Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вируса герпеса человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РеалБест ДНК ВГЧ-6) по ТУ 21.20.23-041-23548172-2019 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2021/15015 от 09.08.2021 · класс риска 2б

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Герпесвирус человека 6 тип нуклеиновая кислота ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 85 контрактов, медианная цена за единицу 9 813 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
о
УТВЕРЖДЕНА 
Приказом Росздравнадзора
2 Я П - П р / / 1
УТВЕРЖДАЮ
Директор Федерального
бюджетного учреждения науки 
«Цмтрапьный научно-
исследовательский инстжут 
эпидемиологии* Федеральной 
службы^ по надзору в сфере 
зашитьГ прав потребителей и 
бпагоп<)лучие ч^лоеев»
'  f ВЛ.Покоовский 
.2012 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов 
для выявления и количественного определения 
ДНК вируса герпеса 6 типа (HHVb)  в клиническом материале 
методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с 
гибридизационно-флуоресцентной детекцией 
«АмплиСенс* ННУБ-скрин-титр-РЬ»
АмплиСенс*
у
Фмерьльное бюдяетмм учмжАе>«е науки  
кЦантральний научно-иссладовательский 
йнстигут элмдекиопогиик,
Российская Ф«дера14ия. 111123,
город Москва, улица Ноаоп^евская. дон За IVD


--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ ..................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА...........................................................-........................................... 3
ФОРМАТЫ и ФОРМЫ ВЫПУСКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ..........................................4
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ......................................................... ...............5
МЕРЫ ПРЕДОСТОРООКНОСТИ ...................................................................................5
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ ..........................................7
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛАв 
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК. . . 9
ФОРМАТ FRT..........................................................................  11
СОСТАВ..............................................................................................................................11
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ.........................................................................12
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ ................................................12
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ*.....................................................................................................................13
А. Подготовха провирох для амплификации.......................................................  13
Б. Проведение вмплификации детекцией в режиме «реального времени*  13
АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ....................................................... 1«
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ..............20
ПРИЛОЖЕНИЕ 1. Схема приготоаленияреапаюнныхаиесей .................... .-31
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ...............................-  22
яят аннш. 1 • TB -vio-Ttaojaibtf^H K i-o94--i-i.
Форш г;К1Я>?-у’о-т-(Вб.о,|*ГрЁЧн.ое4г-1.1 ^ « с е  iz/eip г м* 22
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие
сокращения и обозначения: ____________________
BKOGlOb _______- экпогенмый внутренний контрольный образец _________
К* - положительный контроль ПЦР
- отрицательным контроль ПЦР
- отрицательный контроль зкстраюв<и
- отрицательный контрольный образец
- положительный контроль екс^акции_
- положительный контрольный образец 
' - полимеразная цепная реакция
ОКО 
ПК 
ПКО 
ПЦР
ФБУН инии ■ ®вдеральнов бюджетное учреждение науки
_ ^  «Центральный научно-исследовательский институт
Ро^тоевналэооа Федеральной службы по надзору в сфере
______защиты прав потребителей и благополучия человека ____________________
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального аремеми*
H H V 8 вирус герпесабтхта
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиСенс* ННИВ-скрин-TMTp'FLa
предназначен для выявления и количественного 
определения ДНК вируса герпеса 6 типа ( H H V 6 ) в 
клиническом материале методом полимеразной цепной 
реакции (ПЦР) с гибридизащюнно-флуоресцентной 
детекцией продуктов амплификации. Материалом для 
проведения ПЦР служат пробы ДНК, выделенные из цельной 
крови, лейкоцитов крови, биоптатов внутренних органов, 
слюны, смывов и мазков из ротоглотки, спинномозговой 
жидкости.
ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в 
комплексной диагностике заболевания'.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Выявление H H V S методом полимеразной цепной реакции 
(ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией 
включает в себя три этапа: экстракцию ДНК из образцов 
клинического материала, амплификацию участка ДНК 
данного микроорганизма и гибридизационно-флуоресцентную 
детекцию, которая производится непосредственно в ходе 
ПЦР. При экстракции ДНК из клинического материала, 
содержащего клетки, происходит амплификация участка ДНК
в соответствии сДирективой Европейского Союза 98/79/ЕС.
Формат ЯЯТ Форш 1: fcE^R-V10-T(HG iQ.M»)
Форш 2: E £3 r-V4>-T(RG.O.M x)TrEF|h-OM2-1-1^ e3 i8 Св 12/ erp Зи>22
J.


--- стр. 3 ---
о
генома человека (эндогенный внутренний контроль). 
Эндогенный внутренний контроль (ВКО Gk>b) позволяет не 
только контролировать этапы ПЦР-исследования (экстракцию 
ДНК и ПЦР). но и оценивать адекватность взятия материала 
и его хранения. Затем с полученными пробами ДНК 
проводится реакция амплификации участка ДНК H H V Q при 
помощи специфичных к этому участку ДНК праймеров и 
фермента Taq-полимераэы. В составе реакционной смеси 
присутствуют флуоресцентно-меченые олигонуклеотидные 
зонды, которые гнбридизуются с комплементарным участком 
амплифицируемой ДНК-мишени. в результате чего 
происходит нарастание интенсивности флуоресценции. Это 
позволяет регистрировать накопление специфического 
продукта амплификации путем измерения интенсивности 
флуоресцентного сигнала. Детекция флуоресцентного 
сигнала осуществляется непосредственно в ходе ПЦР с 
помощью амплификатора с системой детекции 
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени».
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ 
Набор реагентов выпускается в 1 формате.
Формат FRT
Набор реагентов выпускается в 3 формах комплектации;
Форма 1 включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 
100, «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F;
Форма 2 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» 
вариант FRT-100 F.
Форма 3 включает наборы реагентов оптом, расфасованные 
по отдельным реагентам, с маркировкой реагентов на их 
оптовой фасовке.
Форма комплектации 1 предназначена для проведения 
полного ПЦР-исследования, включающего экстракцию ДНК, 
амплификацию и количественное определение ДНК вируса 
герпеса 6 типа (ННУ6) с гибридизационно-флуоресцентной 
детекцией в режиме «реального времени».
Форма комплектации 2 предназначена для амплификации и 
количественного определение ДНК вируса герпеса 6 типа 
{ Н Н Щ с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в 
режиме «реального времени». Для проведения полного ПЦР-
Формат FRT «орна 1: к
Форма 2: l*E 4R-V1t>-T(RG.iQ.liten
rR.yi0-T|RQ.iQM») | R eflHK1.0941-1-T 
j>--0Sa2-l.- .<7e^1»Q212/ctp4imZ
исследования необходимо использовать комплекты 
реагентов для экстракции ДНК. рекомендованные ФБУН 
ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Форма комплектации 3 предназначена для 
производственных целей для последующей маркировки на 
языке заказчика и комплектации по наборам.
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 3 используется только в 
соответствии с регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ 
Эпидемиологии Роспотребнадзора.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 
Аналитическая чувствительность
Вид кпииичккого иат*ри»ла
Спиннотоэгемя хмдхостъ 
(ликвор), слюне, ом ы  и ив»ки из 
ротогяотж____________ __
Комплект для 
|ДНК
Аналитнчвсквя
«>ЦС1ИМ1МЫ10С'1Ь
«РИБО-лреп! 400 копиМмп
Цопрмая кровь. ПвЙК01вГГЫ крови, 
биоптвтм виутрфмиих органов
•РИБО-лрвл« 6 копий ДНК H t m  
м  10* клвто«
Линейный диапазон измерения набора реагентов: S00 - 
10 000 000 копий/мл.
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает фрагмент ДНК вируса 
герпеса 6 типа. Специфическая активность набора реагентов 
доказана при исследовании клинического материала с 
последующим подтверждением результата методом 
секвенирования фрагментов амплификации.
Показано отсутствие активности компонентов набора в 
отношении ДНК других вирусов (вирус простого герпеса 1 и 2 
типа. Эпштейн-Барр вирус человека, вирус герпеса 8 типа, 
вирус Варицелла-Зостер, P a r v o v i r u s В19, цитомегаловирус 
человека и др.), бактериальных возбудителей ( S t r e p t o c o c c u s 
pyogenes. S t a p h y t o c o c c u s  a u r e u s .  S t r e p t o c o c c u s  a g a l a c t i a e и 
др.) и ДНК человека.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей 
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования 
клинического материала на наличие возбудителей 
инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-
Фориат FRT Форма 1:E^TR.V10-T(RG Ю.Мх) I я Ы нК1.0в41-1-1.
Форма 2: ^0R-V1O.T(RG.O.U>r^^H.OW2-1-1 irtF i 15 02 12Г Cip S и) 22


--- стр. 4 ---
эпидемических правил СП 1.3.2322*08 «Безопасность работы 
с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и 
возбудителями паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790- 
10 «Санитарно-эпидемиологические требования к 
обращению с медицинскими отходами» и методических 
указаний МУ 1.3.2569*09 «Организация работы лабораторий, 
использующих методы амплификации нуклеиновых кислот 
при работе с материалом, содержащим микроорганизмы MV 
групп патогенности».
При работе всегда следует выполнять следующие требования;
- Следует рассматривать исследуемые образцы как 
инфекционно-опасные, организовывать работу и хранение 
в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами Ж-IV групп патогенности (опасности) и 
возбудителями паразитарных болезней».
• Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или 
реактивы, используя дезинфицирующие средства в 
соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и 
возбудителями паразитарных болезней».
• Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. 
Анализ проводится в отдельных помещениях (зонах). 
Работу следует начинать в Зоне Экстракции, продолжать в 
Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы, 
оборудование и реактивы в зону, в которой была проведена 
предыдущая стадия процесса.
• Удалять неиспользованные реактивы в соответствии с 
СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические 
требования к обращению с медицинскими отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации 
(пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо 
открывание пробирок и разбрызгивание содерм 1мого, 
поскольку это может привести к контаминации продуктами 
ПЦР лабораторной зоны, оборудования и реагентов.
• Применять набор строго по назначению, согласно данной 
инструкции.
- Допускать к работе с набором только специально 
обученный персонал.
Не использовать набор по истечении срока годности.
•0(т т  FRT »ор«М 1: gg^TR-yiO-T(RGiQ Н»),[н1ЯмК1439«1-1.1,
Форма 2: R-VlO-T(RG.iO.U<r^^H<iM3-1-l;^E^ 15 02.12/стр в И) 22
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные 
халаты, защищать глаза во время работы с образцами и 
реактивами. Тщательно вымыть руки по окончании 
работы.
Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой 
оболочкой. При контакте немедленно промыть 
пораженное место водой и обратиться за медицинской 
помощью.
Листы безопасности материалов (MSDS -  material safety 
data sheet) доступны no запросу.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
Проведение предварительной подготовки материала:
1. ГЕМОЛИТИК СТУ 9398-097-01897593-2010) - реагент для 
предобработки цельной периферичеоюй и пуповинной крови 
(производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора).
2. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или 
плотно закрывающиеся пробирки на 1,5 мл (например. 
Axygen, США).
Экстракция ДНК из обоазиов (ЗОНА 1):
3. Комплект реагентов для выделения «РИБО-преп» (ТУ 9398- 
071-01897593-2008) или «ДНК-сорб-В» (ГУ 9398-003- 
01897593-2009) - при работе с формой комплектации 2. Для 
экстракции ДНК из биоптатов реюмендуется использовать 
комплект реагентов «ДНК-сорб-С» (ТУ 9398-075-01897593- 
2008).
4. Дополнительные материалы и оборудование для экстракции 
ДНК - согласно инструкции к комплекту реагентов для 
экстракции ДНК.
Проведение ПНР и гибоидизаиионно-<Ьпуору 1,|рнтной детекции 
ПРОДУКТОВ амплификации (ЗОНА 2).
5. ПЦР-бокс (например, «БАВ-ПЦР-«Ламинар-С». 
«Ламинарные системы». Россия).
6. Центрифуга/вортекс (например, «ТЭТА-2». «Биоком», 
Россия).
7. Автоматические дозаторы переменного объема от 5 до 20 
мкл и от 20 до 200 мкл.
6. Одноразовые наконечники с фильтром до 100 и 200 мкл в
Формат FRT Форма 1-.^ p |TR.V10.T(RG.iq.M»)tM3HK1.OM1.1-1. 
Форма 2: HEF|R-V10 -T(RG,iQ,M»1. ^<EF|h^»-»2-1-1 150212/етр 7 «22


--- стр. 13 ---
Всего прошито, пронумеровано и 
скреплено печатью листов.
Масяго А.В 
ШЛт.
/
0А


--- стр. 14 ---
«УТВЕРЖДАЮ» 
Генеральный директор
по применению набора реагентов
для выявления и количественного определения ДНК вируса герпеса человека 6 типа 
методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
«РеалБест ДНК ВГЧ-6»
(комплект 1)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вируса герпеса 
человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «Реал­
Бест ДНК ВГЧ-6» предназначен для качественного выявления и количественного определе­
ния ДНК вируса герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6) в клинических образцах (соскобы из рото­
глотки, сыворотка (плазма) крови, цельная кровь, моча, слюна) методом полимеразной цеп­
ной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме 
реального времени. Набор может быть использован при диагностике герпес-вирусной ин­
фекции, обусловленной вирусом герпеса человека 6 типа.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного 
участка ДНК возбудителя инфекции в ходе проведения ПЦР.
Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах: температурная де­
натурация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями 
ДНК-матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой. В 
основе регистрации процесса амплификации лежит измерение сигналов флуоресценции в 
каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря исполь­
зованию гибридизационного ДНК-зонда, специфичного для выбранного участка ДНК
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором  
по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.


--- стр. 15 ---
возбудителя инфекции, который в ходе реакции связывается с одной из цепей ДНК, 
обеспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5'- 
конце флуоресцентный краситель, а на З'-конце —  гаситель флуоресценции, значительно 
снижающий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплемен­
тарной цепи, благодаря 5'— З'-нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы, зонд расщеп­
ляется с 5'-конца и происходит разобщение красителя и гаеителя, приводящее по мере 
накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции (см. Holland, Р. М., 
Abramson, R. D., Watson, R., & Gelfand, D. H. (1991). Detection of specific polymerase chain  
reaction product by utilizing the 5 ’-3 ’ exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA poly­
merase. Proceedings of the National Academy of Sciences, 88(16), 7276-
7280. doi:10.1073/pnas.88.16.7276). Измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от 
количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуо­
ресценции определяется исходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце 
(см. Higuchi, R., Fockler, С., Dollinger, G., & Watson, R. (1993). Kinetic PCR Analysis: Real­
time Monitoring of DNA Amplification Reactions. Nature Biotechnology, 11(9), 1026-  
1030. doi:10.1038/nbt0993-1026). При этом определяется значение порогового цикла (Ct) - 
номер цикла, на котором уровень флуоресцентного сигнала, появляющегося в ходе спе­
цифичной реакции амплификации, достоверно превышает фоновые колебания. Значение 
Ct и начальная концентрация целевой ДНК в пробе чётко связаны математической функ­
цией (см., например: Kubista, М., Andrade, J. М., Bengtsson, М., Forootan, А., Jonak, J., 
Lind, К., ... Zoric, N. (2006). The real-time polymerase chain reaction. Molecular Aspects of  
Medicine, 27(2-3), 95-125.  doi:10.1016/j. mam.2005.12.007). Соответствие значений Ct и 
численных значений концентрации ДНК ВГЧ-6 в исследуемых образцах устанавливается 
в каждой постановке за счёт использования положительного контрольного образца 
(ПКО), аттестованного относительно международного стандарта ВОЗ в международных 
единицах на 1  мл анализируемого образца (МЕ/мл) (NIBSC code 15/266). (
Учёт эффективности выделения ДНК из образцов обеспечивается выделением ДНК 
возбудителя инфекции из клинических образцов совместно с предварительно внесённым 
внутренним контрольным образцом (ВКО).
2.2. Состав набора:
Компонент набора (сокращение) 
Описание.
Количество
Положительный контрольный образец (ПКО)
Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05 %)  
Аттестован относительно стандарта ВОЗ «1st WHO Internation­
al Standard HHV-бВ virus DNA» (NIBSC code 15/266)»
1  пробирка, 
1  мл
Готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС) 96 пробирок


--- стр. 16 ---
Лиофилизироваиная
Оптическая пленка 1,5 листа
Вкладыш с информацией о концентрации ДНК ВГЧ-6 в ПКО 1  шт.
2.3. Условия применения.
Комплект 1  применяется с регистрирующими амплификаторами планшетного типа: 
«CFX96», «iQ5 iCycler», (фирма «Bio-Rad», США), «ДТ-96», «ДТпрайм», «ДТлайт» (ООО 
«НПО ДНК-Технология», Россия).
Аналитические и диагностические характеристики набора были валидированы при вы­
делении ДНК ВГЧ-6 из клинических образцов (соскобов из ротоглотки, сыворотки (плазмы) 
крови, цельной крови, моча, слюна) с использованием наборов «РеалБест ДНК-экспресс», 
«РеалБест ДНК-экстракция 2», «РеалБест ДНК-экстракция 3», «РеалБест экстракция 100», 
«РеалБест УниМаг» и «Лизирующий раствор» производства АО «Вектор-Бест».
Количественное определение ДНК ВГЧ-6 в сыворотке (плазме) крови валидировано 
при выделении ДНК наборами «РеалБест экстракция 100», «РеалБест УниМаг». Количе­
ственное определение ДНК ВГЧ-6 в цельной крови валидировано при выделении ДНК набо­
ром «РеалБест экстракция 100».
Комплект 1  рассчитан на проведение анализа 96 образцов, включая контрольные об­
разцы.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Аналитическая чувствительность:
Чувствительность выявления ДНК ВГЧ-6 - 40 ME в пробе. Определяется по стандарт­
ному образцу предприятия (СОН 05-2-396, аттестован относительно стандарта ВОЗ «1st 
WHO International Standard HHV-6B virus DNA» (NIBSC code 15/266)). Образцы c содержа­
нием ДНК ВГЧ-6 40 ME в пробе в 100 % случаев дают положительный результат.
3.2. Диапазон определяемых концентраций (область линейности): от 500 до 10^ ME 
ДНК ВГЧ-6/мл.
Тест на «линейность» -  характеризует совпадение (в %) измеренного значения и пред­
писанного значения (вычисленного с учётом фактора разведения) логарифма концентрации 
ДНК ВГЧ-6 в образце, приготовленном разведением из СОН. Значение «линейности» нахо­
дится в пределах 90-110%.
3.3. Воспроизводимость - коэффициент вариации значений логарифма концентрации 
ДНК ВГЧ-6 не превышает 10 %.
3.4. Аналитическая специфичность:
Для оценки аналитической специфичности были проведены проверки с ДНК герпесви- 
русов других типов: вируса ветряной оспы (VZV, герпесвирус человека тип 3), вируса 
Эпштейна-Барр (ВЭБ, герпесвирус человека тип 4), цитомегаловируса (ЦМВ, герпесвирус
3


--- стр. 17 ---
человека тип 5), вируса простого герпеса 1  и 2 типов (ВПГ-1,2), герпесвирус человека тип 8 
(ВГЧ-8). Перекрестно реагирующих ДНК герпесвирусов других типов, по данным, получен­
ным при исследованиях в рамках клинико-лабораторных испытаний, обнаружено не было.
Был проведен in silico анализ последовательностей праймеров и зондов по базам после­
довательностей микроорганизмов и вирусов. Возможность перекрестных реакций исключе­
на.
3.5. Диагностическая чувствительность выявления ДНК ВГЧ-6: клинические испыта­
ния, проведенные на 84 положительных образцах, показали 100 % чувствительность (интер­
вал 95,7 % - 100 %, с доверительной вероятностью 95 %);
3.6. Диагностическая специфичность выявления ДНК ВГЧ-6: клинические испытания, 
проведенные на 76 отрицательных образцах, показали 100 % специфичность (интервал 95,3 
% - 100 %, с доверительной вероятностью 95 %);
3.7. Потенциально интерферирующие вещества.
Для выделения ДНК при работе с набором реагентов используются зарегистрирован­
ные в установленном порядке наборы реагентов для выделения нуклеиновых кислот из кли­
нических образцов - «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 2», «РеалБест 
ДНК-экстракция 3», «РеалБест экстракция 100», «РеалБест УниМаг» и «Лизирующий рас­
твор» производства АО «Вектор-Бест». При использовании данных наборов в соответствии с 
инструкциями по их применению не ожидается влияние интерферентов, которые могут при­
сутствовать в образцах соскобов из ротоглотки, сыворотки (плазмы) крови, цельной крови, 
мочи, слюны.
В клинических испытаниях показано отсутствие влияния потенциально интерфериру­
ющих веществ в образцах цельной крови (гемоглобина до 240 г/л, билирубина до 0,2 мг/мл 
(350 мкмоль/л), триглицеридов до 30 мг/мл, альбумина до 90 мг/мл), образцах соскобов эпи­
телиальных клеток (кровь до 0,5%) и образцах мочи (билирубин до 0,2 мг/мл (350 мкмоль/л), 
глюкоза до 55 ммоль/л, белок до 3 г/л) на результаты анализа методом ПЦР набором «Реал­
Бест ДНК ВГЧ-6».
ЭДТА, используемый в качестве антикоагулянта, не оказывает влияния на результаты 
анализа.
Запрещено использование гепарина в качестве антикоагулянта в связи с его возможным 
ингибирующим влиянием на ПЦР.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012
№ 4н).
4.2. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных
4


--- стр. 22 ---
i
ствует о наличии контаминации (см. п. 8.2.4.).
8.1.3. В каждом исследуемом образце программа должна фиксировать нарастание 
сигнала амплификации ДНК ВКО (канал «РАМ») и определять CtBKO.
8.2. Учёт результатов.
8.2.1 Вычислить (Ct ВКО)ср как среднее значение Ct ВКО всех анализируемых образ­
цов (включая ПКО и ОКО). Отбраковке подлежат значения Ct ВКО, отличающиеся более 
чем на 2 от значения (Ct ВКО)ср. После отбраковки пересчитать (Ct ВКО)ср для оставшихся 
значений.
8.2.2. Анализируемый образец считается положительным (содержащим ДНК ВГЧ-6), 
если для этого образца значение Ct по каналу «КОХ» меньше или равно 40.
8.2.3. Анализируемый образец считается отрицательным (не содержащим ДНК ВГЧ- 
6), если для этого образца значение Ct по каналу «КОХ» больше 40 или не определяется.
Если для такого образца значение Ct ВКО превышает значение (Ct ВКО)ср более чем 
на 2, то результат по данному образцу не подлежит анализу и учету как отрицательный. 
Необходимо провести повторный анализ данного образца, начиная с этапа выделения ДНК.
8.2.4. В случае контаминации все положительные результаты по данной индивидуаль­
ной постановке ПЦР, считаются недостоверными. Требуется предпринять меры по выявле­
нию и ликвидации источника контаминации и повторить анализ всех образцов данной по­
становки, для которых получен положительный результат. Образцы данной постановки, ана­
лиз которых дал отрицательный результат, следует учитывать, как отрицательные.
8.3. Количественный учёт результатов
Для количественного анализа рассчитать концентрацию ДНК ВГЧ-6 в исследуемых 
образцах в соответствии с Приложением.
8.3.1. Если вычисленное значение концентрации ДНК ВГЧ-6 в образце находится в 
диапазоне от 500 до 10^ ME ДНК ВГЧ-6/мл, результат определяется как положительный с 
указанием полученной концентрации ДНК ВГЧ-6 в образце (в МЕ/мл).
8.3.2. Если вычисленное значение концентрации ДНК ВГЧ-6 больше 10^ ME, то ре­
зультат рекомендуется интерпретировать как положительный с концентрацией ДНК ВГЧ-6 
«больше 10^ МЕ/мл».
8.3.3. Если вычисленное значение концентрации ДНК ВГЧ-6 меньше 500 МЕ/мл, то 
результат рекомендуется интерпретировать как положительный с концентрацией ДНК ВГЧ-6 
«меньше 500 МЕ/мл».
8.3.4. Анализируемый образец учитывается как отрицательный (не содержащий ДНК 
ВГЧ-6), если для этого образца значение Ct по каналу «КОХ» больше 40 или не определяет­
ся.


--- стр. 23 ---
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт­
ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного 
вида, при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 26 °С не 
более 10 суток.
9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться 
при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо­
дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре­
гистрацией температуры.
9.3. Срок годности набора -  12 месяцев со дня вьшуска. Не допускается применение 
наборов по истечении срока их годности.
9.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение инструк­
ции по применению набора.
9.5. Изделие не требует технического обслуживания и не подлежит ремонту.
10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
10.1. производитель гарантирует соответствие вьшускаемых изделий требованиям 
нормативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз- 
никщих вследствие нарущения правил пользования, условий транспортирования и хранения, 
либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функци­
ональные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив­
ной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого 
дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест ДНК ВГЧ-6», следует обра­
щаться в АО «Вектор-Бест» по адресу:
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492,
тел. (383) 252-51-75, 227-60-30; тел./факс (383) 252-51-81, 252-51-77.
E-mail: Dlkobtk(a).vector-best. ru
Начальник отделения 
производства ПЦР-наборов 
АО «Вектор-Бест» А.В. Трухина
10


--- стр. 24 ---
i
Директор по производству 
АО «Вектор-Бест»
Проректор по научной работе 
ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России 
Д.М.Н., профессор
м.п.
В.К. Ткачев
Т.И. Поспелова
11


--- стр. 26 ---


--- стр. 27 ---
-Л
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор 
АО «Вектор-Бест»
_М.Д. Хусаинов^0 ,-
2021 г.
fr U .n .F " '
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов
для выявления и количественного определения ДНК вируса герпеса человека 6 типа 
методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени 
«РеалБест ДНК ВГЧ-6»
(комплект 2)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК вируса герпеса 
человека 6 типа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «Реал­
Бест ДНК ВГЧ-6» предназначен для качественного выявления и количественного определе­
ния ДНК вируса герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6) в клинических образцах (соскобы из рото­
глотки, сыворотка (плазма) крови, цельная кровь, моча, слюна) методом полимеразной цеп­
ной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме 
реального времени. Набор может быть использован при диагностике герпес-вирусной ин­
фекции, обусловленной вирусом герпеса человека 6 типа.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного участ­
ка ДНК возбудителя инфекции в ходе проведения ПЦР.
Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах: температурная де­
натурация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями 
ДНК-матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой. В 
основе регистрации процесса амплификации лежит измерение сигналов флуоресценции в 
каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря исполь­
зованию гибридизационного ДНК-зонда, специфичного для выбранного участка ДНК
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: Директором  
по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.


--- стр. 28 ---
возбудителя инфекции, который в ходе реакции связывается с одной из цепей ДНК, 
обеспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5'- 
конце флуоресцентный краситель, а на З'-конце - гаситель флуоресценции, значительно 
снижающий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплемен­
тарной цепи, благодаря 5'-3'-нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы, зонд расщеп­
ляется с 5'-конца и происходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере 
накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции (см. Holland, Р. М., 
Abramson, R. D., Watson, R., & Gelfand, D. H. (1991). Detection of specific polymerase chain  
reaction product by utilizing the 5 ’-3 ’ exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA poly­
merase. Proceedings of the National Academy of Sciences, 88(16), 7276-
7280. doi:10.1073/pnas.88.16.7276). Измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от 
количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуо­
ресценции определяется исходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце 
(см. Higuchi, R., Fockler, С., Dollinger, G., & Watson, R. (1993). Kinetic PCR Analysis: Real­
time Monitoring of DNA Amplification Reactions. Nature Biotechnology, 11(9), 1026-  
ЮЗО. doi:10.1038/nbt0993-1026). При этом определяется значение порогового цикла (Ct) - 
номер цикла, на котором уровень флуоресцентного сигнала, появляющегося в ходе спе­
цифичной реакции амплификации, достоверно превыщает фоновые колебания. Значение 
Ct и начальная концентрация целевой ДНК в пробе чётко связаны математической функ­
цией (см., например: Kubista, М., Andrade, J. М., Bengtsson, М., Forootan, А., Jonak, J., 
Lind, К., ... Zoric, N. (2006). The real-time polymerase chain reaction. Molecular Aspects of  
Medicine, 27(2-3), 95-125.  doi:10.1016/j. mam.2005.12.007). Соответствие значений Ct и 
численных значений концентрации ДНК ВГЧ-6 в исследуемых образцах устанавливается 
в каждой постановке за счёт использования положительного контрольного образца 
(ПКО), аттестованного относительно международного стандарта ВОЗ в международных 
единицах на 1  мл анализируемого образца (МЕ/мл) (NIBSC code 15/266). (
Учёт эффективности выделения ДНК из образцов обеспечивается выделением ДНК 
возбудителя инфекции из клинических образцов совместно с предварительно внесённым 
внутренним контрольным образцом (ВКО).
2.2. Состав набора:
Компонент набора (сокращение) 
Описание.
Количество
Положительный контрольный образец (ПКО)
Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05 %)  
Аттестован относительно стандарта ВОЗ «1st WHO Internation­
al Standard HHV-6B virus DNA» (NIBSC code 15/266)
1  пробирка, 
1  мл
Реакционная смесь для ПЦР (PC) 10 пробирок, каждая


--- стр. 29 ---
Лиофилизированная на 10 определений
Раствор для восстановления (РВ)
Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05%)
2 флакона, 
по 2 мл
Вкладыш с информацией о концентрации ДНК ВГЧ-6 в ПКО 1  шт
2.3. Условия применения.
Комплект 2 применяетсяения с регистрирующими амплификаторами как роторного ти­
па: «Rotor-Gene 3000», «Rotor-Gene 6000» (фирма Corbett Research, Австралия), «Rotor-Gene 
Q» (фирма Qiagen, Германия), так и планшетного типа: «iQ5 iCycler», «СГХ96» (фирма «Bio- 
Rad», США), «ДТ-96», «ДТпрайм», «ДТлайт» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).
Аналитические и диагностические характеристики набора были валидированы при вы­
делении ДНК ВГЧ-6 из клинических образцов (соскобов из ротоглотки, сыворотки (плазмы) 
крови, цельной крови, моча, слюна) с использованием наборов «РеалБест ДНК-экспресс», 
«РеалБест ДНК-экстракция 2», «РеалБест ДНК-экстракция 3», «РеалБест экстракция 100», 
«РеалБест УниМаг» и «Лизирующий раствор» производства АО «Вектор-Бест».
Количественное определение ДНК ВГЧ-6 в сыворотке (плазме) крови валидировано 
при выделении ДНК наборами «РеалБест экстракция 100», «РеалБест УниМаг». Количе­
ственное определение ДНК ВГЧ-6 в цельной крови валидировано при выделении ДНК набо­
ром «РеалБест экстракция 100».
Комплект 2 рассчитан на проведение анализа 100 образцов, включая контрольные об­
разцы.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Аналитическая чувствительность:
Чувствительность выявления ДНК ВГЧ-6 - 40 ME в пробе. Определяется по стандарт­
ному образцу предприятия (СОП 05-2-396, аттестован относительно стандарта ВОЗ «1st 
WHO International Standard HHV-6B virus DNA» (NIBSC code 15/266)), образцы c содержа­
нием ДНК ВГЧ-6 40 ME в пробе в 100 % случаев дают положительный результат.
3.2. Диапазон определяемых концентраций (область линейности): от 500 до 10^ ME 
ДНК ВГЧ-6/мл.
Тест на «линейность» - характеризует совпадение (в %) измеренного значения и 
предписанного значения (вычисленного с учётом фактора разведения) логарифма концен­
трации ДНК ВГЧ-6 в образце, приготовленном разведением из СОП. Значение «линейно­
сти» находится в пределах 90-110%.
3.3. Воспроизводимость - коэффициент вариации значений логарифма концентрации 
ДНК ВГЧ-6 не превышает 10 %.
3.4. Аналитическая специфичность:
Для оценки аналитической специфичности были проведены проверки с ДНК герпесви-


--- стр. 30 ---
русов других типов: вируса ветряной оспы (VZV, герпесвирус человека тип 3), вируса 
Эпштейна-Барр (ВЭБ, герпесвирус человека тип 4), цитомегаловируса (ЦМВ, герпесвирус 
человека тип 5), вируса простого герпеса 1  и 2 типов (ВПГ-1,2), герпесвирус человека тип 8 
(ВГЧ-8). Перекрестно реагирующих ДНК герпесвирусов других типов, по данным, получен­
ным при исследованиях в рамках клинико-лабораторных испытаний, обнаружено не было.
Был проведен in silico анализ последовательностей праймеров и зондов по базам после­
довательностей микроорганизмов и вирусов. Возможность перекрестных реакций исключе­
на.
3.5. Диагностическая чувствительность выявления ДНК ВГЧ-6: клинические испыта­
ния, проведенные на 84 положительных образцах, показали 100 % чувствительность (интер­
вал 95,7 % - 100 %, с доверительной вероятностью 95 %);
3.6. Диагностическая специфичность выявления ДНК ВГЧ-6: клинические испытания, 
проведенные на 76 отрицательных образцах, показали 100 % специфичность (интервал 95,3 
% - 100 %, с доверительной вероятностью 95 %);
3.7. Потенциально интерферирующие вещества.
Для выделения ДНК при работе с набором реагентов используются зарегистрирован­
ные в установленном порядке наборы реагентов для выделения нуклеиновых кислот из кли­
нических образцов - «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 2», «РеалБест 
ДНК-экстракция 3», «РеалБест экстракция 100», «РеалБест УниМаг» и «Лизирующий рас­
твор» производства АО «Вектор-Бест». При использовании данных наборов в соответствии с 
инструкциями по их применению не ожидается влияние интерферентов, которые могут при­
сутствовать в образцах соскобов из ротоглотки, сыворотки (плазмы) крови, цельной крови, 
мочи, слюны.
В клинических испытаниях показано отсутствие влияния потенциально интерфериру­
ющих веществ в образцах цельной крови (гемоглобина до 240 г/л, билирубина до 0,2 мг/мл 
(350 мкмоль/л), триглицеридов до 30 мг/мл, альбумина до 90 мг/мл), образцах соскобов эпи­
телиальных клеток (кровь до 0,5%) и образцах мочи (билирубин до 0,2 мг/мл (350 мкмоль/л), 
глюкоза до 55 ммоль/л, белок до 3 г/л) на результаты анализа набором «РеалБест ДНК ВГЧ- 
6».
ЭДТА, используемый в качестве антикоагулянта, не оказывает влияния на результаты 
анализа.
Запрещено использование гепарина в качестве антикоагулянта в связи с его возможным 
ингибирующим влиянием на ПЦР.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012
№ 4н).
4


--- стр. 36 ---
Если для такого образца значение Ct ВКО превышает значение (Ct ВКО)ср более чем 
на 2, то результат по данному образцу не подлежит учету как отрицательный. Необходимо 
провести повторный анализ данного образца, начиная с этапа вьщеления ДНК.
8.2.4. В случае контаминации все положительные результаты по данной индивидуаль­
ной постановке ПЦР считаются недостоверными. Требуется предпринять меры по выявле­
нию и ликвидации источника контаминации и повторить анализ всех образцов данной по­
становки, для которых получен положительный результат. Образцы данной постановки, ана­
лиз которых дал отрицательный результат, следует учитывать, как отрицательные.
8.3. Количественный учёт результатов
Для количественного анализа рассчитать концентрацию ДНК ВГЧ-6 в исследуемых 
образцах в соответствии с Приложением.
8.3.1. Если вычисленное значение концентрации ДНК ВГЧ-6 в образце находится в 
диапазоне от 500 до 10^ ME ДНК ВГЧ-6/мл, результат определяется как положительный с 
указанием полученной концентрации ДНК ВГЧ-6 в образце (в МЕ/мл).
8.3.2. Если вычисленное значение концентрации ДНК ВГЧ-6 больше 10^ ME, то ре­
зультат рекомендуется интерпретировать как положительный с концентрацией ДНК ВГЧ-6 
«больше 10^ МЕ/мл».
8.3.3. Если вычисленное значение концентрации ДНК ВГЧ-6 меньше 500 МЕ/мл, то 
результат рекомендуется интерпретировать как положительный с концентрацией ДНК ВГЧ-6 
«меньше 500 МЕ/мл».
8.3.4. Анализируемый образец учитывается как отрицательный (не содержаший ДНК 
ВГЧ-6), если для этого образца значение Ct по каналу «ROX» больше 40 или не определяет­
ся.
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспорт­
ных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного 
вида, при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 26 °С не 
более 10 суток.
9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться 
при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или холо­
дильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной ре­
гистрацией температуры.
9.3. Срок годности набора - 12 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение 
наборов по истечении срока их годности.
9.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной 
инструкции по применению набора.
10


--- стр. 37 ---
9.5. Изделие не требует технического обслуживания и не подлежит ремонту.
10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
10.1. производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям 
нормативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, воз­
никших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, 
либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функци­
ональные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют норматив­
ной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого 
дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест ДНК ВГЧ-6», следует обращаться 
в АО «Вектор-Бест» по адресу:
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492,
тел. (383) 252-51-75, 227-60-30; тел./факс (383) 252-51-81, 252-51-77.
E-mail: plkobtk(^.vector-best. ru
Начальник отделения 
производства ПЦР-наборов 
АО «Вектор-Бест»
Директор по производству 
АО «Вектор-Бест»
Проректор по научной работе 
ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России 
д.м.н., профессор
м.п.
А.В. Трухина
В.К. Ткачев
Т.И. Поспелова
I I


--- стр. 38 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ
Расчёт концентрации ДНК ВГЧ-6
Количественный анализ ДНК ВГЧ-6 следует производить по приведенным ниже фор­
мулам.
1. Для образцов ПКО, значение Cf которых находится в диапазоне значений, указан­
ном во вкладыше в наборы данной серии, вычислить корректированные значения Ct ВГЧ-6 с 
введением поправки на эффективность выделения, контролируемую по Ci ВКО, по формуле:
Z nK O  = Ct ПКО + (Ct ВКОср - С| ВКО),
где:
ZnKO - корректированное значение Ct ВГЧ-6 для образца ПКО;
С| ВКОср - среднее значение Ct ВКО, вычисленное по всем образцам (см. инструк­
цию);
Ct ПКО и Ct ВКО -  значения Ct данного образца ПКО по каналам «КОХ» и «РАМ», 
соответственно.
2. Вычислить среднее значение корректированного порогового цикла для ПКО 
(ZnKO cp).
Отбраковке подлежат результаты анализа образцов ПКО, для которых ZnKo отлича­
ется более чем на 2 от значения ZnKOep. После отбраковки вычислить ZnKOcp для оставших­
ся образцов.
3. Вычислить количество ДНК ВГЧ-6 в каждом исследуемом образце (Qk) по форму­
ле:
Qk = Спко X (ME),
где:
Хк= ZnKOcp-Zk;
ZnKOcp - среднее значение Z для образцов ПКО;
Спко -  концентрация ДНК ВГЧ-6 в ПКО, приведенная во вкладыше к набору, МЕ/мл; 
к - номер образца;
Zk - корректированное значение Ct данного образца, вычисляемое по формуле:
Zk = Ct ВГЧ-6к + (Ct ВКОср -  Ct ВКОк).
4. Вычислить концентрацию Ск ДНК ВГЧ-6 (в МЕ/мл) в каждом исследуемом образ­
це:
при выделении из 100 мкл образца: Ск=10 х Qk 
при выделении из 250 мкл образца: Ск=4 х Qk
Таким образом, будет получена концентрация ДНК ВГЧ-6 в данном образце, выра­
женная в МЕ/мл.
12