Набор реагентов "ДС-ИФА-Стероид-Тестостерон" тест-система иммуноферментная для количественного определения тестостерона по ТУ 9398-139-05941003-2009 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2009/06295 от 10.12.2009 · класс риска 2а

Производитель: ООО "НПО "Диагностические системы" (Россия)

Вид изделия: Общий тестостерон ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 166 контрактов, медианная цена за единицу 5 852 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
СПРАВКА  
о медицинском изделии 
на
Набор реагентов 
«ДС-ИФА-Стероид-Т естостерон»
Тест-система иммуноферментная для количественного 
определения тестостерона
1 . Описание изделия.
Набор реагентов «ДС-ИФА-Стероид-Тестостерон» предназначен для  
количественного определения содержания тестостерона в сыворотке крови человека  
методом твёрдофазного иммуноферментного анализа (ИФА).
Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 40 проб, одна проба  
контрольной сыворотки, шесть стандартных калибровочных проб и одна проба для  
определения оптической плотности ТМБ-Субстратного раствора при одновременном  
использовании всех стрипов планшета (всего 96 определений).
В случае дробного применения набора необходимо обязательное использование 
всех калибровочных проб при каждой постановке.
Тест-система представляет собой многокомпонентный набор для исследования 
сыворотки крови человека методом твёрдофазного иммуноферментного анализа (ИФА). 
Все компоненты тест-системы производятся на технологических участках ООО «Научно- 
производственное объединение «Диагностические системы».
Технологический процесс приготовления разработанной тест-системы состоит из 
следующих основных этапов:
1 . Приготовление и подготовка к комплектации иммуносорбента. Контроль  
специфической активности иммуносорбента.
2. Приготовление контрольных образцов (калибраторы, контрольная сыворотка).
3. Приготовление и подготовка к комплектации конъюгата.
4. Приготовление и подготовка к комплектации буферных растворов (ТМБ, ПР  
(концентрат х 25), стоп-реагента).
5. Комплектация, маркировка и упаковка тест-системы и контроль готовой  
продукции.
Набор состоит из 12 реагентов, каждый реагент в  индивидуальной упаковке.
Состав набора реагентов:
Характеристики реагентов Форма выпуска
Иммуносорбент - планшет полистироловый разборный (12 стрипов по 8 
лунок каждый, разборность до 1 лунки) с иммобилизованными на  
вну 1ренней поверхности лунок моноклональными антителами к  
тестостерону.
1 шт.
Конъюгат - тестостерон, меченный пероксидазой хрена. Прозрачная или  
опалесцирующая розового цвета жидкость.
В качестве консерванта содержит 0,1% про клин 300.
1 флакон 
12 ,0  мл


--- стр. 2 ---
Калибратор О , Калибратор 1, Калибратор 2, Калибратор 3, Калибратор 4, 
Калибратор 5  -  калибровочные пробы на основе сыворотки крови человека, 
содержащие известные количества тестостерона. Прозрачные или слегка 
опалесцирующие светло-желтого цвета жидкости. Концентрации  
тестостерона в калибровочных пробах указаны на этикетке флакона и в  
паспорте на набор.
В качестве консервантов содержат: 0,1% проклин 300, 0,1% фенол._________
6 флаконов 
по 0,5 мл
Контрольная сыворотка - на основе сыворотки крови человека с известным 
содержанием тестостерона. Прозрачная или слегка опалесцирующая светло- 
желтого цвета жидкость.
В качестве консервантов содержит: 0,1% проклин 300, 0,1% фенол._________
1 флакон 
0,5 мл
ПР (концентрат х 25) -  промывочный раствор, концентрат. Прозрачная или 
слегка опалесцирующая, бесцветная или светло-жёлтого цвета жидкость.
1 флакон 
50,0 мл
ТМБ-Субстратный раствор - прозрачная бесцветная жидкость. 1 флакон 
14,0 мл
Стоп-реагент/0,2М - серная кислота в  концентрации 0,2 моль/л. Прозрачная 
бесцветная жидкость.
1 флакон 
25,0 мл
Бланк для построения калибровочной кривой I шт.
Инструкция по применению 1 шт.
Дополнительно в  комплект поставки могут быть включены:
-  крышка к полистироловым 96-луночным разборным планшетам или защитная 
пленка для ИФА планшетов;
-  одноразовые наконечники к полуавтоматическим пипеткам;
-  пластиковая ванночка для реагентов;
-  пластиковая скрепка для закрывания пакета с иммуносорбентом или  
полиэтиленовый пакет с замком.
2. Описание принципа действия изделия.
Метод определения основан на твердофазном конкурентном иммуноферментном 
анализе с применением моноклональных антител. В лунках планшета, при добавлении 
исследуемого образца и конъюгата тестостерон-пероксидаза, во время инкубации  
происходит конкурентное связывание сывороточного тестостерона и тестостерона,  
конъюгированного с пероксидазой, с моноклональными антителами к тестостерону,  
иммобилизованными на внутренней поверхности лунок планшета.
При удалении содержимого из лунок происходит разделение свободного и  
связанного антителами тестостерона и конъюгата тестостерон-пероксидаза, причем  
количество связанного антителами конъюгата обратно пропорционально концентрации 
тестостерона в анализируемом образце сыворотки крови.
Во время инкубации с ТМБ-Субстратным раствором происходит окрашивание  
раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству связанного  
антителами конъюгата тестостерон-пероксидаза. После измерения оптической плотности 
раствора в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация 
тестостерона в исследуемых образцах.
3. Функциональные характеристики изделия.
Действующим началом разработанной тест-системы «ДС-ИФА-Стероид-  
Тестостерон» являются:
Иммуносорбент - 96-луночный разборный полистироловый планшет (12 стрипов 
по 8 лунок каждый, разборность до 1 лунки) с иммобилизованными на внутренней  
поверхности лунок моноклональными антителами к тестостерону.
Конъюгат, жидкий - тестостерон, меченный пероксидазой хрена.


--- стр. 3 ---
Общая продолжительность анализа;
60 мин. (37,0 ± 0,5 °С, шейкер).
Количество исследуемого образца -  25 мкл.
Учет результатов проводят спектрофотометрически при длине волны 450 нм. 
Количество проб: 96 определений, включая контрольные.
Срок годности -  1 8  мес.
Заместитель генерального директора 
ООО «Научно-производственное 
объединение «Диагностические системы» Шлюндин
2 0 1 2 г.


--- стр. 4 ---


--- стр. 5 ---
I
СПРАВКА  
о медицинском изделии 
на
Набор реагентов 
«ДС-ИФА-Стероид-Тестостерон»
Тест-система иммуноферментиая для количественного 
определения тестостерона
1 . Описание изделия.
Набор реагентов «ДС-ИФА-Стероид-Тестостерон» предназначен для  
количественного определения содержания тестостерона в  сыворотке крови человека 
методом твёрдофазного иммуноферментного анализа (ИФА).
Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 40 проб, одна проба  
контрольной сыворотки, шесть стандартных калибровочных проб и одна проба для  
определения оптической плотности ТМБ-Субстратного раствора при одновременном  
использовании всех стрипов планшета (всего 96 определений).
В случае дробного применения набора необходимо обязательное использование 
всех калибровочных проб при каждой постановке.
Тест-система представляет собой многокомпонентный набор для исследования 
сыворотки крови человека методом твёрдофазного иммуноферментного анализа (ИФА). 
Все компоненты тест-системы производятся на технологических участках ООО «Научно- 
производственное объединение «Диагностические системы».
Технологический процесс приготовления разработанной тест-системы состоит из 
следующих основных этапов:
1 . Приготовление и подготовка к комплектации иммуносорбента. Контроль  
специфической активности иммуносорбента.
2. Приготовление контрольных образцов (калибраторы, контрольная сыворотка).
3. Приготовление и подготовка к комплектации конъюгата.
4. Приготовление и подготовка к комплектации буферных растворов (ТМБ, ПР  
(концентрат х 25), стоп-реагента).
5. Комплектация, маркировка и упаковка тест-системы и контроль готовой  
продукции.
Набор состоит из 12 реагентов, каждый реагент в  индивидуальной упаковке.
Состав набора реагентов:
Характеристики реагентов Форма выпуска
Иммуносорбент - планшет полистироловый разборный (12 стрипов по 8 
лунок каждый, разборность до 1 лунки) с иммобилизованными на  
внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к  
тестостерону.
1 шт.
Конъюгат - тестостерон, меченный пероксидазой хрена. Прозрачная или  
опалесцирующая розового цвета жидкость.
В качестве консерванта содержит 0,1% проклин 300.
1 флакон 
12 ,0  мл


--- стр. 6 ---
Калибратор О , Калибратор 1 , Калибратор 2, Калибратор 3, Калибратор 4, 
Калибратор 5  -  калибровочные пробы на основе сыворотки крови человека, 
содержащие известные количества тестостерона. Прозрачные или слегка 
опалесцирующие светло-желтого цвета жидкости. Концентрации  
тестостерона в калибровочных пробах указаны на этикетке флакона и в  
паспорте на набор.
В качестве консервантов содержат: 0,1% проклин 300, 0,1% фенол.__________
6 флаконов 
по 0,5 мл
Контрольная сыворотка - на основе сыворотки крови человека с известным 
содержанием тестостерона. Прозрачная или слегка опалесцирующая светло- 
желтого цвета жидкость.
В качестве консервантов содержит: 0,1% проклин 300, 0,1% фенол.
1 флакон 
0,5 мл
ПР (концентрат х 25) -  промывочный раствор, концентрат. Прозрачная или 
слегка опалесцирующая, бесцветная или светло-жёлтого цвета жидкость.
1 флакон 
50,0 мл
ТМБ-Субстратный раствор - прозрачная бесцветная жидкость. 1 флакон 
14,0 мл
Стоп-реагент/0,2М - серная кислота в концентрации 0,2 моль/л. Прозрачная 
бесцветная жидкость.
1 флакон 
25,0 мл
Бланк для построения калибровочной кривой 1 шт.
Инструкция по применению 1 шт.
Дополнительно в комплект поставки могут быть включены:
-  крышка к полистироловым 96-луночным разборным планшетам или защитная 
пленка для ИФА планшетов;
-  одноразовые наконечники к полуавтоматическим пипеткам;
-  пластиковая ванночка для реагентов;
-  пластиковая скрепка для закрывания пакета с иммуносорбентом или  
полиэтиленовый пакет с замком.
2. Описание принципа действия изделия.
Метод определения основан на твердофазном конкурентном иммуноферментном 
анализе с применением моноклональных антител. В лунках планшета, при добавлении 
исследуемого образца и конъюгата тестостерон-пероксидаза, во время инкубации  
происходит конкурентное связывание сывороточного тестостерона и тестостерона,  
конъюгированного с пероксидазой, с моноклональными антителами к тестостерону,  
иммобилизованными на внутренней поверхности лунок планшета.
При удалении содержимого из лунок происходит разделение свободного и  
связанного антителами тестостерона и конъюгата тестостерон-пероксидаза, причем  
количество связанного антителами конъюгата обратно пропорционально концентрации 
тестостерона в анализируемом образце сыворотки крови.
Во время инкубации с ТМБ-Субстратным раствором происходит окрашивание  
раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству связанного  
антителами конъюгата тестостерон-пероксидаза. После измерения оптической плотности 
раствора в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация 
тестостерона в исследуемых образцах.
3. Функциональные характеристики изделия.
Действующим началом разработанной тест-системы «ДС-ИФА-Стероид-  
Тестостерон» являются:
Иммуносорбент - 96-луночный разборный полистироловый планшет (12 стрипов 
по 8 лунок каждый, разборность до 1 лунки) с иммобилизованными на внутренней  
поверхности лунок моноклональными антителами к тестостерону.
Конъюгат, жидкий - тестостерон, меченный пероксидазой хрена.


--- стр. 7 ---
/
/
7
Общая продолжительность анализа:
60 мин. (37,0 ± 0,5 °С, шейкер).
Количество исследуемого образца -  25 мкл.
Учет результатов проводят спектрофотометрически при длине волны 450 нм. 
Количество проб: 96 определений, включая контрольные.
Срок годности -  18 мес.
Заместитель генерального директора 
ООО «Научно-производственное 
объединение «Диагностические системы» Шлюндин
2 0 1 2 г.


--- стр. 9 ---
Приказом Росздравнадзора Гене^алюый директор
от 200 г. 0(50  «На^но-ироизводственное
№ { эбъединениег
^системы»
Е. Колосов
УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»
П (
набора реагентов для количественного определения  
тестостерона методом иммуноферментного анализа  
(ДС-ИФ А-Стероид-Т естостерон)
1. Назначение
1.1. Набор реагентов ДС-ИФА-Стероид-Тестостерон предназначен для  
количественного определения содержания тестостерона в сыворотке крови  
человека методом твёрдофазного иммуноферментного анализа (ИФА).
1.2. Тестостерон -  стероидный гормон с молекулярной массой
288,4 Да, является одним из наиболее важных гормонов мужчин.  
Тестостерон ответственен за развитие мужских половых органов и  
вторичных половых признаков. Основным местом образования тестостерона  
является интерстициальная ткань семенников. У женщин тестостерон  
синтезируется в надпочечниках и яичниках. Секреция тестостерона  
подчиняется суточному ритму -  максимальная концентрация тестостерона в  
6 ч утра, минимальная -  в 20 ч. У женщин продукция тестостерона зависит от  
фазы менструального цикла: максимальное количество наблюдается в  
лютеиновой фазе и в период овуляции. Количественное определения уровня  
тестостерона в крови имеет диагностическое значение при оценке  
функционального состояния семенников, диагностике гирсутизма у женщин  
и некоторых опухолевых заболеваний надпочечников, яичников и  
семенников.
1


--- стр. 10 ---
л
/
1.3. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 48 проб  
(40 неизвестных проб, шесть калибровочных проб, одна проба контрольной  
сыворотки, одна проба для определения оптической плотности ТМБ -  
Субстратного раствора) при одновременном использовании всех стрипов  
планшета.
В случае дробного применения набора необходимо обязательное  
использование всех калибровочных проб при каждой постановке; набор  
может быть использован в течение месяца после вскрытия реагентов набора.
2. Характеристика набора
2.1. Принцип действия
Метод определения основан на твердофазном конкурентном  
иммуноферментном анализе с применением моноклональных антител. В  
лунках планшета, при добавлении исследуемого образца и конъюгата  
тестостерон-пероксидаза, во время инкубации происходит конкурентное  
связывание сывороточного тестостерона и тестостерона, конъюгированного с  
пероксидазой, с моноклональными антителами к тестостерону,  
иммобилизованными на внутренней поверхности лунок планшета.
При удалении содержимого из лунок происходит разделение  
свободного и связанного антителами тестостерона и конъюгата тестостерон-  
пероксидаза, причем количество связанного антителами конъюгата обратно  
пропорционально концентрации тестостерона в анализируемом образце  
сыворотки крови.
Во время инкубации с ТМБ-Субстратным раствором происходит  
окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна  
количеству связанного антителами конъюгата тестостерон-пероксидаза.  
После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании  
калибровочного графика рассчитывается концентрация тестостерона в  
исследуемых образцах.
2.2. Состав набора:


--- стр. 11 ---
-им м уносорбент -  полистироловый 96-луночный разборный планшет  
(12 стрипов по 8 лунок каждый) с иммобилизованными на внутренней  
поверхности лунок моноклональными антителами к тестостерону,  
маркирован «Р1ммуносорбент» —  1  шт;
-конъю гат - тестостерон, меченный пероксидазой хрена, маркирован  
«Конъюгат» —  1  фл. (12 мл);
- 6  калибровочных проб на основе сыворотки крови человека,  
содержащих известные количества тестостерона: О  нмоль/л; 0,5 нмоль/л;
5 нмоль/л; 10 нмоль/л; 20 нмоль/л и 40 нмоль/л; концентрации тестостерона  
в калибровочных пробах могут несколько отличаться от указанных величин,  
точные величины указаны на этикетке флакона и в паспорте на набор -  6 фл.  
(по 0,5 мл);
-контрольная сыворотка на основе сыворотки крови человека с  
известным содержанием тестостерона, маркирована «Контрольная  
сыворотка» - 1  фл. (0,5 мл);
-промывочный раствор, 25-кратный концентрат, маркирован «ПР» -  
1  фл. (50 мл);
-  ТМБ-Субстратный раствор - 1  фл. (12 мл);
-стоп-реагент (0,2 М серная кислота), маркирован «Стоп-реагент» -  
1  фл. (15 мл);
-  бланк для построения калибровочной кривой -  1  шт.
По согласованию с потребителем дополнительно в комплект поставки  
могут быть включены:
-крышка к полистироловым 96-луночным разборным планшетам;  
-одноразовы е наконечники к полуавтоматическим пипеткам;  
-пластиковая ванночка для реагентов;
-пластиковая скрепка для закрывания пакета с иммуносорбентом.


--- стр. 12 ---
г
3. Аналитические и диагностические характеристики набора
3.1. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая  
набором концентрация тестостерона в сыворотке крови человека не  
превышает 0,2 нмоль/л.
3.2. Специфичность. Величины перекрестных реакций с родственными  
соединениями приведены в таблице.
Таблица
К р о с с -р е а ге н т К р о с с -р е а к т и в н о с ть , %
тестостерон 100
тестостерон 0,056
кортизол 0,004
эстрадиол 0,005
дигидротестостерон 4,8
андростендион 3,6
андростерон 0,048
кортизон 0,004
эстриол 0,002
эстрон 0,007
3.3. Коэффициент вариации результатов определения тестостерона в  
одном и том же образце сыворотки крови с использованием набора не  
превышает 8%.
3.4. Линейность. Зависимость концентрации тестостерона в образцах  
сыворотки крови при разведении их калибровочной пробой О  нмоль/л имеет  
линейных характер в диапазоне концентраций 0,5 - 40 нмоль/л и составляет
± 10%.
3.5. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на  
«открытие» тестостерона - соответствие измеренной концентрации  
тестостерона предписанной в пробе, полученной смешением равных объемов  
контрольной сыворотки и калибровочной пробы 5 нмоль/л. Процент  
открытия составляет 90 - 110%.


--- стр. 13 ---
;
3.6. Клиническая проверка. Концентрацию тестостерона измеряли в  
сыворотке крови, взятой с 9 до 11 ч у  150 здоровых людей в возрасте от 21 до  
45 лет. Средняя концентрация тестостерона в сыворотке крови 95 здоровых  
мужчин составила 19,0 нмоль/л (от 6,4 до 31,6 нмоль/л), 55 здоровых женщин  
составила 2,3 нмоль/л (от 0,2 до 4,4 нмоль/л).
3.7. Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора  
уточнить значения концентраций тестостерона, соответствующие  
нормальным значениям для обследуемого контингента лиц.
4. Меры предосторожности
4.1. Потенциальный риск применения набора —  класс 2а.
4.2. В се компоненты набора в используемых концентрациях являются  
нетоксичными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать «Правила устройства,  
техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического  
режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах)  
санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства  
здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
4.4. Стоп-реагент представляет собой 0,2 М раствор серной кислоты.  
Избегать разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае  
попадания раствора стоп-реагента на кожу и слизистые необходимо промыть  
пораженный участок большим количеством проточной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые  
или пластиковые перчатки, т.к. кровь человека является потенциально  
инфицированным материалом, способным длительное время сохранять и  
передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусных  
инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в  
работе с набором, должны быть соответствующим образом маркированы и  
храниться отдельно.


--- стр. 15 ---
температуре минус 20 С и ниже не более 3 месяцев (образцы могут  
подвергаться замораживанию и оттаиванию не более 1  раза). Образцы с  
бактериальным ростом, выраженным гемолизом и гиперлипидемией  
анализировать нельзя! Образцы сыворотки крови, содержащие агрегаты или  
осадок, необходимо осветлять центрифугированием при 1000-2000 об/мин в  
течение 15 минут при температуре 2 - 8 Т .
7. Подготовка реагентов для анализа
7.1. Перед проведением анализа компоненты набора и анализируемые  
образцы сыворотки крови следует выдержать при комнатной температуре  
(18 - 25 °С) в течение времени не менее 30 минут.
7.2. Иммуносорбент. Внимание: во избежание конденсации влаги  
внутри лунок необходимо выдержать иммуносорбент при комнатной  
температуре (18-25  "С) в закрытом пакете не менее 30 минут!
Вскрыть фольгированный пакет, отступив 1,0 см от края пакета.  
Вынуть из пакета рамку и переставить на рамку необходимое количество  
стрипов. Оставшиеся неиспользованными стрипы поместить в тщательно  
герметизированный пакет и хранить при температуре 2 - 8 °С в течение всего  
срока годности набора.
7.3. Приготовление рабочего промывочного раствора.
Содержимое флакона с концентратом ПР тщательно перемешать. Для
приготовления рабочего ПР необходимое количество концентрата  
промывочного раствора развести в 25 раз водой дистиллированной  
(например, к 10 мл концентрата ПР добавить 240 мл дистиллированной  
воды). Полученный раствор тщательно перемешать.
7.4. Коньюгат, калибровочные пробы, контрольная сыворотка, ТМБ-  
Субстратный раствор и стоп-реагент готовы к применению.
8. Проведение анализа.
8.1. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно
7


--- стр. 16 ---
/
перемешаны и доведены до комнатной температуры.
8.2. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать  
следующим образом:
А1, А2 - № I для измерения величины оптической плотности (ОП)  
калибровочной пробы О  нмоль/л;
В1, В2 -  № 2 для измерения величины ОП калибровочной пробы
0,5 нмоль/л;
С1, С2 - № 3 для измерения величины ОП калибровочной пробы  
5 нмоль/л;
D1, D2 - № 4 для измерения величины ОП калибровочной пробы  
10 нмоль/л;
Е1, Е2, - № 5 для измерения величины ОП калибровочной пробы  
20 нмоль/л;
F1, F2 - № 6 для измерения величины ОП калибровочной пробы  
40 нмоль/л;
G1, G2 - № 7 для измерения величины ОП контрольной сьгеоротки;
Н1, Н2 - № 8 для измерения величины ОП раствора ТМБ-  
Субстратного раствора.
Внести в соответствующие лунки по 25 мкл калибровочных проб и  
контрольной сыворотки, в остальные лунки -  по 25 мкл исследуемых  
сывороток крови в дубликатах.
Внимание! Время внесения образцов не должно превышать 10 минут!
8.3. Во все лунки планшета, кроме Н1 и Н2, внести по 100 мкл  
конъюгата, закрыть планшет крышкой и инкубировать на шейкере при  
встряхивании со скоростью от 500 до 800 об/мин в течение 30 минут при  
температуре (37 ± 0,5) °С.
8.4. По окончании инкубации содержимое лунок удалить с помощью  
промывочного устройства в ёмкость для сбора инфицированного материала,  
планшет промыть 5 раз рабочим ПР (см. п. 7.3), добавляя во все лунки  
планшета по 300 мкл рабочего ПР и удаляя рабочий ПР с помощью


--- стр. 17 ---
промывочного устройства в ёмкость для сбора инфицированного материала.  
После последнего промывания тщательно удалить остатки жидкости из  
лунок постукиванием рамки со стрипами в перевернутом положении по  
фильтровальной бумаге.
8.5. Немедленно внести во все лунки планшета по 100 мкл ТМБ-  
Субстратный раствора и инкубировать планшет в темноте при комнатной  
температуре ( 1 8 - 2 5  °С) в течение 20 -  30 минут в зависимости от степени  
развития окраски.
8.6. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же  
последовательности, как и ТМБ-Субстратный раствор, по 150 мкл стоп-  
реагента для остановки ферментной реакции и встряхнуть планшет на  
шейкере в течение 30 секунд.
9. Регистрация результатов
Измерить на фотометре вертикального сканирования ОП раствора в  
лунках планшета при длине волны 450 нм.
Если по техническим причинам невозможно измерить ОП растворов в  
лунках планшета непосредственно после выполнения п. 8.6., следует иметь  
в виду, что окраска раствора в лунках планшета стабильна в течение  
времени не более 20 минут при комнатной температуре ( 1 8 - 2 5  °С).
10. Учет результатов
Если программа фотометра позволяет вьгаитать величину ОП в лунках  
Н1 и Н2 из значений ОП всех остальных лунок, то для дальнейших расчетов  
необходимо использовать формулу В/Во* 100% для каждой калибровочной  
или исследуемой пробы, где В -  среднее арифметическое значение ОП в  
лунках, содержащих калибровочные или исследуемые пробы. Если  
профамма фотометра не позволяет вычитать величину ОП в лунках Н1 и Н2,  
то необходимо пользоваться формулой (В -  Вт)/(Во - Вт)* 100%, где By -  
среднее арифметическое значение величины ОП в лунках Ш  и Н2.