Набор реагентов для выявления возбудителей вирусных кишечных инфекций методом ПЦР АмплиСенс® ОКИ виро-скрин-FL по ТУ 21.20.23-276-01897593-2017 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2021/13776 от 24.03.2021 · класс риска 2б

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

Вид изделия: Множественные желудочно-кишечные патогены нуклеиновые кислоты ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 124 контракта, медианная цена за единицу 23 211 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
I
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного 
учреждения науки «Центральный 
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» 
службы по надзору 
прав потребителе^ 
человека
Федеральной 
фере защиты 
благополучия
'Г. Акимкин
20 / Л ,
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для выявления возбудителей  
вирусных кишечных инфекций методом ПЦР
АмплиСенс® ОКИ виро-скрин-РЬ
АмплиСенс
mJ
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии 
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123, 
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА 
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА, стр, 6 
тел. (495) 974 9642, e-mail; amplisens@pcr.ru I V D


--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.............................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ.................................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА......................................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ..........................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ...................................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ...........................................................................10
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ...............................................................................................11
СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ.................................................................................................13
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ..................................................13
ВЗЯТИЕ. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 14
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК/РНК .................17
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА...............................................................................................18
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ..................................................................................20
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК/РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ ...............................................20
ФОРМА 1: «ПЦР-комплект» вариант ГРТ-50 Р ....................................................................22
СОСТАВ....................................................................................................................................22
РЕАКЦИЯ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ РНК И АМПЛИФИКАЦИЯ ДНК/кДНК С 
ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ..................................................22
A. Подготовка проб для ОТ-ПЦР...................................................................................23
Б. Проведение ОТ-ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» ................24
B. Анализ и интерпретация результатов.........................................................................25
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ .......................29
СИМВОЛЫ. ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ............................................31
ПРИЛОЖЕНИЕ 1..........................................................................................................................32
стр. 2 из 32


--- стр. 3 ---
с п и с о к  СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ГЭ - геномный эквивалент (геном)
ДНК -дезоксирибонуклеиновая кислота
кДНК - комплементарная ДНК, получаемая в реакции обратной 
транскрипции на матрице РНК
К+ - положительный контроль ОТ-ПЦР
К- - отрицательный контроль ОТ-ПЦР
МУ - методические указания
ок - отрицательный контроль экстракции
око - отрицательный контрольный образец
ОТ-ПЦР - полимеразная целная реакция с обратной транскрипцией
по - программное обеспечение
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
РУ - регистрационное удостоверение
СанПиН - санитарные правила и нормы
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный 
научно-исследовательский институт эпидемиологии» 
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав 
потребителей и благополучия человека
FL - ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
PBS - фосфатно-солевой буфер
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов АмплиСенс® ОКИ виро-скрин-FL  
предназначен для качественного определения и  
дифференциации РНК ротавирусов грулпы А {Rotavirus  А),  
норовирусов 1 и 2 геногруппы {Norovirus  GI и GII), астровирусов  
(Astrovirus)  и ДНК аденовирусов группы F {Adenovirus  F) в  
биологическом материале (фекалии) и объектах окружающей  
среды (концентраты образцов воды) методом ПЦР с  
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов  
амплификации. Материалом для проведения ОТ-ПЦР служат  
пробы ДНК/РНК, экстрагированной из исследуемого материала.
Показания и противопоказания к применению набора  
реагентов
Набор реагентов используется в клинической лабораторной  
диагностике для исследования биологического материала,  
полученного от лиц с подозрением на кишечную инфекцию вне
стр. 3 из 32


--- стр. 5 ---
кДНК ВК0-Р1. Результаты амплификации ДНК/кДНК  
выявляемых вирусов, а также кДНК ВКО-Р1 регистрируются по  
каналам флуоресцентной детекции, указанным в табл. 1:
Таблица 1
Канал для  
флуорофора FAM JOE ROX Су5 Су5.5
ДНК/кДНК-
мишень
кДНК
ротавирусов 
группы А
{Rotavirus  А)
кДНК
норовирусов 1 
и 2 геногруппы 
{Norovirus  
GI hGII)
ДНК
аденовирусов 
группы F 
{Adenovirus  F)
кДНК BKO-FL
кДНК
астровирусов
{Astrovirus)
Область
амплификации NSP2 genes for capsid 
proteins hexon
искусственная
нуклеотидная
последова­
тельность
gene for capsid 
protein
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант РРТ-50 Р
Форма 1 предназначена для проведения обратной  
транскрипции РНК и амплификации ДНК/кДНК с  
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме  
«реального времени» и позволяет выявлять ДНК/РНК в  
качественном формате. Для проведения полного ПЦР-  
исследования необходимо использовать комплекты реагентов  
для экстракции ДНК/РНК.
Форма 1 рассчитана на проведение 55 реакций обратной  
транскрипции и амплификации, включая контроли.
стр. 5 из 32


--- стр. 6 ---
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие  
характеристики:
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Таблица 2
Микроорганизм
Вид
исследуемого
материала
Комплект
для
экстракции
ДНК/РНК
Комплект для 
амплификации
Аналитическая
чувствительность
(предел
обнаружения),
ГЭ/мл^
Ротавирусы 
группы А 
{Rotavirus  А)
фекалии
«РИБО-
преп»
«ПЦР-комплект» 
вариант РКТ-50 Р
1x10^
концентраты 
образцов воды 5x103
Норовирусы 1 и 
2 геногруппы 
{Norovirus  GI и 
G1I)
фекалии «ПЦР-комплект» 
вариант РРТ-50 Р
5x103
концентраты 
образцов воды 1x103
Астровирусы
{Astrovirus)
фекалии «ПЦР-комплект» 
вариант РРТ-50 Р
1x10^
концентраты 
образцов воды 5x103
Аденовирусы 
группы F 
{Adenovirus  F)
фекалии «ПЦР-комплект» 
вариант РРТ-50 Р
1x1 O'*
концентраты 
образцов воды 5x103
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении  
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и  
хранение исследуемого материала» и «Подготовка  
исследуемого материала к экстракции ДНК/РНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает участки ДНК/РНК заявленных  
микроорганизмов: норовирусы 1 и 2 геногруппы {Norovirus  GI,  
Norovirus  Gil), ротавирусы группы А {Rotavirus  А) (ротавирусы  
различных [P]G типов), астровирусы {Astrovirus),  аденовирусы  
группы F {Adenovirus  F) (клинические изоляты, специфичность  
подтверждена методом прямого секвенирования нуклеотидных  
последовательностей).
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана  
при исследовании ДНК/РНК следующих микроорганизмов:
1. РНК энтеровирусов человека (представители разных  
генетических кластеров - Human echovirus  2, 6, 9,11,14,16,17,
■ ' Количество геномных эквивалентов микроорганизма (ГЭ) в 1 мл образца исследуемого 
материала.
стр. 6 из 32


--- стр. 7 ---
18, 30; Human coxsackievirus  A6, A9, В4, В5 (клинические  
изоляты, видовая принадлежность подтверждена методом  
прямого секвенирования нуклеотидных
последовательностей), Human poliovirus  1, 2, 3 (вакцинные  
штаммы)) в концентрации не менее 1x1 O'* ГЭ/мл;
2. РНК вирусов гриппа А (H3N2 (NCBI:txid2029290), H1N1  
(NCBI:txid1898984)) и В, риновирусов, RS вирусов, ДНК  
аденовирусов человека-3  типа (ОепВапк: FJ 167580.1), 5 типа  
(GenBank: FJ167596.1), 7 типа (GenBank: KU361344.1), 37  
типа (GenBank: AY048776.1) в концентрации не менее  
IxlO“ * ГЭ/мл (клинические изоляты, видовая принадлежность  
подтверждена методом прямого секвенирования  
нуклеотидных последовательностей);
3. штаммы из коллекции АТСС® (American Туре Culture  
Collection, США) в концентрации не менее 1x10® ГЭ/мл:  
Acinetobacter baumannii  АТСС® 19606™, Bacteroides fragilis  
АТСС® 25285™, Bordetella bronchiseptica  АТСС® 10580™,  
Bordetella bronchiseptica  АТСС® 4617™, Bordetella pertussis  
ATCC® 9340™, Candida albicans  ATCC® 14053™, Candida  
guilliermondii  ATCC® 6260™, Candida krusei  ATCC® 14243™,  
Clostridium difficile  ATCC® 9689'^'^, Clostridium septicum  ATCC® 
12464™, Corynebacterium jeikeium  ATCC® 43734™,  
Corynebacterium xerosis  ATCC® 373™, Eggerthella lenta  
(Eubacterium lentum)  ATCC® 43055™, Enterobacter aerogenes  
ATCC® 13048™, Enterobacter cloacae  ATCC® 13047™,  
Enterococcus faecalis  ATCC® 29212™, Enterococcus faecalis  
(vancomycin resistant)  ATCC® 51299'^'^, Enterococcus faecium  
ATCC® 35667™, Erysipelothrix rhusiopathiae  ATCC® 19414™,  
Escherichia coli  ATCC® 25922™, Escherichia coli  ATCC®  
35218™, Gardnerella vaginalis ATCC®  14018™, Haemophilus  
influenzae  ATCC® 33930™, Haemophilus Influenzae  ATCC®  
9006™, Haemophilus influenzae  ATCC® 10211™, Haemophilus  
parainfluenzae  ATCC® 7901™, Klebsiella oxytoca  ATCC®  
49131™, Klebsiella pneumoniae  ATCC® 27736™, Listeria grayi  
(murrayi)  ATCC® 25401™, Listeria innocua  ATCC® 33090™,  
Listeria monocytogenes ATCC® 7644™ , Moraxella (Branhamella)  
catarrhalls  ATCC® 25238™, Moraxella (Branhamella) catarrhalis  
ATCC® 8176™, Neisseria meningitidis  ATCC® 13102™,  
Neisseria meningitidis  ATCC® 13090™, Neisseria lactamica
стр. 7 из 32


--- стр. 9 ---
концентрациями 1х10^ГЭ/мл каждого, в качестве  
отрицательного образца был использован реагент ОКО.
Условия повторяемости включали в себя тестирование в  
одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с  
использованием одного и того же оборудования в пределах  
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости -  
тестирование в разных лабораториях, разными операторами, в  
разные дни, на различных приборах и разных серий набора  
реагентов.
Результаты представлены в табл. 3
Таблица 3
Образцы
Повторяемость Воспроизводимость
Количество
образцов
Совпадение
результатов,
%
Количество
образцов
Совпадение
результатов,
%
Norovirus  GI 10 100 30 100
Norovirus  Gil 10 100 30 100
Rotavirus  A 10 100 30 100
Astrovirus 10 100 30 100
Adenovirus  F 10 100 30 100
Отрицательные 10 100 30 100
стр. 9 из 32


--- стр. 10 ---
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Таблица 4
Результаты тестирования набора реагентов  
АмплиСенс® ОКИ виро-скрин-РЬ в сравнении с  
референтным методом
Тип образцов Результаты применения  
АмплиСенс® ОКИ вирО'Скрин-РЬ
Результаты применения  
ре^рентного метода^
положительных отрицательны
X
Фекалии
Всего
исследовано
660
образцов
Rotavirus  А
положительных 201 8
отрицательных 3 448
Norovirus  GI
положительных 113 0
отрицательных 0 547
Norovirus  Gil
положительных 192 2
отрицательных 1 465
Astrovirus
положительных 138 9
отрицательных 0 513
Adenovirus  F
положительных 115 1
отрицательных 7 537
Концентраты
образцов
воды
Всего
исследовано
357
образцов
Rotavirus  A
положительных 104 0
отрицательных 0 162
Norovirus  GI
положительных 91 0
отрицательных 0 162
Norovirus  Gll
положительных 104 0
отрицательных 0 162
Astrovirus
положительных 104 0
отрицательных 0 162
Adenovirus  P
положительных 104 0
отрицательных 0 162
Были использованы:
626 образцов фекалий от пациентов с острыми кишечными  
инфекциями (из очагов групповой заболеваемости и  
спорадических случаев кишечных инфекций);
34 образца фекалий, отрицательных по содержанию  
вирусных патогенов, получены от пациентов с острыми  
кишечными инфекциями в период 2009-2015 гг.;
91 модельный образец концентратов воды,  
контаминированный стандартным образцом предприятия,  
содержащим РНК Norovirus  С1 в концентрации 5x10^ ГЭ/мл и  
1x10^ ГЭ/мл;
104 модельных образца концентратов воды,  
контаминированных стандартным образцом предприятия.
2 В качестве референтного метода использовался набор реагентов «АмплиСенс® ОКИ-скрин- 
Р1» (РУ № ФСР 2008/02265).
стр. 10 из 32


--- стр. 11 ---
содержащим РНК Norovirus  Gil в концентрации 5x10^ ГЭ/мл и  
1x10^ ГЭ/мл, РНК Rotavirus  А, Astrovirus  и ДНК Adenovirus  F в 
концентрации 1x10'* ГЭ/мл и 5x10^ ГЭ/мл каждого;
162 модельных образца концентратов воды, не содержащих  
РНК Rotavirus  А, Norovirus  GI, GII, Astrovirus,  
ДНК Adenovirus  F.
Таблица 5
Диагностические характеристики набора реагентов
Выявляемый
патоген
Вид
исследуемого
материала
Диагностическая 
чувствительность^ 
(с доверительной 
вероятностью 95 %)
Диагностическая
специфичность"^
(с доверительной 
вероятностью 95 %)
Rotavirus  А
Фекалии 98,5 (96,8-100)% 98,25 (97,0-100)%
Концентраты 
образцов воды 100 (97,2-100)% 100 (98,2-100)%
Norovirus  GI
Фекалии 100 (97,4-100)% 100 (99,5-100)%
Концентраты 
образцов воды 100 (96,8-100)% 100 (98,2-100)%
Norovirus  GII
Фекалии 99,48 (98,5-100)% 99,57 (99,0-100)%
Концентраты 
образцов воды 100 (97,2-100)% 100 (98,2-100)%
Astrovirus
Фекалии 100 (98,0-100)% 98,28 (97,2-100)%
Концентраты 
образцов воды 100 (97,2-100)% 100 (98,2-100)%
Adenovirus  F
Фекалии 94,26 (90,1-100)% 99,81 (99,4-100)%
Концентраты 
образцов воды 100 (97,2-100)% 100 (98.2-100)%
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей  
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования
биологического материала на наличие возбудителей  
инфекционных болезней, с соблюдением СанПиН 3.3686-21  
«Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике  
инфекционных болезней», СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-  
эпидемиологические требования к содержанию территорий  
городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой  
воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху,
^ Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом. 
^Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом,
стр. 11 из 32


--- стр. 12 ---
почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных,  
общественных помещений, организации и проведению  
санитарно-противоэпидемических (профилактических)
мероприятий» и МУ 1.3.2569-09 «Организация работы  
лабораторий, использующих методы амплификации  
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим  
микроорганизмы 1-1\/ групп патогенности».
Набор реагентов предназначен для одноразового применения  
для проведения ПЦР-исследования указанного количества проб  
(см. раздел «Формы комплектации»).
Набор реагентов готов к применению согласно данной  
инструкции. Применять набор реагентов строго по назначению.
При работе необходимо всегда выполнять следующие  
требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,  
относительная влажность от 15 до 75%.
- Допускать к работе с набором реагентов только персонал,  
обученный методам молекулярной диагностики и правилам  
работы в клинико-диагностической лаборатории в  
установленном порядке.
- Не использовать набор реагентов, если нарушена  
внутренняя упаковка или внешний вид реагента не  
соответствует описанию.
- Не использовать набор реагентов, если не соблюдались  
условия транспортирования и хранения согласно инструкции.
- Не использовать набор реагентов по истечении срока  
годности.
- Использовать одноразовые неопудренные перчатки,  
лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с  
образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по  
окончании работы. Все операции проводятся только в  
перчатках для исключения контакта с организмом человека.
- Избегать вдыхания паров, контакта с кожей, глазами и  
слизистой оболочкой. Вреден при проглатывании. При  
контакте немедленно промыть пораженное место водой, при  
необходимости обратиться за медицинской помощью.
При использовании по назначению и соблюдении  
вышеперечисленных мер предосторожности набор реагентов  
безопасен.
стр. 12 ИЗ 32


--- стр. 19 ---
Были протестированы модельные образцы фекалий без  
добавления и с добавлением потенциально интерферирующих  
веществ. Концентрация каждого потенциального  
интерферирующего вещества указана в табл. 6. Модельные  
образцы фекалий содержали разведения стандартных образцов  
предприятия в концентрациях, соответствующих пределу  
обнаружения.
стр. 19 ИЗ 32


--- стр. 20 ---
Таблица 6
Вид
потенциального
интерферента
Потенциальный
интерферент
Протестированная
концентрация
Наличие
интерференции
Эндогенные
вещества
Цельная кровь
до 40% (объем 
интерферента к 
объему исследуемого 
образца)
Не обнаружено
Фекальные жиры
до 40% (объем 
интерферента к 
объему исследуемого 
образца)
Не обнаружено
Муцин (слизь)
до 3% (вес препарата 
к объему 
исследуемого 
образца)
Не обнаружено
Экзогенные
вещества
«Энтерофурил», 
суспензия для приема 
внутрь (Босналек АО, 
Босния и 
Герцеговина)
до 4,25 мг/мл Не обнаружено
«Энтеросгель», паста 
для приема внутрь 
(сладкая) («ТНК 
СИЛМА», Россия)
до 174,75 мг/мл Не обнаружено
Декстрин (Россия) до 68,6 мг/мл Не обнаружено
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов;
- экстракция ДНК/РНК из исследуемых образцов,
- обратная транскрипция РНК и амплификация ДНК/кДНК с  
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме  
«реального времени»,
- анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК/РНК из ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ  
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать  
только одноразовые пластиковые расходные материалы,  
имеющие специальную маркировку RNase-free, DNase-free.
Для экстракции ДНК/РНК используется комплект реагентов  
«РИБО-преп». Порядок работы с комплектом реагентов «РИБО-  
преп» смотрите в инструкции к комплекту для экстракции.
Объемы реагентов и образцов пои экстракции с помощью  
комплекта реагентов «РИБО-преп»:
стр. 20 из 32


--- стр. 21 ---
Экстракция ДНК/РНК из каждого исследуемого образца  
проводится в присутствии внутреннего контрольного образца -  
ВКО-РЬ.
Объем ВКО-Р1 - 10 мкл в каждую пробирку.
Объем исследуемого образца - 100 мкл.
В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК) внести  
100 мкл ОКО.
Объем элюции - 50 мкл.
ВНИМАНИЕ! Реакцию ОТ-ПЦР рекомендуется проводить сразу  
после получения проб ДНК/РНК. Допускается хранение проб  
РНК при температуре от 2 до 8 °С не более 30 мин, при  
температуре от минус 24 до минус 16 °С -  не более недели и при  
температуре не выше минус 68 °С -  до года. Допускается  
однократное замораживание-оттаивание проб ДНК/РНК.
стр. 21 ИЗ 32


--- стр. 22 ---
ФОРМА 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F  
СОСТАВ
«ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F - комплект реагентов для  
обратной транскрипции РНК и амплификации участков  
ДНК/кДНК выявляемых вирусов {Rotavirus А, Norovirus  GI и GII,  
Astrovirus, Adenovirus  F) с гибридизационно-флуоресцентной  
детекцией в режиме «реального времени» - позволяет  
проводить ПЦР-исследование в качественном формате.
ФОРМА 1 ______________________________
Реагент Описание Объем, мл Количество
ПЦР-смесь-FL ОКИ 
виро-скрин
Прозрачная жидкость от 
бесцветного до светло-лилового 
цвета
0,6 1 пробирка
ПЦР-буфер-С Прозрачная бесцветная жидкость 0,3 1 пробирка
Полимераза (TaqF) Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,03 1 пробирка
ТМ-Ревертаза
(MMIv) Прозрачная бесцветная жидкость 0.015 1 пробирка
RT-G-mix-2 Прозрачная бесцветная жидкость 0,015 1 пробирка
К+ ОКИ виро-скрин Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,2 1 пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная жидкость 0.5 1 пробирка
ОКО Прозрачная бесцветная жидкость 1.2 1 пробирка
Реагенты комплекта упакованы раздельно в соответствии с  
температурой хранения (см. раздел «Хранение»). Комплект  
реагентов состоит из 2-х частей: 1) температура хранения от 2  
до 8 °С; 2) температура хранения от минус 24 до минус 16 °С.  
Эксплуатационная документация в составе: инструкция по  
применению, паспорт качества набора реагентов, вкладыш к  
набору реагентов, краткое руководство к набору реагентов -  на  
бумажном носителе и на сайте Изготовителя ( www.amplisens.ru ).
РЕАКЦИЯ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ РНК И  
АМПЛИФИКАЦИЯ ДНК/кДНК С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ  
«РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать  
только одноразовые пластиковые расходные материалы,  
имеюидие специальную маркировку RNase-free, DNase-free.
стр. 22 из 32


--- стр. 23 ---
Выбор пробирок для проведения ОТ-ПЦР зависит от  
используемого амплификатора с системой детекции в  
режиме «реального времени».
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК/РНК и  
контрольных образцов используются одноразовые  
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для ОТ-ПЦР
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем  
пробы ДНК/РНК-10 мкл.
1. Рассчитать количество каждого реагента, требующееся для  
приготовления реакционной смеси. На одну реакцию  
требуется 10 мкл ПЦP-cмecи-FL ОКИ виро-скрин, 5 мкл  
ПЦР-буфера-С, 0,5 мкл лолимеразы (ТацР), 0,25 мкл ТМ-  
Ревертазы (ММ1у), 0,25 мкл РТ-С-т1х-2. Смесь готовить на  
общее число исследуемых и контрольных образцов  
(количество контрольных образцов см. в пункте 7) плюс запас  
на одну реакцию.
Сделать расчет на необходимое число реакций, включающее  
тестирование исследуемых и контрольных образцов, можно  
согласно расчетной таблице, приведенной в  
Приложении 1.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать  
непосредственно перед проведением ПЦР-исследования.
2. Разморозить пробирку с ПЦР-смесью-РЕ ОКИ виро-скрин.  
Перемешать содержимое всех реагентов ПЦР-комплекта,  
осадить капли на вортексе.
3. В отдельной пробирке подготовить реакционную смесь.  
Смешать необходимое количество ПЦР-смеси-РЕ ОКИ  
виро-скрин, ПЦР-буфера-С, полимеразы (ТацР), ТМ-  
Ревертазы (ММ1у), РТ-С-т!х-2, осадить капли на вортексе.
4. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов для  
ОТ-ПЦР исследуемых и контрольных проб.
5. Внести в каждую пробирку по 15 мкл приготовленной  
реакционной смеси. Неиспользованные остатки реакционной  
смеси выбросить.
6. В подготовленные пробирки внести по 10 мкл проб ДНК/РНК,  
полученных в результате экстракции из исследуемых  
образцов.
ФОРМА 1
стр. 23 из 32


--- стр. 27 ---
* В случае получения невалидного результата необходимо  
провести повторное ПЦР-исследование соответствующего  
исследуемого образца, начиная с этапа экстракции ДНК/РНК.  
ВНИМАНИЕ! Граничные значения а  указаны во вкладыше,  
прилагаемом к набору реагентов.
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,  
если получены правильные результаты для контролей  
этапов экстракции и ОТ-ПЦР в соответствии с табл. 11 и  
вкладышем, прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 11
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
ФОРМА 1
Конт­
роль
Контроли­
руемый 
этап ПЦР-  
исследо­
вания
Значение Of по каналу для флуорофора
РАМ JOE РОХ Су5 Су5.5
ОК Экстракция
ДНК/РНК
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
К- ОТ-ПЦР
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
отсутствует
или
определено
больше
граничного
к+ ОТ-ПЦР опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
опоеделено
меньше
граничного
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ОТ-ПЦР (К+) значение  
порогового цикла (Cf) по любому из указанных каналов для  
флуорофоров (см. табл. 11) отсутствует или превышает  
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию  
и детекцию для всех образцов, в которых не обнаружена  
специфическая ДНК/РНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по какому-  
либо из каналов для флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или  
ROX, и/или Су5.5 определено значение порогового цикла (Cf)  
менее граничного. Вероятна контаминация лаборатории  
продуктами амплификации или контаминация реагентов,  
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-
стр. 27 из 32


--- стр. 28 ---
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению  
и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР-  
исследование для всех образцов, в которых обнаружена  
специфическая ДНК/РНК, начиная с этапа экстракции  
ДНК/РНК.
3. Для отрицательного контроля ОТ-ПЦР (К-) по каналам для  
флуорофоров РАМ и/или JOE, и/или ROX, и/или Су5.5  
определено значение порогового цикла (Cf) менее  
граничного. Вероятна контаминация лаборатории  
продуктами амплификации или контаминация реагентов,  
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-  
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению  
и ликвидации источника контаминации и повторить  
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых  
обнаружена специфическая ДНК/РНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового  
цикла (Cf), при этом на графике флуоресценции отсутствует  
участок характерного экспоненциального подъема (график  
представляет собой приблизительно прямую линию).  
Необходимо проверить правильность выбранного уровня  
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.  
Если результат получен при правильном уровне пороговой  
линии (базовой линии), требуется повторно провести  
амплификацию и детекцию для этого образца.
ФОРМА 1 ______________________________________________________________
стр. 28 из 32


--- стр. 29 ---
СРОК г о д н о с т и . УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и 
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 15 мес. Набор реагентов с истекшим сроком  
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых  
реагентов соответствует сроку годности, указанному на  
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не  
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при  
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,  
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых  
транспортных средств. Допускается транспортирование при  
температуре от 2 до 25 °С не более 3 сут.
Хранение.
Форма 1. «ПЦР-комплект» вариант РРТ-50 Р хранить в  
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь-  
Р1 ОКИ виро-скрин, ПЦР-буфер-С, полимеразу (ТарР), ТМ-  
Ревертазу (ММ1у), РТ-0-т1х-2 хранить в морозильной камере  
при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-Р1 ОКИ  
виро-скрин хранить в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать  
регламентированный температурный режим.
стр. 29 из 32


--- стр. 30 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных  
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,  
указанным в технической и эксплуатационной документации, в  
течение указанного срока годности при соблюдении всех  
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту  
не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по  
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail:  
obtk@pcr.ru . Отзывы и предложения о продукции АмплиСенс® вы  
можете оставить, заполнив анкету потребителя на сайте:  
www.amplisens.ru .
При выявлении побочных действий, не указанных в  
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных  
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,  
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских  
работников при применении набора реагентов, рекомендуется  
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в  
уполномоченную государственную регулирующую организацию  
(в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере  
здравоохранения) в соответствии с действующим  
законодательством.
стр. 30 из 32


--- стр. 31 ---
с и м в о л ы , ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF Номер по каталогу
V
L O T Код партии
I V D Медицинское изделие 
для диагностики in vitro □3
V E R Дата изменения
Предел температуры
ш Л
Изготовитель
А
Содержимого достаточно 
для проведения п тестов
Использовать до
Обратитесь к инструкции 
по применению
Не допускать 
воздействия солнечного 
света
Дата изготовления 
Осторожно!
стр. 31 из 32