Набор реагентов для выявления РНК риновирусов человека методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени (РеалБест-ОРВИ РНК hRV) по ТУ 21.20.23-137-23548172-2020 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2022/18152 от 31.08.2022 · класс риска 2б

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Риновирус нуклеиновая кислота ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 93 контракта, медианная цена за единицу 9 900 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
I
I
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор 
АО «Вектор-Бест»
М.Д. Хусаинов 
2022 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для выявления РНК риновирусов человека методом 
ОТ-ПЦР в режиме реального времени 
«РеалБест-ОРВИ РНК hRV»
ВВЕДЕНИЕ
Острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ) занимают лидирующее место в 
структуре инфекционных болезней человека. Это гетерогенная группа заболеваний, 
этиологическими агентами которых являются различные вирусы, поражающие ткани 
верхних и нижних дыхательньк путей. Заболеваемость ОРВИ носит отчетливый сезонный 
характер с пиком в осенне-зимний период и снижением весной. Распространение вирусов 
происходит чаще всего воздушно-капельным и контактным путями. Основными 
возбудителями ОРВИ у человека являются вирусы гриппа типа А и В, респираторно­
синцитиальный вирус (Human respiratory syncytial virus), метапневмовирус (Human 
metapneumovirus), 4 вида вирусов парагриппа (Human parainfluenza virus 1-4), коронавирусы 
(Human coronavirus 229E, Human coronavirus OC43, Human coronavirus NL63, Human 
coronavirus HKUI), риновирусы (Rhinovirus) видов A, B, C, аденовирусы (Human 
mastadenovirus) и бокавирус (Human bocavirus).
В большинстве случаев ОРВИ протекают со схожими катаральными явлениями 
(насморком, кашлем, болью в горле и др.), признаками общей интоксикации, субфебрильной, 
реже фебрильной лихорадкой. Несмотря на то, что ОРВИ разной этиологии имеют сходные 
клинические проявления, они отличаются вероятностью развития пневмоний и осложнений 
различной локализации, что необходимо учитывать при выборе тактики лечения пациентов.
На сегодняшний момент надежная дифференциальная диагностика возбудителей 
ОРВИ возможна только с применением методов амплификации нуклеиновых кислот. Метод 
полимеразной цепной реакции в реальном времени отличается оперативностью вьтолнения
Инструкция составлена сотрудниками АО  «Вектор-Бест»: Директором по производству  
Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.


--- стр. 2 ---
I
!
исследования, высокой специфичностью и чувствительностью. Он может эффективно 
применяться для:
— раннего назначения специфических средств этиотропной терапии, в том числе для 
избегания неоправданного применения антибактериальных препаратов,
— дифференциальной диагностики с другими инфекционными болезнями,
— своевременной госпитализации больньк,- а также для контроля излеченности и 
коррекции проводимой терапии,
— прогнозирования тяжести течения заболевания, возможных осложнений и исходов 
болезни,
— рационального размещения больных по этиологическому принципу (во избежание 
перекрестного внутрибольничного инфицирования).
Риновирусы человека (hRV) — самые распространенные патогены, вызьшающие 
ОРВИ. Эти РНК-содержащие вирусы относятся к семейству Picomaviridae и принадлежат к 3 
видам: А, В и С. Помимо видов, риновирусы подразделяют на серотипы, которых к 
настоящему времени насчитывается более 150. Поскольку иммунитет, развивающийся после 
заболевания, серотип-специфичен, риновирусной инфекции подвержены люди всех 
возрастов. Вирусы циркулируют в течение всего года с небольшим подъемом в мае и 
значительным пиком в сентябре. В большинстве случаев они вызывают заболевания верхних 
дыхательных путей (ринорею и кашель) с осложнениями в виде синуситов и отитов. Однако 
в редких случаях, при инфицировании отдельными серотипами, могут развиваться 
заболевания нижних дыхательных путей, включая пневмонию.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для выявления РНК риновирусов человека методом ОТ-ПЦР в режиме 
реального времени «РеалБест-ОРВИ РНК hRV» предназначен для качественного выявления 
РНК риновирусов человека (hRV), выделенной из клинических образцов (мазки со слизистой 
носа и задней стенки глотки, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж) методом, основанным на 
обратной транскрипции вирусной РНК с последующей амплификацией кДНК в 
полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией 
продуктов ПЦР в режиме реального времени. Набор реагентов используется при диагностике 
риновирусной инфекции у лиц с симптомами ОРВИ.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода
Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного 
специфического фрагмента кДНК (полученной методом обратной транскрипции из РНК 
hRV), заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг


--- стр. 3 ---
праймеров на комплементарные последовательности, достройка полинуклеотидных 
последовательностей с этих праймеров Taq-полимеразой.
В основе используемого метода регистрации лежит измерение уровня флуоресценции в 
каждом цикле ПЦР. Увеличение уровня флуоресценции происходит благодаря 
использованию специфичного для данной кДНК гибридизационного ДНК-зонда, который в 
ходе реакции связывается с одной из цепей кДНК, обеспечивая также дополнительную 
специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’-конце флуоресцентный краситель, а на 3- 
конце -  гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В 
ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи зонд расщепляется с 5'-конца, благодаря 
5'-3'-нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы и происходит разобщение красителя и 
гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию уровня 
флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества 
образовавщихся специфических ампликонов и динамика нарастания уровня флуоресценции 
определяется исходным количеством РНК возбудителей инфекции в образце.
Учёт эффективности вьщеления НК возбудителей инфекции из образцов клинического 
материала обеспечивается внутренним контрольным образцом (ВКО), который входит в 
состав наборов для вьщеления НК.
2.2. Состав набора:
Компонент набора (сокращение) 
Описание.
Количество
Положительный контрольный образец (ПКО) 
Бесцветная ж идкость, содерж ит натрия азид (0,05%)
1 пробирка, 1 мл
Готовая реакционная смесь для ОТ-ПЦР (ГРС) 
Лиофилизированная
96 пробирок
Оптическая пленка 1,5 листа
2.3. Условия применения.
Аналитические и диагностические характеристики набора были валидированы при 
вьщелении РНК из клинических образцов (мазки со слизистой носа и задней стенки глотки, 
мокрота, бронхоальвеолярный лаваж) с использованием наборов: «РеалБест экстракция 100», 
«РеалБест УниМаг» и «РеалБест Сорбитус» производства АО «Вектор-Бест».
Набор применяется с регистрирующими амплификаторами планшетного типа: 
«CFX96» (фирма Bio-Rad, США); «ДТпрайм» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).
Набор рассчитан на проведение анализа 96 образцов, включая контрольные образцы.
Показания к применению.
Набор реагентов используется при диагностике риновирусной инфекции у лиц с 
симптомами ОРВИ.
Противопоказаний к применению медицинского изделия нет (не применимо).


--- стр. 4 ---
I
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Аналитическая чувствительность:
За аналитическую чувствительность принята величина концентрации целевой НК, для 
которой при экспериментальной проверке на двух сериях набора на 32 повторах для каждой 
серии и каждого из заявленных амплификаторов и наборов для выделения НК был получен 
положительный результат в 100% случаев.
Набор гарантированно выявляет РНК hRV в концентрации 25 копий в ПЦР-пробе 
(соответствует 1x10^ копий/мл исходного образца при использовании для выделения РНК 
наборов «РеалБест экстракция 100», «РеалБест УниМаг» или «РеалБест Сорбитус»), что 
подтверждается при выпуске каждой серии набора реагентов тестированием образцов, 
приготовленных из стандартного образца предприятия с соответствующим содержанием 
вирусной НК.
3.2. Аналитическая специфичность:
Был проведен in silico анализ последовательностей праймеров и зондов по базам 
последовательностей вирусов (грипп А и В, парагрипп 1, 2, 3 и 4 типов, аденовирусы, 
бокавирусы, метапневмовирусы, респираторно-синцитиальные вирусы и коронавирусы hCoV 
NL63, hCoV ОС43, hCoV 229Е, hCoV HKUl, SARS-CoV-2) и микроорганизмов 
(Chlamydophila pneumoniae, M ycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Streptococcus  
pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes. Streptococcus agalactiae.  
Staphylococcus aureus. Staphylococcus spp, Streptococcus spp, Prevotella spp, Leptotrichia spp,  
Corynebacterium spp, Neisseria spp),  которые могут присутствовать в респираторном тракте 
человека. Возможность перекрестных реакций исключена.
Аналитическая специфичность выявления РНК риновирусов человека (hRV) была 
подтверждена отсутствием перекрестных ложноположительных сигналов при анализе 
образцов от больных с острыми респираторными инфекциями иной этиологии (вирусы 
гриппа типа А и В, респираторно-синцитиальный вирус (Human respiratory syncytial virus), 
метапневмовирус (Human metapneumovirus), 4 вида вирусов парагриппа (Human parainfluenza 
virus 1-4), коронавирусы (Human coronavirus 229E, Human coronavirus OC43, Human 
coronavirus NL63, Human coronavirus HKUl,  SARS-CoV-2), аденовирусы (Human 
mastadenovirus) и бокавирус (Human bocavirus)).
В рамках международной системы контроля качества QCMD (Quality Control for 
Molecular Diagnostics, Великобритания) при анализе респираторных панелей (QCMD 2021 
Respiratory I EQA Programme, QCMD 2021 Respiratory II EQA Programme, QCMD 2021 
Respiratory III EQA Programme) показано наличие специфических сигналов в образцах, 
содержащих риновирус и отсутствие неспецифических реакций в образцах содержащих


--- стр. 5 ---
прочие респираторные патогены (грипп А и В, респираторный синцитиальный вирус, 
аденовирус, вирус парагриппа, коронавирус, метапневмовирус, энтеровирус, Legionella 
pneumophila. Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenza. Mycoplasma pneumonia, 
Bordetella pertussis), что подтверждено Сертификатом QCMD (Quality Control for Molecular 
Diagnostics, Великобритания).
3.3. Диагностическая чувствительность выявления РНК риновирусов человека (hRV): 
клинические испытания, проведенные на 47 положительных образцах (мазки со слизистой 
носа и задней стенки глотки, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж), содержащих РНК hRV, 
показали 100 % чувствительность (интервал 92,5 % - 100 %, с доверительной вероятностью
95 %);
3.4. Диагностическая специфичность выявления РНК риновирусов человека (hRV): 
клинические испытания, проведенные на 123 отрицательных образцах (мазки со слизистой 
носа и задней стенки глотки, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж), не содержащих РНК 
hRV, показали 100 % специфичность (интервал 97,1 % - 100 %, с доверительной 
вероятностью 95 %);
3.5. Воспроизводимость результатов:
При тестировании в двух независимых постановках двумя разными операторами на 
двух сериях набора образцов в 8 повторах каждый внутрипостановочная, межпостановочная, 
внутрисерийная и межсерийная воспроизводимость, межлабораторная воспроизводимость 
результатов составила 100 %. Коэффициент вариации Ct не более 4 %.
3.6. Потенциально интерферирующие вещества.
В клинических испытаниях показано отсутствие влияния потенциально 
интерферирующих веществ (кровь до 5% и муцин до 5 %) в клинических образцах (мазки со 
слизистой носа и задней стенки глотки, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж) на результаты 
анализа.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора -  класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012 
№ 4н).
4.2. Лаборатории, выполняющие исследования по выявлению НК возбудителей 
респираторных инфекций, обязаны обеспечить безопасность работы в соответствии с 
требованиями законодательства в сфере санитарно-эпидемиологического благополучия.
Набор предназначен для профессионального применения в клинической лабораторной 
диагностике. К работе с набором допускается только специально обученный персонал с 
высшим или средним медицинским, или биологическим образованием, прошедший 
подготовку на лицензированных курсах первичной специализации по работе с патогенными


--- стр. 10 ---
8.1.3. В каждом исследуемом образце программа должна фиксировать нарастание 
сигнала амплификации кДНК ВКО (канал «РАМ») и определять Ct ВКО.
8.2. Учёт результатов.
8.2.1 Вычислить (Ct ВКО)ср как среднее значение Ct ВКО всех анализируемых 
образцов (включая ПКО и ОКО). Отбраковке подлежат значения Ct ВКО, отличающиеся 
более чем на 2 от значения (Ct ВКО)ср. После отбраковки пересчитать (Ct ВКО)ср для 
оставшихся значений.
8.2.2. Анализируемый образец считается отрицательным (не содержащим РНК hRV), 
если для этого образца значение Ct по каналу «КОХ» не определяется.
Если для такого образца значение Ct ВКО превьппает значение (Ct ВКО)ср более чем 
на 2, то результат по данному образцу не подлежит анализу и учету как отрицательный. 
Необходимо провести повторный анализ данного образца, начиная с этапа выделения РНК.
8.2.3. Анализируемый образец считается положительным, т.е. содержащим РНК hRV, 
если для этого образца значение Ct по каналу «КОХ» меньше или равно 40.
Если для анализируемого образца определяется Ct больше 40, результат следует 
считать неопределенным, рекомендуется проведение дополнительных исследований 
(исследование вновь забранного материала или исследование с использованием другого 
набора реагентов).
8.2.4. В случае контаминации все положительные результаты по данной 
индивидуальной постановке ПЦР считаются недостоверными. Требуется предпринять меры 
по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить анализ всех образцов 
данной постановки, для которых получен положительный результат. Образцы данной 
постановки, анализ которых дал отрицательный результат, следует учитывать, как 
отрицательные.
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых 
транспортных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на 
транспорте данного вида, при температуре (2-8) ®С. Допускается транспортирование при 
температуре до 26 °С не более 10 суток.
9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться 
при температуре (2-8) ®С в течение всего срока годности в холодильных камерах или 
холодильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной 
регистрацией температуры.
9.3. Срок годности набора -  12 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение 
наборов по истечении срока их годности.
10


--- стр. 11 ---
9.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции 
по применению набора.
9.5. Изделие не требует технического обслуживания и не подлежит ремонту.
10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
10.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям 
нормативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, 
возникших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и 
хранения, либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и 
функциональные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют 
нормативной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием 
скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест-ОРВИ РНК hRV», следует 
обращаться в АО «Вектор-Бест» по адресу:
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492,
тел.: (383) 252-51-62,227-60-30; тел./факс: (383) 252-51-81, 252-51-77;
E-mail: plkobtkQ.vector-best. ru
Консультацию специалиста по работе с набором можно получить по тел.: (383) 252-51-75.
Начальник отделения 
производства ПЦР-наборов 
АО «Вектор-Бест» А.В. Трухина
Директор по производству 
АО «Вектор-Бест» В.К. Ткачев
Директор клинических исследований 
и дополнительных сервисов Дирекции 
ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО» 
м.п.
11


--- стр. 12 ---
Прошито в количестве листов
года
Директор клинических исследований и 
дополнительных сервисов Дирмци 
ООО «Независима лабор
Я. Э. Новикова