Набор реагентов для дифференциального выявления РНК вирусов гриппа А и В методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени (РеалБест-ОРВИ РНК Influenza virus A/B) по ТУ 21.20.23-133-23548172-2020 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2022/18189 от 07.09.2022 · класс риска 2б

Производитель: АО "Вектор-Бест" (Россия)

Вид изделия: Вирус гриппа А/В нуклеиновая кислота ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 295 контрактов, медианная цена за единицу 19 342 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ» 
Генеральный директор
по применению набора реагентов для дифференциального выявления РНК вирусов 
гриппа А и В методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени 
«РеалБест-ОРВИ РНК Influenza virus A/В»
I
ВВЕДЕНИЕ
Острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ) занимают лидирующее место в 
структуре инфекционных болезней человека. Это гетерогенная группа заболеваний, 
этиологическими агентами которых являются различные вирусы, поражающие ткани 
верхних и нижних дыхательных путей. Заболеваемость ОРВИ носит отчетливый сезонный 
характер с пиком в осенне-зимний период и снижением весной. Распространение вирусов 
происходит чаще всего воздушно-капельным и контактным путями. Основными 
возбудителями ОРВИ у человека являются вирусы гриппа типа А и В, респираторно­
синцитиальный вирус (Human respiratory syncytial virus), метапневмовирус (Human 
metapneumovirus), 4 вида вирусов парагриппа (Human parainfluenza virus 1-4), коронавирусы 
(Human coronavirus 229E, Human coronavirus OC43, Human coronavirus NL63, Human 
coronavirus HKUI), риновирусы (Rhinovirus) видов A, B, C, аденовирусы (Human 
mastadenovirus) и бокавирус (Human bocavirus).
В большинстве случаев ОРВИ протекают со схожими катаральными явлениями 
(насморком, кашлем, болью в горле и др.), признаками общей интоксикации, субфебрильной, 
реже фебрильной лихорадкой. Несмотря на то, что ОРВИ разной этиологии имеют сходные 
клинические проявления, они отличаются вероятностью развития пневмоний и осложнений 
различной локализации, что необходимо учитывать при выборе тактики лечения пациентов.
На сегодняшний момент надежная дифференциальная диагностика возбудителей 
ОРВИ возможна только с применением методов амплификации нуклеиновых кислот. Метод
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: Директором по производству  
Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.


--- стр. 2 ---
полимеразной цепной реакции в реальном времени отличается оперативностью выполнения 
исследования, высокой специфичностью и чувствительностью. Он может эффективно 
применяться для:
— раннего назначения специфических средств этиотропной терапии, в том числе для 
избегания неоправданного применения антибактериальных препаратов,
— дифференциальной диагностики с другими инфекционными болезнями,
— своевременной госпитализации больньк, а также для контроля излеченности и 
коррекции проводимой терапии,
— прогнозирования тяжести течения заболевания, возможных осложнений и исходов 
болезни,
— рационального размещения больных по этиологическому принципу (во избежание 
перекрестного внутрибольничного инфицирования).
Вирусы гриппа - широко распространенные в природе РНК-содержащие вирусы 
семейства Orthomyxoviridae. Они занимают ведущее место среди инфекций дыхательных 
путей. Вирусы гриппа видов А и В вызывают ежегодные эпидемические вспышки в зимний 
период, охватывающие 5-20% населения всех возрастных категорий. Особенностью вируса 
является быстрая изменчивость его антигенных компонентов, поэтому вырабатывающийся 
после болезни иммунитет не защищает от повторного заражения изменившимся штаммом. 
Заболевание начинается с резкого подъема температуры, сухого кашля или першения в горле 
и сопровождается симптомами общей интоксикации. У 10-15% заболевших грипп 
приобретает тяжелое течение с поражением нижних дыхательных путей, развитием 
пневмонии и признаками дыхательной недостаточности. Также при тяжелых формах может 
присоединяться вторичная бактериальная инфекция.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для дифференциального выявления РНК вирусов гриппа А и В 
методом ОТ-ГЩР в режиме реального времени «РеалБест-ОРВИ РНК Influenza virus A/В» 
предназначен для качественного дифференциального выявления РНК вирусов гриппа А (infl. 
А) и В (infl. В), выделенной из клинических образцов (мазки со слизистой носа и задней 
стенки глотки, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж), методом, основанным на обратной 
транскрипции вирусной РНК с последующей амплификацией кДНК в полимеразной цепной 
реакции (ОТ-ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме 
реального времени. Набор реагентов используется при диагностике инфекции гриппа А и В у 
лиц с симптомами ОРВИ.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА


--- стр. 3 ---
I
2.1. Принцип метода.
Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранных 
специфических фрагментов кДНК (полученных методом обратной транскрипции из РНК infl. 
А и infl. В, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг 
праймеров на комплементарные последовательности, достройка полинуклеотидных 
последовательностей с этих праймеров Taq-полимеразой.
В основе используемого метода регистрации лежит измерение уровня флуоресценции 
в каждом цикле ПЦР. Увеличение уровня флуоресценции происходит благодаря 
использованию специфичного для данной кДНК гибридизационного ДНК-зонда, который в 
ходе реакции связывается с одной из цепей кДНК, обеспечивая также дополнительную 
специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5'-конце флуоресцентный краситель, а на 3'- 
конце -  гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В 
ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи зонд расщепляется с 5'-конца, благодаря 
5-3'-нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы и происходит разобщение красителя и 
гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию уровня 
флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества 
образовавшихся специфических ампликонов, и динамика нарастания уровня флуоресценции 
определяется исходным количеством РНК возбудителей инфекции в образце.
Учёт эффективности выделения НК возбудителей инфекции из образцов 
клинического материала обеспечивается внутренним контрольным образцом (ВКО), который 
входит в состав наборов для выделения НК.
2.2. Состав набора:
Компонент набора (сокращение) 
Описание.
Количество
Положительный контрольный образец (ПКО) 
Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05%)
1 пробирка, 
1 мл
Готовая реакционная смесь для ОТ-ПЦР (ГРС) 
Лиофилизированная
96 пробирок
Оптическая пленка 1,5 листа
2.3. Условия применения.
Аналитические и диагностические характеристики набора были валидированы при 
выделении РНК из клинических образцов (мазки со слизистой носа и задней стенки глотки, 
мокрота, бронхоальвеолярный лаваж) с использованием наборов: «РеалБест экстракция 100», 
«РеалБест УниМаг» и «РеалБест Сорбитус» производства АО «Вектор-Бест».
Набор применяется с регистрирующими амплификаторами планшетного типа: 
«CFX96» (фирма Bio-Rad, США); «ДТпрайм» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).


--- стр. 4 ---
Набор рассчитан на проведение анализа 96 образцов, включая контрольные образцы.
Показания к применению.
Набор реагентов используется при диагностике инфекции гриппа А и В у лиц с 
симптомами ОРВИ.
Противопоказаний к применению медицинского изделия нет (не применимо).
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ*
3.1. Аналитическая чувствительность:
За аналитическую чувствительность принята величина концентрации целевой НК, для 
которой при экспериментальной проверке на двух сериях набора на 32 повторах для каждой 
серии и каждого из заявленных амплификаторов и наборов для выделения НК был получен 
положительный результат в 100% случаев.
Набор гарантированно выявляет РНК infl. А и infl. В в концентрации 25 копий в ПЦР- 
пробе (соответствует 1x10^ копий/мл исходного образца при использовании для выделения 
РНК наборов «РеалБест экстракция 100», «РеалБест УниМаг» или «РеалБест Сорбитус»), что 
подтверждается при выпуске каждой серии набора реагентов тестированием образцов, 
приготовленных из стандартного образца предприятия с соответствующим содержанием 
вирусной НК.
3.2. Аналитическая специфичность:
Был проведен in silico анализ последовательностей праймеров и зондов по базам 
последовательностей вирусов (парагрипп 1, 2, 3 и 4 типов, аденовирусы, бокавирусы, 
метапневмовирусы, респираторно-синцитиальные вирусы, риновирусы и коронавирусы 
hCoV NL63, hCoV ОС43, hCoV 229Е, hCoV HKUl, SARS-CoV-2) и микроорганизмов 
{Chlamydophila pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Streptococcus  
pneumoniae, Haemophilus influenzae. Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae.  
Staphylococcus aureus. Staphylococcus spp. Streptococcus spp, Prevotella spp, Leptotrichia spp,  
Corynebacterium spp, Neisseria spp),  которые могут присутствовать в респираторном тракте 
человека. Возможность перекрестных реакций исключена.
Аналитическая специфичность дифференциального выявления РНК вирусов гриппа А 
(infl. А) и В (infl. В) была подтверждена отсутствием перекрестных ложноположительных 
сигналов при анализе образцов от больных с острыми респираторными инфекциями иной 
этиологии (респираторно-синцитиальный вирус (Human respiratory syncytial virus), 
метапневмовирус (Human metapneumovirus), 4 вида вирусов парагриппа (Human parainfluenza 
virus 1-4), коронавирусы (Human coronavirus 229E, Human coronavirus OC43, Human 
coronavirus NL63, Human coronavirus HKUl, SARS-CoV-2), риновирусы (Rhinovirus), 
аденовирусы (Human mastadenovirus) и бокавирус (Human bocavirus)).


--- стр. 5 ---
f
в рамках международной системы контроля качества QCMD (Quality Control for 
Molecular Diagnostics, Великобритания) при анализе респираторных панелей (QCMD 2021 
Respiratory I EQA Programme, QCMD 2021 Respiratory II EQA Programme, QCMD 2021 
Respiratory III EQA Programme) показано наличие специфических сигналов в образцах, 
содержащих вирусы гриппа А и В, отсутствие неспецифических реакций в образцах 
содержащих прочие респираторные патогены (респираторный синцитиальный вирус, 
аденовирус, вирус парагриппа, коронавирус, метапневмовирус, риновирус, энтеровирус, 
Legionella pneumophila, Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenza, Mycoplasma 
pneumonia, Bordetella pertussis), что подтверждено Сертификатом QCMD (Quality Control for 
Molecular Diagnostics, Великобритания).
3.3. Диагностическая чувствительность дифференциального выявления РНК вируса 
гриппа А (infl. А): клинические испытания, проведенные на 49 положительных образцах 
(мазки со слизистой носа и задней стенки глотки, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж), 
содержащих РНК infl. А, показали 100 % чувствительность (интервал 92,8 % - 100 %, с 
доверительной вероятностью 95 %);
Диагностическая чувствительность дифференциального выявления РНК вируса гриппа 
В (infl. В): клинические испытания, проведенные на 47 положительных образцах (мазки со 
слизистой носа и задней стенки глотки, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж), содержащих 
РНК infl. В, показали 100 % чувствительность (интервал 92,5 % - 100 %, с доверительной 
вероятностью 95 %);
3.4. Диагностическая специфичность дифференциального выявления РНК вируса 
гриппа А (infl. А): клинические испытания, проведенные на 165 отрицательных образцах 
(мазки со слизистой носа и задней стенки глотки, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж), не 
содержащих РНК infl. А, показали 100 % специфичность (интервал 97,8 % - 100 %, с 
доверительной вероятностью 95 %);
Диагностическая специфичность дифференциального выявления РНК вируса гриппа В 
(infl. В): клинические испытания, проведенные на 167 отрицательных образцах (мазки со 
слизистой носа и задней стенки глотки, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж), не 
содержащих РНК infl. В, показали 100 % специфичность (интервал 97,8 % - 100 %, с 
доверительной вероятностью 95 %).
3.5. Воспроизводимость результатов:
При тестировании в двух независимых постановках двумя разными операторами на 
двух сериях набора образцов в 8 повторах каждый внутрипостановочная, межпостановочная, 
внутрисерийная и межсерийная воспроизводимость, межлабораторная воспроизводимость 
результатов составила 100 %. Коэффициент вариации Ct не более 4 %.


--- стр. 10 ---
I
I
7.10. При использовании в КДЛ лабораторной информационной системы (ЛИС) 
применяется вкладыш со штрих-кодом как идентификатор анализа.
8. АНАЛИЗ И УЧЁТ РЕЗУЛЬТАТОВ
8.1. Условия анализа и учёта результатов.
8.1.1. В ПКО программа должна фиксировать:
-  нарастание сигнала амплификации кДНК ВКО (канал «РАМ») и определять 
значение порогового цикла Ct ВКО;
-  нарастание сигнала амплификации кДНК infl. А (канал «КОХ») и определять 
значение порогового цикла Ct ПКО;
-  нарастание сигнала амплификации кДНК infl. В (канал «НЕХ») и определять 
значение порогового цикла Ct ПКО.
8.1.2. В ОКО программа должна фиксировать нарастание сигнала амплификации 
кДНК ВКО (канал «РАМ») и определять Ct ВКО, при этом программа не должна 
регистрировать нарастания сигнала специфического продукта амплификации по каналам 
«КОХ» и «НЕХ» с Ct меньше или равно 40.
Если для ОКО определяется значение Ct по каналу «КОХ» или «НЕХ» с Ct меньше 
40, то это свидетельствует о наличии контаминации (см. п. 8.2.4).
8.1.3. В каждом исследуемом образце программа должна фиксировать нарастание 
сигнала амплификации кДНК ВКО (канал «РАМ») и определять Ct ВКО.
8.2. Учёт результатов.
8.2.1. Вычислить (Ct ВКО)ср как среднее значение Ct ВКО всех анализируемых 
образцов (включая ПКО и ОКО). Отбраковке подлежат значения Ct ВКО, отличающиеся 
более чем на 2 от значения (Ct ВКО)ср. После отбраковки пересчитать (Ct ВКО)ср для 
оставшихся значений.
8.2.2. Анализируемый образец считается отрицательным (не содержащим РНК infl. А 
и infl. В), если для этого образца значения Ct по каналам «КОХ» и «НЕХ» не определяются.
Если для такого образца значение Ct ВКО превышает значение (Ct ВКО)ср более чем 
на 2, то результат по данному образцу не подлежит анализу и учёту как отрицательный. 
Необходимо провести повторный анализ данного образца, начиная с этапа выделения РНК.
8.2.3. Анализируемый образец считается положительным (содержащим РНК infl. А), 
если для этого образца значение Ct по каналу «КОХ» меньше или равно 40. Анализируемый 
образец считается положительным (содержащим РНК infl. В), если для этого образца 
значение Ct по каналу «НЕХ» меньше или равно 40.
Если для анализируемого образца определяется Ct больше 40, результат следует 
считать неопределенным, рекомендуется проведение дополнительных исследований
10


--- стр. 11 ---
(исследование вновь забранного материала или исследование с использованием другого 
набора реагентов).
8.2.4. В случае контаминации все положительные результаты по данной 
индивидуальной постановке ПЦР считаются недостоверными. Требуется предпринять меры 
по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить анализ всех образцов 
данной постановки, для которых получен положительный результат. Образцы данной 
постановки, анализ которых дал отрицательный результат, следует учитывать, как 
отрицательные.
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых 
транспортных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на 
транспорте данного вида, при температуре (2-8) ®С. Допускается транспортирование при 
температуре до 26 °С не более 10 суток.
9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться 
при температуре (2-8) ®С в течение всего срока годности в холодильных камерах или 
холодильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной 
регистрацией температуры.
9.3. Срок годности набора -  12 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение 
наборов по истечении срока их годности.
9.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение 
инструкции по применению набора.
9.5. Изделие не требует технического обслуживания и не подлежит ремонту.
10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
10.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям 
нормативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, 
возникших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и 
хранения, либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и 
функциональные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют 
нормативной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием 
скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест-ОРВИ РНК Influenza virus 
A/В», следует обращаться в АО «Вектор-Бест» по адресу:
11


--- стр. 12 ---
0
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492,
тел.: (383) 252-51-62, 227-60-30; тел./факс: (383) 252-51-81, 252-51-77;
E-mail: plkobtk(a).vector-best. ru
Консультацию специалиста по работе с набором можно получить по тел.: (383) 252-51-75.
Начальник отделения 
производства ПЦР-наборов 
АО «Вектор-Бест»
Директор по производству 
АО «Вектор-Бест»
Директор клинических исследований 
и дополнительных сервисов Дирекции 
ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО» 
м.п.
А.В. Трухина
' В.К. Ткачев
Я.Э. Новикова
12