Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения тестостерона в сыворотке крови человека ("СтероидИФА-тестостерон") по ТУ 9398-228-98539446-2011 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/12294 от 18.11.2011 · класс риска 1

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Общий тестостерон ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 104 контракта, медианная цена за единицу 7 723 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДЕНА» 
Приказом Росздравнадзора
«УТВЕРЖДАЮ»
от« » 20 г.№
директор 
шр Био» 
|1^)^ев М.В. 
2011г.
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО
ОПРЕДЕЛЕНИЯ 
ТЕСТОСТЕРОНА 
В СБ1ВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА 
(«СтероидИФА-тестостерон»)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «СтероидИФА-тестостерон» предназначен для количествен­
ного определения тестостерона в сыворотке крови человека методом твердофазного им- 
муноферментного анализа.
1.2. Тестостерон — стероидный гормон с молекулярным весом 288,4 Да. Тестосте­
рон синтезируется главным образом в семенниках, а также, в существенно меньших коли­
чествах, в яичниках и коре надпочечников. Уровень тестостерона в крови является важ­
ным показателем при оценке функционального состояния семенников, диагностике гирсу­
тизма у женщин и ряда опухолевых заболеваний надпочечников, яичников и семенников.
1.3. Набор «СтероидИФА-тестостерон» рассчитан на проведение анализа в дубли­
катах 40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и од­
ной пробы для определения оптической плотности раствора ТМБ при использовании всех 
Стрипов одновременно (всего 96 определений).
Примечание: в случае дробного применения набор может быть использован только в 
течение месяца после вскрытия компонентов набора.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1.Принцип действия
В наборе «СтероидИФА-тестостерон» использован вариант конкурентного твердофаз­
ного иммуноферментного анализа. В лунках, при добавлении исследуемого образца и 
конъюгата тестостерон-пероксидаза, во время инкубации устанавливается равновесие ме­
жду конъюгатом и эндогенным тестостероном сыворотки крови в процессе связывания с 
антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связанного антитела­
ми конъюгата обратно пропорционально количеству тестостерона в исследуемом образце 
(Рисунок 1).


--- стр. 2 ---
Планшет с антителами 
к тестостерону
Конъюгат тестостерон-пероксид аза
Эндогенный тестостерон 
конкурирует с конъюгатом за 
связывание с антителами
Рисунок 1. Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. 
Степень окраски обратно пропорциональна концентрации тестостерона в анализируемых 
пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибро­
вочного графика рассчитывается концентрация тестостерона в исследуемых образцах.
2.2. Состав набора
• комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными 
на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к тестостерону, марки­
рован «Стрипы с моноклональными антителами к тестостерону» — 1 упаковка;
• - калибровочные пробы (КП), содержащие известные количества тестостеро­
на. Флаконы маркированы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», «Ка­
либровочная проба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», «Ка­
либровочная проба №6»; точные значения концентраций тестостерона в калибровочных 
пробах указаны на этикетках флаконов, ориентировочные - 0; 0,5; 1,5; 5; 15; 50 нмоль/л - 
6 флаконов (лиофилизованные препараты или жидкости по 0,5 мл);
• конъюгат тестостерон-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» - 1 флакон (18 мл);
• концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован 
«Буфер Р» - 1 флакон (14 мл);
• раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» - 1 флакон (14 мл);
• стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» - 1 флакон 
(14 мл);
• контрольная сыворотка с известным содержанием тестостерона, маркирована 
«Контрольная сыворотка» - 1 флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл);
• прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2- 
слойного полиэтилена).


--- стр. 3 ---
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Специфичность. Перекрестная реакция антител к тестостерону с другими сте­
роидами приведена в Таблице 1.
Таблица 1
СТЕРОИД Перекрестная реакция, %
Тестостерон 100
5-а-дигидротестостерон 9,8
Андростендиол 2,0
Андростенолон 0,2
Андростандион 1,3
Дегидроэпиандростерон 0,2
Кортизол 0,04
Прогестерон 0,1
Эстрон 0,06
Эстрадиол 0,9
Эстриол 0,02
3.2. Коэффициент вариации результатов определения тестостерона в одном и том 
же образце сыворотки крови человека с использованием набора «СтероидИФА- 
тестостерон» не превышает 8 %.
3.3. Линейность. Зависимость концентрации тестостерона в образцах сыворотки 
крови при разведении их калибровочной пробой №1 имеет линейный характер в диапазо­
не концентраций калибровочных проб №2 - №6 и составляет 90-110 %.
3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» 
тестостерона — проверка соответствия значения определяемой концентрации тестостеро­
на расчетной величине, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сы­
воротки и калибровочной пробы №3. Процент открытия составляет 90-110 %.
3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором концен­
трация тестостерона в сыворотке крови человека не превышает 0,2 нмоль/л.
3.6. Диапазон ожидаемых значений. Содержание тестостерона измеряли в сыво­
ротке крови, взятой с 9 до 11 часов у 70 здоровых лиц в возрасте 21-45 лет. Средняя кон­
центрация тестостерона в сыворотке крови 37 здоровых женщин составила в среднем 
1,8 нмоль/л (0,5^,3 нмоль/л); в сыворотке крови 33 здоровых м ужчин — 19,2 нмоль/л 
(12,1-38,3 нмоль/л).


--- стр. 4 ---
Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности метода, 
особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной лаборатории. По 
этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать предоставленные изгото­
вителем значения только до тех пор, пока специалистами лаборатории не будут определе­
ны диапазоны ожидаемых значений, характерных для конкретной популяции в месте рас­
положения лаборатории.
Примечание: в наборе «СтероидИФА-тестостерон» значения концентраций калиб­
ровочных проб выражены в нмоль/л. Для пересчета концентраций тестостерона в нг/мл 
необходимо значение концентрации в нмоль/л умножить на 0,288.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора — класс 1.
Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксич-
4.1.
4.2.
ными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 «Ла­
боратории медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1 Н раствор соляной кислоты. Избегать раз­
брызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на ко­
жу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством про­
точной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластико­
вые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые образцы 
являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное время со­
хранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набо­
ром, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
• Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптиче­
скую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
• прибор для встряхивания рамки со стрипами (шейкер), позволяющий производить 
встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при комнатной температуре (-Ы8...25°С);
• пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с из­
меняемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на 
1000-5000 мкл;
• пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, по­
зволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл;
стакан стеклянный подходящего объема;
вода дистиллированная;
бумага филътровальная;
перчатки резиновые или пластиковые;
1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода; 
контейнер для дезинфекции;
ванночки для внееения реагентов восьмиканалъной пипеткой.


--- стр. 5 ---
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После 
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После центрифу­
гирования сыворотку переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не разрешается использовать плазму крови, гемоли­
зированную или мутную сыворотку, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.3. Образцы сыворотки крови разрещается хранить при температуре +2...8°С не 
более 2-х суток; при необходимости более длительного хранения (до 3-х месяцев) реко­
мендуется аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре 
-20°С и ниже. Не допускается повторное замораживание образца.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо вьщержать при 
комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на 
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к использо­
ванию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной сыворотки 
перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стен­
кам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки перевернутыми на 
сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и контрольной сыворот­
кой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. Вьщержать флаконы в 
течение 10 минут при комнатной температуре без перемешивания. Затем, аккуратно на­
клоняя и вращая флаконы, перемешать их содержимое до полного растворения, избегая 
пенообразования. В течение следующих 10 минут выдержать флаконы при комнатной 
температуре, периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат готов к использованию. Расход конъюгата на один стрип состав­
ляет 1,5 мл.
7.1.4. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Р развести дистил­
лированной водой в 20 раз.
Например:
5 мл буфера Р + 95 мл дистиллированной воды.
Тщательно перемешать, избегая пенообразования.
7.1.5. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на 
один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.6. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип 
составляет 1,15 мл.
7.1.7. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно переме­
шаны и доведены до комнатной температуры.
В Приложении 1 приведена схема проведения анализа.


--- стр. 6 ---
7.2. Постановка анализа
Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим
- № 1 - для измерения величины оптичеекой плотности раствора ТМБ;
- № 2 - для измерения величины оптической плотности КП №1;
- № 3 - для измерения величины оптической плотности КП №2;
- № 4 - для измерения величины оптической плотности КП №3;
- № 5 - для измерения величины оптической плотности КП №4;
- № 6 - для измерения величины оптичеекой плотности КП №5;
- № 7 - для измерения величины оптической плотности КП №6;
- № 8 - для измерения величины оптической плотности контрольной сыво-
7.2.1.
образом:
А1, А2 
В1,В2 
С1,С2 
В1,П2 
Е1,Е2 
Е1,Е2 
01,02 
Н1,Н2 
ротки.
7.2.2. Внести в соответствующие лунки по 50 мкл калибровочных проб и контроль­
ной сыворотки, в оставшиеся лунки - по 50 мкл исследуемой сыворотки крови в дублика­
тах.
Примечание: общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки и 
исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации 
разных образцов будет значительно различаться, что приведет к неправильным резуль­
татам.
7.2.3. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 150 мкл конъюгата.
7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 1,5 часов при встряхивании на шейкере при 
комнатной температуре (+18...25°С) со скоростью 500-800 об/мин.
7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер е дезинфи­
цирующим раствором (1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси во­
дорода) и промыть лунки четыре раз а. При каждой промывке во все лунки добавить 
по 300 мкл промывочного раетвора, приготовленного по п. 7.1.4., встряхнуть рамку на 
шейкере в течение 5-10 еекунд е последующим декантированием. После последнего де­
кантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со 
Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройст­
ва.
7.2.6. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раетвора ТМБ. Инкубировать 
стрипы в темноте при комнатной температуре в течение 15-30 минут в зависимости от 
степени развития окраски.
7.2.7. Добавить во все лунки с той же екоростью и в той же поеледовательности, как 
и раетвор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, перемешать 
на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре.
7.2.8. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета непо­
средственно после выполнения п. 7.2.7., то следует иметь в виду, что окраска в лунках 
планшета стабильна не более 20 минут при комнатной температуре.
Примечание: максимальная оптическая плотность не должна превышать преде­
лов линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра не­
обходимо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая плот­
ность не более 2,5 ед. ОП.
I
]


--- стр. 7 ---
i
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в лунках 
при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать величину оптической плотности 
в лунках А1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
Примечание: среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках А1 и 
А2 не должно превышать 0,09 ед. ОП.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
9.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей от 
концентрации тестостерона в калибровочных пробах (нмоль/л) (Рисунок 2). Внешний вид 
графика зависит от способа преобразования осей.
Примечание 1: для построения калибровочных графиков рекомендуется использовать 
Программное обеспечение «ИФА Мастер».
Примечание 2: для построения калибровочного графика на масштабной бумаге необхо­
димо пользоваться формулой 1 ши 2.
Если программа фотометра позволяет вычитать величину оптической плотности в 
лунках А1 и А2 из значений оптическш плотностей всех остальных лунок, то для расче­
тов для каждой калибровочной ши исследуемой пробы использовать формулу:
В/В,х100%, (1)
где В - среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках, содер­
жащих калибровочные ши исследуемые пробы;
В} - среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках, содер­
жащих калибровочную пробу №1.
Если программа фотометра не позволяет вычитать величину оптической плотно­
сти в лунках А1 и А2, то использовать формулу:
(B-B t)/(B i-B t) x100%, (2)
где Вт  — среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках А1 и А2.
9.2. Определить содержание тестостерона в пробах по калибровочному графику.
гX
о«лTt
SаX
С ЗО
Log концентрации тестостерона, нмоль/л 
Рисунок 2. Типичный калибровочный график
Запрещается использовать для оценки реальных 
экспериментальных данных!