Вектогеп А-IgМ) по ТУ 9398-287-23548172-2011 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/11653 от 05.08.2011 · класс риска 2а

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита А антитела класса иммуноглобулин М (IgМ) ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 736 контрактов, медианная цена за единицу 7 930 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
*  %рпия верна
т щ щ ^ А ю
Рукдв(Штель Федеральной службы по надзору 
li cфepf^йpaвooxpaнeиия и 
аоциальШ^о развития
/ ‘ Р.У. Хабриев
200^ / :
И Н СТРУКЦ И Я по П РИ М ЕН ЕН И Ю
«Вектогеп А - Ig M - C T p u n »
набор pearei? гов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к ви­
русу гепатита А
Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М 
к вирусу гепатита А представляет собой диагностический набор для проведения имму­
ноферментного ана.1иза (ИФА) на твердофазном носителе.
СОСТАВ НАБО РА
- иммуносорбент - моноклональные антитела против иммуноглобулинов класса М 
человека, иммобилизованные на 96 луночном разборном планшете;
~ положительный контрольный образец (К “^), инактивированный ~ прозрачная жид­
кость красною HBCia;
- отрицательный контрольный образец (К “ ), инакгивированный - прозрачная бес­
цветная или слегка желтоватого цвета жидкость с легкой опалесценцией;
- антиген В Г А , инактивированный - бесцветная жидкость с легкой опалесценцией; 
-конъюгат, концентрат (моноклональные антитела к ВГА, меченные пероксидазой
х р ен а) ~ п р о зр а чн ая ж и д к о с т ь  си н его  ц вета;
~ раствор для предварительного разведения сывороток (РПРС) - жидкость малиново­
го цвета;
Взамен инструкции по пр 1шенению, утвержденной 02.02.2001  г.
i


--- стр. 2 ---
- раствор для разведения сывороток (РРС) - прозрачная бесцветная жидкость с легкой 
опалесценцией;
- раствор для разведения конъюгата (РРК) - прозрачная бесцветная жидкость с легкой 
опалесценцией;
- 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ- 
Тх25) - прозрачная бесцветная жидкость, возможно выпадение осадка солей, раство­
ряющегося при температуре от 30 до 40 °С  в течение 20 мин;
- тетраметилбензидин, концентрат (ТМ Б) ~ прозрачная бесцветная жидкость;
- субстратный буферный раствор (СБР) - прозрачная бесцветная жидкость;
- стоп-реагент - прозрачная бесцветная жидкость.
Активными компонентами тест-системы являются моноклональные антитела про­
тив иммуноглобулинов класса М человека, иммобилизованные в лунках планшетов, 
конъюгат моноклональных антител к В ГА  с пероксидазой хрена, антиген ВГЛ, положи­
тельный и отрицательный контрольные образцы.
В лунках планшета, при добавлении исследуемого образца во время первой инкуба­
ции происходит связывание специфических иммуноглобулинов класса М к ВГА  с иммо­
билизованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами против 
иммуноглобулинов класса М человека.
Во время второй инкубации, связавшиеся иммуноглобулины класса М к ВГА, взаи­
модействуют с добавленным в лунки комплексом антигена В ГА  и моноклональных ан­
тител к антигену ВГА , конъюгированных с пероксидазой.
После удаления избытка несвязавшегося комплекса, во время инкубации с раство­
ром ТМБ, происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропор­
циональна концентрации иммуноглобулинов класса М к В ГА  в анализируемых пробах.
Тест-система рассчитана на проведение 96 анализов, включая контрол и. Возмож­
ны 12 независимых постановок по 8 анализов каждая, включая контроли.
Н А З Н А Ч Е Н И Е
Тест-система предназначена для выявления иммуноглобулинов класса М к ВГА  в 
сыворотке крови человека и может быть использована с целью ранней дифференциаль­
2


--- стр. 3 ---
ной диагностики гепатита А в клинических и энидемиологических исследованиях, а 
также для отбраковки донорских сывороток.
С П О С О Б  П Р И М Е Н Е Н И Я
Образцы крови у обследуемых лиц в количестве не менее 0,5 мл отбирают из вены 
или из пальца натощак. Сыворотку крови тщательно отделяют от сгустка и примеси 
эритроцитов.
Для постановки реакции возможно использование свежеприготовленной сыворотки, 
так и хранившейся при температуре от 2 до 8 °С  в течение 24 ч, либо при температуре 
минус 20 °С  в течение 3 мес.
Не допускается повторное замораживание - размораживание образцов.
При постановке ИФА следует соблюдать меры предосторожности, принятые при 
работе с потенциально инфекционным материалом.
Для повышения чувствительности анализа и сокращения времени реакции рекомен­
дуется проводить инкубацию на термошейкере типа PST-60HL при перемешивании 500- 
800 об./мин.
Для успешного использования набора необходимо полное понимание вложенной 
инструкции. Достоверные результаты будут получены только при использовании точной 
лабораторной техники и аккуратном следовании инструкции.
Перед использованием набора необходимо прогреть все реагенты до комнатной 
температуры (18-25 °С ).
Не использовать реагенты из других наборов, реагенты с истекшим сроком хране­
ния.
Необходимо избегать загрязнения компонентов тест-системы микроорганизмами и 
химическими примесями, для этого используют в работе чистую посуду и чистые одно­
разовые наконечники для каждого реагента, контроля, образца. После отбора необходи­
мого количества компонента флаконы плотно закрывают и хранят при температуре от 
2 до 8 °С  не более 4 недель.
Вскрывать цефленовый пакет с планшетом следует со стороны зажима, отступив 
выше него примерно 1  см. Неиспользованные стрипы необходимо обратно поместить в 
пакет с осушителем, закрыть пластиковой застежкой и хранить не более 4 недель при 
температуре от 2 до 8 °С.
3


--- стр. 4 ---
При многократном использовании контейнера или ванночки для компонента их сле­
дует использовать всегда для одного и того же реагента, при повторном применении 
следует тщательно промыть дистиллированной водой до и после каждого использова­
ния.
Для работы с набором необходимо использовать дистиллированную воду, так как 
компоненты набора очень чувствительны к микробиологическому загрязнению, хлорно­
ватистой кислоте и ароматическим хлорсоединениям, ионам металлов, зачастую нахо­
дящихся в воде.
1. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ И РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИФА
1.1 Контрольные образцы
Контрольные образцы и К  готовы к использованию и не требуют дополни­
тельного разведения.
^  Хранение: после первого вскрытия флаконы хранят в течение 4 недель при тем­
пературе от 2 до 8  °С.
1.2 Исследуемые образцы
Подготовку исследуемых образцов проводят непосредственно перед постановкой 
анализа.
Исследуемые образцы сывороток разводят в 10 раз раствором для предваритель­
ного разведения сывороток (РПРС). Для этого используют вспомогательный ряд проби­
рок или вспомогательный планшет. К  90 мкл РПРС добавляют 10 мкл цельной сыворот­
ки, тщательно перемешивают пипетированием. При этом цвет раствора должен изме­
ниться с малинового на жёлтый.
^  Внимание! Разведенную сыворотку не хранить!
1.3 Рабочий раствор ФСБ-Т 
(ФСБ-Т однократный)
Рабочий раствор ФСБ-Т (для промывания планшета) готовят из концентрата
ФСБ-ТХ25.
Перед использованием флакон с концентратом ФСБ-Тх25 встряхивают. При об­
наружении осадка солей в концентрате его прогревают при температуре от 30 до 40 °С 
до полного растворения осадка.
28 мл концентрата ФСБ-Т разводят дистиллированной водой до 700 мл.
Хранение: до 4 недель при температуре от 2 до 8 ^С.


--- стр. 5 ---
1.4 Приготовление рабочего раствора смеси антигена ВГА и конъюгата
Готовят за 20 мин до окончания первой инкубации!
Количество рабочего раствора смеси антигена В ГА  и конъюгата, необходимое для 
данной постановки анализа, определяют, в зависимости от числа используемых стрипов, 
по таблице расхода компонентов тест-системы (см. ниже)
В отдельный чистый флакон (пластиковую емкость) вносят необходимое количе­
ство раствора для разведения конъюгата (РРК), добавляют соответствующее количество 
концентрата конъюгата и антигена В ГА  (см. таблицу расхода компонентов) и тщательно 
перемешивают.
Хранение: до 24 ч при температуре от 2 до 8  °
1.5 Раствор ТМБ
Готовят непосредственно перед использованием. При приготовлении раствора 
ТМБ следует исключить воздействие света, например, обернуть флакон фольгой.
Количество раствора ТМБ, необходимое для данной постановки анализа, опреде­
ляют, в зависимости от числа используемых стрипов, по таблице расхода компонентов 
тест-системы (см. ниже).
В отдельный чистый флакон вносят необходимое количество СБР, добавляют 
нужное количество концентрата ТМБ и тщательно перемешивают. Приготовленный рас­
твор ТМБ должен быть прозрачным и бесцветным.
Хранение:  до 20 мин при температуре от 18 до 25  °С  в защищенном от света  
месте.
Таблица расхода компонентов тест-системы
Количество
одновременно
используемых
стрипов
Концентрат
конъюгата,
мкл
Антиген
В ГА ,
мл
РРК,
мл
Концентрат
ТМ Б,
мкл
СБР,
мл
1 80 0,1 0,7 70 1,0
2 160 0,2 1,4 140 2,0
3 240 0,3 2,1 210 3,0
4 320 0,4 2,8 280 4,0
5 400 0,5 3,5 350 5,0
6 480 0,6 4,2 420 6,0
7 560 0,7 4,9 490 7,0
8 640 0,8 5,6 560 8,0
9 720 0,9 6,3 630 9,0
10 800 1,0 7,0 700 10,0
1 1 880 1,1 7,7 770 11,0
12 960 1,2 8,4 840 12,0


--- стр. 6 ---
Внимание! В состав набора входят кювета и наконечники для пипетки, которые  
следует использовать только для работы с раствором ТМБ. Посуду и пипетки (нако­
нечники), контактирующие с раствором ТМБ, нельзя отмывать с применением синте­
тических моющих средств, поскольку даже их следы ведут к неконтролируемому раз­
ложению ТМБ в ходе реакции. После работы посуду и наконечники ополоснуть водой,  
промыть 70% этиловым спиртом и тщательно отмыть дистиллированной водой.
2. ПРОВЕДЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
2.1 Подготовка стрипов
Перед вскрытием упаковки планшет следует выдержать в течение 30 мин при 
температуре от 18 до 25 °С. Стрипы, в количестве, необходимом для проведения анали­
за, закрепляют в рамке планшета, остальные - немедленно вновь плотно закрывают в 
исходной упаковке. Стрипы хранят после первого вскрытия цефленового пакета в тече­
ние 4 недель в условиях хранения при температуре от 2 до 8 °С.
2.2 Внесение контрольных и исследуемых образцов
В  две лунки стрипа А-1 и В-1 вносят по 100 мкл К“  В  лунку С-1 - 100 мкл К^.
В остальные лунки вносят по 90 мкл раствора для разведения сывороток (РРС) и 
по 10 мкл предварительно подготовленных сывороток (п. 1.2). Для повышения досто­
верности результатов анализа каждый образец вносят в повторах. Пробы тщательно пе­
ремешивают. Таким образом, исследуемая сыворотка в лунке разбавляется в 100 раз.
2.3 Проведение инкубации
Планшет закрывают плёнкой и инкубируют в течение 60 мин при температуре 
37 °С  или 30 мин при 37 °С  на термошейкере с интенсивностью перемешивания 
500-800 об/мин. За 20 мин до окончания инкубации готовят смесь антигена В ГА  и конъ­
югата (п. 1.4).
2.4 Промывание планшета
Содержимое лунок удаляют в сосуд с дезинфицирующим раствором (6% раствор 
перекиси водорода) с помощью промывателя или многоканальной пипетки. После чего 
наконечники пипетки обязательно меняют на новые. Планшет промывают 5-6 раз дис­
тиллированной водой, добавляя в каждую лунку не менее 250 мкл жидкости. Остатки 
влаги удаляют, постукивая перевернутым планшетом по фильтровальной бумаге.
6


--- стр. 7 ---
2.5 Внесение антигена ВГА и конъюгата
Во все лунки планшета вносят по 100 мкл смеси антигена В ГА  и конъюгата 
(п. 1.4).
2.6 Проведение инкубации
Планшет закрывают плёнкой и инкубируют в течение 90 мин при температуре 
37 °С  или 60 мин при 37 °С  на термошейкере с интенсивностью перемешивания 500- 
800 об/мин. За 10 мин до окончания инкубации готовят раствор ТМБ (п. L5).
2.7 Промывание планшета
Содержимое лунок удаляют в сосуд с дезинфицирующим раствором, лунки про­
мывают 5 раз однократным ФСБ-Т (п. 1.3), соблюдая этапы промывки (п. 2.4). В процес­
се промывки обязательно выдержать лунки с промывочным раствором 30 сек.
2.8 Внесение раствора ТМБ
Во все лунки вносят по 100 мкл свежеприготовленного раствора ТМБ. Планшет 
закрывают плёнкой и выдерживают в защищённом от света месте при температуре от 20 
до 25 20 мин.
2.9 Внесение стоп-реагента
Ферментативную реакцию останавливают добавлением во все лунки по 100 мкл 
стоп-реагента.
Внимание! Избегайте контакта с раствором ТМБ и стоп-реагентом. В случае  
попадания раствора ТМБ или стоп-реагента на кожу и слизистые оболочки  
необходимо немедленно смыть их большим количеством проточной воды.
РЕГИСТРАЦИЯ И ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ
Результаты И ФА регистрируют с помощью спектрофотометра, измеряя оптиче­
скую плотность (ОП) при длине волны 450 нм. Выведение спектрофотометра на нулевой 
уровень («бланк») осуществляют по воздуху. Измерения проводят сразу же, не позднее 
10-15 мин после остановки реакции.
Результаты исследований оценивают только в том случае, если среднее значение 
оптической плотности отрицательного контрольного образца (ОП К  ) не превышает 0,2 , 
а значение оптической плотности положительного контрольного образца (ОП К^) не ме­
нее 0,8.
7


--- стр. 8 ---
Результат анализа считают положительным с ОП равной или превышающей кри­
тическое значение оптической плотности (ОПкрит)? которое вычисляется по формуле: 
ОПкрит. ^  О П ср К  + 0,2.
Для интерпретации результатов исследования рекомендуется использовать коэф­
фициент позитивности (КП ):
ОПиссл.сые.K I I  =------------
ОПкрит
Если КП <  1, результат оценивается как отрицательный.
Если КП >  1, исследуемая сыворотка расценивается как положительная.
Таблица интерпретации результатов серологических тестов
8
К П 
Ig M  к В Г А
Д ругие м аркеры  В Г А - 
инф екции Во зм о ж н ы е варианты  опреде­
ления стадии В ГА - и н ф екц и и
В  сы воротке В  ф екалиях
1  < К П  < 2,5 Ig G  В Г А + A g  В Г А -В о сстан о ви тельн ы й  период ге­
патита А  (стад и я вы здоровле­
н и я)
1  < К П  < 2,5 Ig G  В Г А - A g  В Г А +Н ачало кли н и ческо го  периода 
гепатита А  (стад и я разгара бо­
лезни )
1  < К П  < 2,5 Ig G  В Г А -A g  В Г А - С ледует контролировать на­
растание концентрации Ig M ;  
если увели чени е содерж ания  
Ig M  им еется ~  это начало кли ­
нического периода гепатита А
К П  > 2,5 Ig G  В Г А - 
или  
Ig G  В Г А +
A g  В Г А + 
или  
A g  В Г А -
С тад ия разгара болезни (к л и ­
ни чески й  период гепатита А )
Положительные сыворотки, попавшие в зону 1  <  КП <  2,5, имеют низкие концен­
трации IgM к ВГА . Такое содержание IgM к В ГА  может соответствовать началу инфек­
ционного процесса, либо концу заболевания - восстановительному периоду гепатита А, 
когда в крови у обследуемого, кроме IgM, имеются в высокой концентрации IgG к ВГА.
В том случае, когда в исследуемой сыворотке содержание IgM к В ГА  определяет­
ся в низкой концентрации, а IgG к В ГА  отсутствуют, следует провести анализ парных 
сывороток на степень изменения концентрации IgM в 1-й и 2-й сыворотках больного, 
взятых с интервалом 7-14 дней. Парные сыворотки должны тестироваться в двух повто­
рах во время одной постановки.


--- стр. 9 ---
Увеличение КП  для 2>го образца, взятого через 7-14 дней, в сравнении с КП 1-го 
образца, свидетельствует о возрастании концентрации IgM в сыворотке крови и указы­
вает на начало инфекции ВГА .
Положительные образцы с КП >  2,5 имеют высокое содержание IgM к ВГА, 
обычно соответствующее клиническому периоду гепатита А (стадии разгара болезни).
Ф О Р М А  В Ы П У С К А
Набор выпускают в виде комплекта реагентов, упакованном в коробку:
- иммуносорбент - планшет разборный, упакованный в пакет размером 115x150 мм из
9
плёнки полиэтиленовой или из цефлена 1  шт.;
- положительный контрольный образец (К^) 1  флакон 1,5 мл;
- отрицательный контрольный образец (К ‘) 1  флакон 2,5 мл;
- антиген В ГА 1  флакон 1,3 мл;
- конъюгат, концентрат 1  флакон 1,2 мл;
- раствор для предварительного разведения сывороток1  флакон 10,0 мл;
- раствор для разведения сывороток 1  флакон 12,0 мл;
- раствор для разведения конъюгата
- фосфатно-солевой буферный раствор с твином,
1  флакон 12,0 мл;
концентрат 1  флакон 28,0 мл;
- тетраметилбензидин, концентрат 1  флакон 1,0 мл;
- субстратный буферный раствор 1  флакон 13,0 мл;
- стоп-реагент 1  флакон 12,0 мл;
- инструкция по применению 1шт.
СРОК г о д н о с т и .  УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ и  ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ
Срок годности тест-системы - 6 месяцев. Препарат с истекшим сроком годности 
применению не подлежит.
Набор хранят в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 ""С в 
недоступном для детей месте. Замораживание не допускается.
Набор транспортируют в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 
8 °С, допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 °С  не более 3 суток. 
Замораживание не допускается.


--- стр. 10 ---
ш
У С Л О В И Я  О Т П У С КА
Д ля лечебно-проф илактических и санитарно-проф илактических учр еж д ени й .
Реклам ац и и  на качество  тест-систем ы  н ап р авл ять:
в Федеральное государственное учреждение науки «Государственный НИИ 
стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов (Ф Г У Н  
ГИ С К ) им. Л. А. Тарасевича Роспотребнадзора по адресу: 121002, Москва,
пер. Сивцев Вражек, 41, тел. (495) 241-39-22;
и в адрес предприятия-изготовителя ЗАО «Вектор-Бест»: 630559, Новосибирская  
обл., Новосибирский район, п. Кольцова, а/я 121, тел. (383) 227-67-64, 336-60-60,  
тел./факс (383) 336-73-46, 336-60-30, E-mail:vbobtk@vector-best.ru
10
Ген ер альн ы й  директор 
З А О  «В екто р - Б е ст»
М .Д , Х у с а и н о в
T Z i


--- стр. 11 ---
f
9
/ / . J